Procedimiento de purificación de una muestra de anticuerpo H38C2.

Un procedimiento de purificación de una muestra de anticuerpo h38C2 o una variante del mismo,

en el que ambos sitios de unión al antígeno están completamente disponibles para la unión al antígeno en al menos aproximadamente el 85 % de los anticuerpos de la muestra, que comprende:

(i) equilibrar una columna de HIC (cromatografía de interacción hidrófoba) con un lavado de equilibrado previo a la carga que comprende un tampón base que comprende entre aproximadamente 15 mM y aproximadamente 100 mM de fosfato de sodio, fosfato de potasio o fosfato de amonio, HEPES, Tris y bis-Tris, a entre aproximadamente pH 6,5 y aproximadamente 7,5, y que comprende además una sal seleccionada del grupo que consiste en NaCl, KCl y citrato monosódico, a una primera concentración de entre aproximadamente 0,5 M y 1,5 M; en el que la columna de HIC comprende perlas de resina conjugadas con fenilo inferiores a aproximadamente 50 μm de diámetro y que comprenden poros de al menos aproximadamente 500 Å;

(ii) cargar la columna con una muestra de h38C2 a entre aproximadamente 4 y aproximadamente 80 g/l en tampón de carga que comprende el tampón base y que comprende además la sal a la primera concentración;

(iii) lavar la columna con lavado de equilibrado posterior a la carga que comprende el tampón base y la sal a la primera concentración;

(iv) lavar la columna con un gradiente de sal, que comprende el tampón base y que comprende además un gradiente de concentración lineal de aproximadamente 1,5 M a aproximadamente 0,25 M de la sal,

caracterizado porque la concentración de sal disminuye entre aproximadamente 90 mM y 100 mM por volumen de columna (VC);

(v) lavar la columna con un lavado en meseta de sal, que comprende entre aproximadamente 4 VC y aproximadamente 8 VC de la sal a entre aproximadamente 0,25 M y aproximadamente 0,4 M en el tampón base; (vi) lavar la columna con un lavado de tampón que comprende el tampón base;

(viii) eluir el h38C2 con un tampón de elución, que comprende el tampón base y un gradiente de concentración lineal de 1,6-hexanodiol que comienza a una concentración de entre aproximadamente 0 y aproximadamente 1 % de 1,6-hexanodiol y termina en un límite superior seleccionado del grupo que consiste en aproximadamente 13 %, aproximadamente 14 %, aproximadamente 15 %, aproximadamente 16 %, aproximadamente 17 %, aproximadamente 18 %, aproximadamente 19 %, aproximadamente 20 %, aproximadamente 21 % y aproximadamente 22 % de 1,6-hexanodiol para entre aproximadamente 0,5 VC y aproximadamente 3 VC o hasta que se recoja la combinación de elución;

(viii) opcionalmente, realizar una etapa de elución adicional que comprende el tampón base y 1,6-hexanodiol a una concentración seleccionada del grupo que consiste en aproximadamente 13 %, aproximadamente 14 %, aproximadamente 15 %, aproximadamente 16 %, aproximadamente 17 %, aproximadamente 18 %, aproximadamente 19 %, aproximadamente 20 %, aproximadamente 21% % y aproximadamente 22 %, para hasta 5 VC o hasta que se recoja la combinación de elución;

en el que el anticuerpo h38C2 o una variante del mismo comprende una región variable de cadena ligera (VL) que comprende una CDR1 de VL, CDR2 de VL y CDR3 de VL de la secuencia de VL mostrada en SEQ ID NO: 27; y preferentemente como se expone en SEQ ID NO: 27, y una región variable de cadena pesada (VH) que comprende una CDR1 de VH, CDR2 de VH y CDR3 de VH de la secuencia de VH mostrada en SEQ ID NO: 28, y preferentemente como se expone en SEQ ID NO: 28.