Detección de ácidos nucleicos diana usando hibridación.
Un procedimiento para diferenciar entre alelos de un locus en una muestra,
en el que la muestra es una muestra materna que comprende ADN tanto materno como fetal,
introduciendo en la muestra dos conjuntos de oligonucleótidos de secuencia fija,
en el que los dos conjuntos de oligonucleótidos de secuencia fija se proporcionan para un único locus que tiene un posible polimorfismo, en el que cada conjunto comprende:
(i) un primer oligonucleótido de secuencia fija que comprende
una secuencia complementaria a un alelo del locus, una región de unión a marcador, una región de captura, una región de cebador universal y dos sitios de reconocimiento de enzima de restricción,
en el que las regiones de unión a marcador comprenden secuencias que son diferentes para los conjuntos de oligonucleótidos de secuencia fija para permitir el marcaje diferencial de oligonucleótidos de secuencia fija asociados con cada alelo diferente, y en el que las regiones de captura son las mismas para ambos conjuntos de oligonucleótidos de secuencia fija para permitir la hibridación competitiva a las casillas de captura de una matriz de hibridación; y
(ii) un segundo oligonucleótido de secuencia fija que comprende una secuencia complementaria al locus seleccionado y una región de cebador universal;
permitiendo que los conjuntos de oligonucleótidos de secuencia fija se hibriden al locus;
añadiendo un oligonucleótido puente a cada conjunto e hibridando de forma adyacente entre los oligonucleótidos de secuencia fija hibridados;
ligando los oligonucleótidos para crear productos de ligación;
introduciendo cebadores universales a los productos de ligación, que los cebadores universales unen a las regiones de cebadores universales, para crear amplicones que comprenden regiones de unión a marcador, regiones de captura y sitios de reconocimiento de enzima de restricción;
introduciendo una o más enzimas de restricción en los amplicones y escindiendo doblemente los amplicones en los sitios de reconocimiento de enzima de restricción para crear amplicones escindidos, comprendiendo cada uno una región de unión a marcador y una región de captura;
introduciendo los amplicones escindidos en una matriz de hibridación que comprende una pluralidad de sondas de captura donde las regiones de captura de los amplicones escindidos se hibridan competitivamente a sondas de captura;
introduciendo los amplicones escindidos hibridados en oligonucleótidos marcados que se unen a secuencias complementarias en los amplicones escindidos;
detectando los oligonucleótidos marcados para diferenciar entre los diferentes alelos del locus.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2015/042604.
Solicitante: Ariosa Diagnostics, Inc.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 5945 Optical Court San Jose, CA 95138 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: OLIPHANT,ARNOLD, ZAHN,JACOB, JUNEAU,KARA, BOGARD,PATRICK, HUANG,STEPHANIE.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12Q1/6837 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › utilizando matrices ("arrays") o chips de sondas (C12Q 1/6874 tiene prioridad).
- C12Q1/6862 C12Q 1/00 […] › Reacción en cadena de la ligasa [LCR].
- C12Q1/6883 C12Q 1/00 […] › para enfermedades causadas por alteraciones del material genético.
PDF original: ES-2752237_T3.pdf
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