Procedimiento para obtener G-CSF humano recombinante biológicamente activo.
Un procedimiento para la producción de una composición farmacéutica de G-CSF humano recombinante biológicamente activo,
que comprende obtener el G-CSF humano biológicamente activo partir de cuerpos de inclusión, que comprende las etapas de:
(a) solubilización del G-CSF contenido en los cuerpos de inclusión con un tampón de solubilización que contiene un agente desnaturalizante y un agente de reducción;
(b) replegado del G-CSF diluyendo el solubilizado con un tampón de replegado que contiene glutatión reducido y oxidado a una temperatura >10ºC;
(c) purificación del G-CSF replegado mediante al menos una etapa de cromatografía, que comprende cromatografía en fase inversa (RP), en la que una isoforma del G-CSF menos hidrófoba en la muestra de G-CSF obtenida después de la etapa de replegado (b) que tiene un contenido de estructuras de hélice alfa de 66% e hidrofobicidad menor que un patrón de referencia del G-CSF que tiene 52% de estructuras de hélice alfa, se separa eluyendo en una fracción más temprana que el patrón de referencia del G-CSF, en el que la etapa de cromatografía de RP está precedida por una cromatografía de intercambio catiónico (CEX); y
(d) formular el G-CSF resultante en una composición farmacéutica con un vehículo farmacéuticamente aceptable, en la que el contenido de la isoforma del G-CSF menos hidrófoba en la composición farmacéutica es inferior a 1% de la proteína G-CSF total.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2011/001331.
Solicitante: RATIOPHARM GMBH.
Nacionalidad solicitante: Alemania.
Dirección: GRAF-ARCO-STRASSE 3 89079 ULM ALEMANIA.
Inventor/es: HINDERER,WALTER, SCHECKERMANN,CHRISTIAN.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C07K14/535 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › CSF de granulocitos; CSF de granulocitos-macrófagos.
PDF original: ES-2611453_T3.pdf
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