Un ensayo de doble híbrido fluorescente (F2H) para la visualización directa de interacciones de proteínas en células vivas.

Un procedimiento in vitro para detectar interacciones proteína-proteína,

que comprende:

(a) expresar en una célula eucariota una primera proteína de fusión que comprende

(i) un (poli)péptido que, cuando se expresa en una célula, se acumula en sitios distintos en el núcleo de la célula; y

(ii) un (poli)péptido que se une específicamente a la proteína verde fluorescente (GFP)

(b) expresar en la misma célula una segunda proteína de fusión que comprende

(i) GFP; y

(ii) un (poli)péptido señuelo

(c) expresar en la misma célula una tercera proteína de fusión que comprende

(i) un (poli)péptido fluorescente, cuya longitud de onda de excitación y/o emisión difiere de la de GFP; y

(ii) un (poli)péptido presa

(d) detectar la emisión de fluorescencia de las partes fluorescentes de la segunda y la tercera proteína de fusión en la célula tras la excitación,

en el que una colocalización de la emisión de fluorescencia de ambas proteínas de fusión en el núcleo de la célula es indicativa de una interacción del dicho (poli)péptido señuelo y presa.

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E08000297.

Solicitante: LUDWIG-MAXIMILIANS-UNIVERSITAT MÜNCHEN.

Nacionalidad solicitante: Alemania.

Dirección: GESCHWISTER-SCHOLL-PLATZ 1 80359 MÜNCHEN ALEMANIA.

Inventor/es: ROTHBAUER,ULRICH, LEONHARDT,HEINRICH, ZOLGHADR,KOUROSH, MORTUSEWICZ,OLIVER.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12N15/10 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).
  • C12Q1/68 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
  • G01N33/542 SECCION G — FISICA.G01 METROLOGIA; ENSAYOS.G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › con inhibición estérica o modificación de la señal, p. ej. extinción de fluorescencia.

PDF original: ES-2606706_T3.pdf

 

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