Antagonistas de la somatostatina selectivos para receptor(SSTR2).

Un péptido análogo de somatostatina (SRIF) cíclico que se une selectivamente al receptor de SRIF SSTR2,

péptido que tiene una de las siguientes secuencias de aminoácidos en las que el extremo C está amidado:**Fórmula**

en las que Cpa significa cloro-Phe, Aph (Hor) significa 4-[(2,6-dioxo-hexahidro-pirimidina-4-carbonil)-amino]-fenilalanina y Aph (Cbm) significa 4-ureido-fenilalanina.

Antagonistas de la somatostatina selectivos para receptor (SSTR2)

La presente invención se refiere a péptidos relacionados con la somatostatina y a procedimientos para el tratamiento farmacéutico de mamíferos usando tales péptidos. Más específicamente, la invención se refiere a antagonistas del péptido somatostatina selectivos para receptores acortados y a la inclusión de sustituciones de aminoácidos y/o adiciones en tales péptidos que confieren selectividad para receptor a los mismos, a composiciones farmacéuticas que contienen tales péptidos, a tales péptidos complejados con o conjugados con núclidos radiactivos, a procedimientos de diagnóstico y tratamiento terapéutico de enfermedades de mamífero neoplásicas y no neoplásicas usando tales péptidos, particularmente péptidos que se acoplan a quelantes o marcados de otro modo, y también a procedimientos para buscar fármacos más eficaces usando tales péptidos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

El tetradecapéptido cíclico somatostatina-14 (SRIF) se aisló originalmente del hipotálamo y se caracterizó como un inhibidor fisiológico de la liberación de hormona de crecimiento (GH) de la adenohipófisis. Fue caracterizado por Guillemin y col. y se describió en la patente de EE.UU. nº 3.904.594. Este tetradecapéptido tiene un enlace de puente o de ciclación entre los grupos sulfhidrilo de los dos residuos de aminoácidos de cisteinilo en las posiciones 3 y 14. SRIF afecta múltiples procesos celulares y también es conocido por inhibir el crecimiento de ciertos tumores. El análogo [D-Trp8]-SRIF, que tiene la secuencia de aminoácidos: (ciclo 3-14) H-Ala-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-D-TrpLys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OH, se desveló en la patente de EE.UU. nº 4.372.884 y se establece que tiene potencia muchas veces mayor que SRIF para inhibir la liberación de GH.

SRIF induce sus efectos biológicos interaccionando con una familia de receptores estructuralmente similares unidos a membrana. Se han clonado cinco receptores de SRIF y se denominan SSTR1-5. Los cinco receptores se unen a SRIF y SRIF-28 con alta afinidad. Se han identificado y usado agonistas selectivos en SSTR2 y SSTR5 que revelan funciones distintas de estos receptores. Se cree que estos dos receptores son los subtipos predominantes en tejidos periféricos. Se cree que SSTR2 media en la inhibición de la secreción de hormona de crecimiento, glucagón y ácido gástrico. La patente de EE.UU. nº 5.846.934 describe análogos que se establece que tienen alguna especificidad por SSTR2. Octreotida, un agonista, muestra alguna especificidad por SSTR2 (véase Yang y col., 1998, PNAS USA 95: 10836) . A diferencia, SSTR5 parece participar principalmente en el control de la liberación de insulina y amilasa. La publicación internacional nº WO 97/11962 describió análogos que establece que tienen alguna especificidad por SSTR5. SSTR3 media en la inhibición de la contracción de músculo liso gástrico. La patente de EE.UU. nº 6.579.967 desvela análogos de la somatostatina que son específicos para SSTR3. SSTR4 se encuentra en la pituitaria, pulmones, tubo GI, riñones y en ciertos tumores para la exclusión sustancial de los otros receptores de SRIF; se cree que se activa tras la unión por SRIF. La solicitud de patente publicada de EE.UU. nº 2002/0137676 desvela procedimientos para el tratamiento de células endoteliales usando ligandos selectivos para receptores de somatostatina que son específicos tanto para SSTR1 como SSTR4. Las patentes de EE.UU. nº 5.750.499 y

7.019.109 desvelan análogos del péptido somatostatina que son selectivos para SSTR1. La solicitud de patente de EE.UU. publicada nº 2005/0245438 desvela análogos del péptido somatostatina selectivos para receptores que son específicos para SSTR4. Estos hallazgos globales indican que diferentes subtipos de receptores median en distintas funciones de SRIF en el cuerpo.

El documento WO 98/24807 desvela varios antagonistas cíclicos y menciona que los antagonistas de la somatostatina pueden actuar mediante el subtipo de receptor SSTR-2. Ginj y col. (2006, PNAS USA 103: 16436) se refiere a radiotrazadores de receptores de somatostatina.

