Métodos de despliegue de proteínas que contienen dominios Fc no covalentes sobre la superficie de células y métodos de selección de las mismas.

Método para el despliegue de proteínas sobre la superficie de una célula huésped,

comprendiendo el método:

(a) introducir en una célula huésped al menos uno o más polinucleótidos que codifican una proteína de interés que se desea desplegar sobre la superficie de dicha célula huésped, en el que la proteína de interés comprende al menos un dominio Fc;

(b) poner en contacto la superficie de dicha célula huésped con una cebadora etiqueta, donde dicha cebadora etiqueta es biotina, un derivado de biotina o un análogo de biotina o se une covalentemente a la superficie de dicha célula huésped;

(c) poner en contacto la superficie de dicha célula huésped de (b) con una segunda etiqueta, donde la segunda etiqueta se une específicamente y no de forma covalente a dicha cebadora etiqueta y a dicha proteína de interés codificada por dichos al menos uno o más polinucleótidos, donde la segunda etiqueta es una proteína multimérica, que es o comprende una de entre proteína A, proteína L, proteína G, fusión de proteínas A-G, dominios E, D, A, B de la proteína A, fusionada con avidina, estreptavidina, neutravidina;

(d) expresar dicho al menos uno o más polinucleótidos en dicha célula huésped en condiciones suficientes para la secreción de dicha proteína de interés codificada por el al menos uno o más polinucleótidos;

(e) poner en contacto dichas células huésped de la etapa (d) con medios para detectar específicamente dicha proteína de interés unida no covalentemente mediante dicha segunda etiqueta y detectar las células huésped que despliegan la proteína de interés sobre su superficie, donde el medio para detectar específicamente dicha proteína de interés es uno de entre un anticuerpo policlonal, anticuerpo monoclonal, scFv-Fc, scFv, (Fab')2, Fab, minianticuerpo, dianticuerpo o anticuerpo VHH; opcionalmente acoplado a una etiqueta adicional y donde la etiqueta adicional es una etiqueta fluorescente o radioisótopo.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2015/002125.

Solicitante: MERCK PATENT GMBH.

Nacionalidad solicitante: Alemania.

Dirección: FRANKFURTER STRASSE 250 64293 DARMSTADT ALEMANIA.

Inventor/es: BECKER, STEFAN, HOCK,Bjoern, HELMAN,DANIEL, TOISTER-ACHITUV,MIRA, RHIEL,LAURA, GUENTHER,RALF, KRAH,SIMON.

Fecha de Publicación: 10 de Julio de 2019.

Clasificación Internacional de Patentes:

C07K14/315 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › de Streptococcus (G), p. ej. Enterococci.
C07K14/36 C07K 14/00 […] › de Actinomyces; de Streptomyces (G).
C12N1/19 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 1/00 Microorganismos, p.ej. protozoos; Composiciones que los contienen (preparaciones de uso médico que contienen material de protozoos, bacterias o virus A61K 35/66, de algas A61K 36/02, de hongos A61K 36/06; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos bacterianos, p. ej. vacunas bacterianas, A61K 39/00 ); Procesos de cultivo o conservación de microorganismos, o de composiciones que los contienen; Procesos de preparación o aislamiento de una composición que contiene un microorganismo; Sus medios de cultivo. › modificados por la introducción de material genético extraño.
C12N15/10 C12N […] › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).
C12N15/31 C12N 15/00 […] › Genes que codifican proteínas microbianas, p. ej. enterotoxinas.
C12N15/62 C12N 15/00 […] › Secuencias de ADN que codifican proteínas de fusión.
C12N5/10 C12N […] › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células modificadas por introducción de material genético extraño, p. ej. células transformadas por virus.

PDF original: ES-2749716_T3.pdf

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