Síntesis de péptidos en fase sólida con BOC y FMOC.

Un método para preparar un péptido de fórmula H-D-β-Nal-[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys]-Thr-NH2,

en donde dicho método comprende las etapas de:

(a) anclar un primer aminoácido a una resina de soporte sólido a través de un enlace éster para formar un primer producto acoplado, que comprende (i) hacer reaccionar una solución acuosa de carbonato de cesio con una solución de alcohol del primer aminoácido para formar una sal de cesio del primer aminoácido, (ii) obtener una sal de cesio libre de disolvente del primer aminoácido, (iii) hacer reaccionar la resina de soporte sólido con la sal de cesio del primer aminoácido en un disolvente aprótico polar seco para formar la primera HL-Thr-resina acoplada producto, en donde el primer aminoácido es Boc-L-Thr correspondiente al aminoácido C-terminal del péptido, y la resina de soporte sólido es una resina de poliestireno clorometilado;

(b) desbloquear el Boc del primer producto acoplado con un ácido para formar un primer producto acoplado desbloqueado;

(c) acoplar un siguiente aminoácido que tiene un grupo amino que no forma parte de la cadena lateral bloqueado por Fmoc al primer producto acoplado desbloqueado de (b), que comprende hacer reaccionar el siguiente aminoácido que tiene un grupo amino que no forma parte de la cadena lateral bloqueado por Fmoc con dicho primer producto acoplado desbloqueado en un disolvente orgánico que es cloruro de metileno, cloroformo, dimetilformamida o una combinación de los mismos, que comprende un reactivo de acoplamiento peptídico que es diisopropilcarbodiimida, diciclohexilcarbodiimida o N-etil-N'-(3-dimetilaminopropil)- carbodiimida, para formar un siguiente producto acoplado bloqueado que tiene un grupo amino que no forma parte de la cadena lateral bloqueado por Fmoc, con la condición de que si el siguiente aminoácido que tiene un grupo amino que no forma parte de la cadena lateral bloqueado por Fmoc tiene una o más funcionalidades de la cadena lateral, las funcionalidades de la cadena lateral no requieren protección o las funcionalidades de la cadena lateral tienen grupos protectores que son estables a los reactivos alcalinos utilizados para desbloquear Fmoc;

(d) desbloquear el Fmoc del siguiente producto acoplado bloqueado que tiene un grupo amino que no forma parte de la cadena lateral bloqueado por Fmoc, que comprende hacer reaccionar el siguiente producto acoplado bloqueado que tiene un grupo amino que no forma parte de la cadena lateral bloqueado por Fmoc con un amina primaria o secundaria para producir un siguiente producto acoplado desbloqueado;

(e) acoplar Boc-D-β-Nal a H-Cys(Acm)-Tyr(O-t-Bu)-D-Trp-Lys(Boc)-Val-Cys(Acm)-Thr-resina, que comprende hacer reaccionar Boc-D-β-Nal con H-Cys(Acm)-Tyr(O-t-Bu)-D-Trp-Lys (Boc)-Val-Cys(Acm)-Thr-resina en un disolvente orgánico que comprende un reactivo de acoplamiento peptídico para formar la Boc-D-β-Nal-Cys- (Acm)-Tyr(O-t-Bu)-D-Trp-Lys(Boc)-Val-Cys(Acm)-Thr-resina acoplada bloqueada completada producto; (f) desbloquear simultáneamente el grupo Boc que bloquea D-β-Nal, el grupo O-t-Bu que protege Tyr y el grupo Boc que protege Lys de Boc-D-β-Nal-Cys(Acm)-Tyr(O-t-Bu)-D-Trp-Lys(Boc)-Val-Cys(Acm)-Thr-resina en TFA para producir el producto resina peptídica completado de la fórmula H-D-β-Nal-Cys(Acm)-Tyr-D-Trp- Lys-Val-Cys(Acm)-Thr-resina; y

(g) escindir el péptido, H-D-β-Nal-Cys(Acm)-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys(Acm)-Thr, de la resina sólida mediante la reacción de H-D-β-Nal-Cys(Acm)-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys(Acm)-Thr-resina con amoniaco en un disolvente que comprende metanol y dimetilformamida hasta que la escisión se completa sustancialmente para producir H-D-β-Nal-Cys(Acm)-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys(Acm)-Thr-NH2,

en donde la etapa (g) comprende adicionalmente las etapas de (i) precipitar el péptido escindido del disolvente; (ii) filtrar la resina de soporte sólido y el péptido precipitado; y (iii) extraer el péptido en una solución ácida para aislar el péptido,

con la condición de que las etapas (c) y (d) se llevan a cabo seis veces después de la formación del primer producto acoplado desbloqueado de la fórmula H-L-Thr-resina en donde los siguientes aminoácidos están acoplados en el orden Fmoc-L-Cys(Acm), Fmoc-L-Val, Fmoc-L-Lys (Boc), Fmoc-D-Trp, Fmoc-L-Tyr (O-t-Bu) y Fmoc-L-Cys-(Acm) para formar H-Cys(Acm)-Tyr(O-t-Bu)-D-Trp-Lys(Boc)-Val-Cys(Acm)-Thr-resina.