Los receptores de somatostatina se expresan en estados patológicos, particularmente en tumores neuroendocrinos del tubo gastrointestinal. La mayoría de los tumores humanos que se originan a partir del tejido diana de somatostatina han conservado sus receptores de somatostatina. Se observó por primera vez en adenomas productores de hormona de crecimiento y adenomas productores de TSH; aproximadamente la mitad de los adenomas inactivos endocrinos muestran receptores de somatostatina. El noventa por ciento de los carcinoides y la mayoría de los carcinomas de células de los islotes, que incluyen sus metástasis, normalmente tienen una alta densidad de receptores de somatostatina. Sin embargo, sólo el 10 por ciento de los carcinomas colorrectales y ninguno de los carcinomas pancreáticos exocrinos contienen receptores de somatostatina. Los receptores de somatostatina en tumores pueden identificarse usando procedimientos de unión in vitro o usando técnicas de obtención de imágenes in vivo; éstas últimas permiten la localización precisa de los tumores y sus metástasis en los pacientes. Debido a que los receptores de somatostatina en tumores gastroenteropancreáticos son funcionales, su identificación puede usarse para evaluar la eficacia terapéutica de un análogo para inhibir la excesiva liberación de hormona en los pacientes.

Sería valioso tener agonistas del péptido somatostatina que se unieran fuertemente a SSTR2, mientras que al mismo solo mostraran una mínima propensión a unirse a los otros 4 receptores. Por tanto, ha continuado la búsqueda de tales agonistas del péptido somatostatina que sean altamente selectivos para SSTR2, pero que no estén internalizados en células.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

Ahora se han descubierto ciertas modificaciones que son eficaces para crear análogos de péptidos de SRIF que son selectivos para SSTR2, a diferencia de los otros receptores de SRIF clonados. Se ha descubierto una clase de análogos del péptido somatostatina que son altamente selectivos para SSTR2, que son antagonistas de somatostatina y que, aunque no están internalizados en células que tienen receptores SSTR2, se recogen en cantidades que son sorprendentemente mayores que son comparables a agonistas del péptido somatostatina selectivos para receptor. Los péptidos resultantes se unen selectivamente a SSTR2 clonado sin activar el receptor, y estos análogos de péptido, cuando se yodan o radiomarcan de otro modo, retendrán sus propiedades biológicas deseables. Por tanto, estos péptidos novedosos son útiles en determinar la localización de tejido y expresión celular del receptor SSTR2, además de en regular ciertas funciones farmacológicas sin ciertos efectos secundarios concomitantes característicos hasta ahora de la administración de SRIF. Estos antagonistas del péptido SRIF, cuando se radiomarcan, pueden usarse en escintigrafía con el fin de ubicar, es decir, localizar tumores que expresan estos receptores, tanto in vitro como in vivo, usando SPECT o PET; alternativamente pueden usarse otras marcas también conocidas en esta materia, por ejemplo, marcas fluorescentes. Si incluyen un radionúclido quelado apropiado como se conoce en esta técnica, estos análogos pueden servir de productos radiofarmacéuticos que son adecuados para la terapia con radionúclidos en el tratamiento de tales tumores.

Los antagonistas del péptido SRIF de la invención inhiben la unión de 125I-[Tyr11]SRIF y 122I-[Leu8, D-Trp22, Tyr25]SRIF28 al receptor humano clonado SSTR2, pero no se unen fuertemente a SSTR1, SSTR3, SSTR4 o SSTR5. Por tanto, los antagonistas sin marcar podrían administrarse para bloquear terapéuticamente el funcionamiento de este receptor. Estos antagonistas de SRIF, a los que 99mTc, 111In, 68Ga o 90Y, por ejemplo, se ha acoplado por un quelante, tal como DOTA o DTPA (o al que otro agente complejante/de conjugación está ligado al extremo N con el fin de unir un resto útil para fines de diagnóstico o terapéuticos) , no se unen significativamente a SSTR1, 3, 4 ó 5, pero continúan uniéndose potentemente y saturablemente a SSTR2.

Antagonistas de SRIF preferidos no solo se unen selectivamente a SSTR2, sino que se unen al mismo con alta afinidad. Por unión selectiva se indica que presentan una KD o una CI50 con SSTR2 que es aproximadamente una centésima o menos de la con respecto a los otros 4 receptores. Análogos preferidos serán al menos aproximadamente 200 veces más selectivos por SSTR2 que por cualquier otro receptor de SRIF, y más preferentemente al menos aproximadamente 500 veces más selectivos.

Estos análogos de SRIF también pueden marcarse... [Seguir leyendo]

1. Un péptido análogo de somatostatina (SRIF) cíclico que se une selectivamente al receptor de SRIF SSTR2, péptido que tiene una de las siguientes secuencias de aminoácidos en las que el extremo C está amidado:

o en las que Cpa significa cloro-Phe, Aph (Hor) significa 4-