Detección de polimorfismo mononucleotídico usando cebador y sonda de fusión superpuestos.
Un procedimiento para detectar un polimorfismo mononucleotídico (SNP) en un ácido nucleico diana en una muestra,
comprendiendo el procedimiento:
- realizar una etapa de amplificación que comprende poner en contacto la muestra con un cebador oligonucleotídico que comprende una secuencia de ácido nucleico natural para producir un producto de amplificación si cualquier ácido nucleico diana está presente en la muestra;
- realizar una etapa de hibridación que comprende poner en contacto el producto de amplificación con una sonda de fusión oligonucleotídica, comprendiendo dicha sonda de fusión oligonucleotídica una secuencia de ácido nucleico que tiene una temperatura de fusión predefinida, en el que la secuencia de ácido nucleico de la sonda de fusión oligonucleotídica se superpone a la secuencia de ácido nucleico natural del cebador oligonucleotídico con una superposición mínima de al menos un 80 % a lo largo de la longitud de la secuencia de ácido nucleico natural;
en el que la secuencia de ácido nucleico de la sonda oligonucleotídica comprende una segunda secuencia de ácido nucleico natural o una secuencia de ácido nucleico específica de SNP;
en el que la secuencia de ácido nucleico de la sonda de fusión oligonucleotídica tiene la misma secuencia que la secuencia de ácido nucleico natural del cebador oligonucleotídico a lo largo de la superposición; y
en el que la secuencia de ácido nucleico de la sonda de fusión oligonucleotídica se extiende a lo largo de la secuencia de ácido nucleico natural del cebador oligonucleotídico en un extremo en un nucleótido a lo largo de donde el SNP se localiza; y
- detectar la presencia o ausencia del SNP en el producto de amplificación,
en el que una variación decreciente en la temperatura de fusión predefinida de la sonda de fusión oligonucleotídica es indicativa de la presencia del SNP en la muestra y en el que la ausencia de una variación decreciente en la temperatura de fusión predefinida de la sonda de fusión oligonucleotídica es indicativa de la ausencia del SNP en la muestra si la sonda de fusión oligonucleotídica comprende una segunda secuencia de ácido nucleico natural, o
en el que una variación decreciente en la temperatura de fusión predefinida de la sonda de fusión oligonucleotídica es indicativa de la ausencia del SNP en la muestra y en el que la ausencia de una variación decreciente en la temperatura de fusión predefinida de la sonda de fusión oligonucleotídica es indicativa de la presencia del SNP en la muestra si la sonda de fusión oligonucleotídica comprende una secuencia de ácido nucleico específica de SNP,
en el que el ácido nucleico diana comprende una región no conservada con una o más mutaciones sinónimas localizadas donde el cebador se hibrida al ácido nucleico diana.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2014/074111.
Solicitante: F. HOFFMANN-LA ROCHE AG.
Nacionalidad solicitante: Suiza.
Dirección: GRENZACHERSTRASSE 124 4070 BASEL SUIZA.
Inventor/es: JOHNSON,JENNY A.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12Q1/6816 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › caracterizados por los medios de detección (C12Q 1/6804 tiene prioridad).
- C12Q1/6827 C12Q 1/00 […] › para detección de mutaciones o polimorfismos.
- C12Q1/6848 C12Q 1/00 […] › caracterizados por los medios para evitar la contaminación o para incrementar la especificidad o la sensibilidad de una reacción de amplificación.
PDF original: ES-2773873_T3.pdf
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