Procedimiento para preparar levaduras genéticamente transformadas capaces de producir una molécula de interés con un título elevado.

Un método para preparar un aislado de levadura que produce al menos 100 mg/l de hidrocortisona,

que comprende:

(a) proporcionar dos plásmidos de integración con cuatro casetes de expresión, comprendiendo cada plásmido de integración al menos dos casetes de expresión, en los que los cuatro casetes de expresión son P450scc, adrenodoxina (ADX), P450c11, y 3β-hidroxiesteroide deshidrogenasa (3β-HSD)

(b) integrar de forma estable múltiples copias de los dos plásmidos de integración en una población de células de levadura, cotransformando los plásmidos en la levadura,

(c) llevar a cabo un cribado primario para seleccionar al menos 30 clones de levadura, en el que la selección de los clones se basa en la presencia de los casetes de expresión, o la selección en vista de la expresión de un marcador seleccionable cuando está presente tal marcador, y

(d) llevar a cabo un cribado secundario funcional sobre los al menos 30 clones de levadura seleccionados en el cribado primario, para identificar dicho aislado de levadura que produce al menos 100 mg/l de hidrocortisona.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2012/061601.

Solicitante: SANOFI.

Nacionalidad solicitante: Francia.

Dirección: 54, RUE LA BOETIE 75008 PARIS FRANCIA.

Inventor/es: DUMAS,BRUNO, BROCARD-MASSON,CORINNE, BONNIN,ISABELLE.

Fecha de Publicación: 26 de Julio de 2017.

Clasificación Internacional de Patentes:

C12N15/52 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Genes que codifican enzimas o proenzimas.
C12N15/81 C12N 15/00 […] › para levaduras.
C12N9/02 C12N […] › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.); Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › Oxidorreductasas (1.), p. ej. luciferasa.
C12N9/04 C12N 9/00 […] › actúan sobre grupos CHOH como dadores, p. ej. glucosa oxidasa de glucosa, deshidrogenasa láctica (1.1).
C12P33/00 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA. › Preparación de esteroides.

PDF original: ES-2639916_T3.pdf

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