Método para potenciar la eficacia de una preparación de un anticuerpo monoclonal.

Un método para potenciar la eficacia de una preparación de anticuerpo monoclonal,

donde dicho anticuerpo monoclonal es un anticuerpo que reconoce como antígeno el virus de la inmunodeficiencia humana de tipo 1 (VIH- 1), que comprende seleccionar pacientes idóneos para la administración de dicha preparación de anticuerpo monoclonal analizando previamente una secuencia de aminoácidos de una proteína antigénica de una molécula diana presente en una muestra de pacientes, donde dicho método comprende las etapas: (1) deducir una secuencia de aminoácidos de una proteína expresada en pacientes de una secuencia de nucleótidos de un gen de una molécula diana determinada mediante aislamiento y análisis de dicho gen en la biopsia de pacientes; (2) evaluar la idoneidad de los pacientes para la administración de dicha preparación de anticuerpo monoclonal comparando la secuencia de aminoácidos deducida en la etapa (1) con una secuencia de aminoácidos que es reconocible por dicho anticuerpo monoclonal como ya se ha determinado anteriormente; y (3) seleccionar pacientes a los que administrar dicha preparación de anticuerpo monoclonal con su eficacia prevista basada en la idoneidad evaluada en la etapa (2).

Método para potenciar la eficacia de una preparación de un anticuerpo monoclonal Campo técnico

La presente invención pertenece al campo técnico de los medicamentos. Más específicamente, la presente invención se refiere a un método para potenciar la eficacia de una preparación de un anticuerpo monoclonal tal como se caracteriza en las reivindicaciones adjuntas, llevándose a cabo dicho método para seleccionar pacientes que posean un antígeno reconocido por dicho anticuerpo monoclonal.

Técnica anterior

En los últimos años, para la aplicación clínica de un anticuerpo monoclonal se ha desarrollado una terapia con administración de una preparación de un anticuerpo monoclonal. Una preparación de un anticuerpo monoclonal puede usarse con eficacia a través de la interacción entre un anticuerpo monoclonal y un antígeno que se produce en el cuerpo vivo. Por tanto, la eficacia de una preparación de anticuerpo monoclonal se puede potenciar si anteriormente se ha analizado un nivel de expresión de dicho antígeno para seleccionar sujetos a los que se va a aplicar dicha preparación. Un anticuerpo monoclonal puede ser ventajoso desde el punto de vista de la seguridad y la eficacia debido a su especificidad extremadamente alta. No obstante, en caso de que se produzca diversidad en una secuencia de aminoácidos de una región de epítopo antigénico, un anticuerpo monoclonal será menos reactiva con un antígeno y, por tanto, su eficacia se puede deteriorar. Por tanto, para el uso de una preparación de anticuerpo monoclonal como medicamento, será un medio útil para potenciar la eficacia de dicha preparación de anticuerpo monoclonal no solo para analizar previamente un nivel de expresión de un antígeno dentro del cuerpo humano sino también para confirmar la diversidad de un antígeno y seleccionar sujetos para la administración.

Entre las preparaciones de anticuerpo monoclonal donde los sujetos a los que se van a administrar se analizan y seleccionan está el anticuerpo monoclonal antiHER2 (trastuzumab) ahora disponible comercialmente. El trastuzumab es un anticuerpo monoclonal contra la proteína HER2 que se sobreexpresa en aproximadamente el 2 al 3 % de los pacientes de cáncer de mama. Para el análisis clínico para seleccionar los sujetos a los que se va a administrar el anticuerpo monoclonal anti-HER2 se han intentado las técnicas de transferencia de tipo Southern o hibridación fluorescente in vitro (FISH) para la amplificación del ADN del gen HER2/neu; las técnicas de transferencia de tipo Northern o reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa (RT-PCR) para detectar sobreexpresión del ARNm de HER2, o las técnicas de transferencia de tipo Western, ELISA o inmunohistoquímica para detectar sobreexpresión de la proteína HER2. Con estas pruebas, la eficacia de trastuzumab se ha potenciado en los casos de sobreexpresión de HER2, lo que sugiere que en la terapia con una preparación de anticuerpo monoclonal seleccionando sujetos previamente a los que se va a administrar dicha preparación es útil para potenciar la eficacia de la preparación del anticuerpo monoclonal (p. ej., Nippon Rinsho, Vol. 6, No. 3 (22)).

Divulgación de la invención

(Problemas técnicos que ha de resolver la invención)

Por otro lado, en el caso donde se produce diversidad en una secuencia de aminoácidos de una región de epítopo para alterar de este modo la afinidad de la reacción antígeno-anticuerpo, se estima que la eficacia de una preparación de anticuerpo disminuye como consecuencia de la diversidad antigénica, cuya predicción es de gran importancia desde el punto de vista clínico. Para este fin, el análisis de un nivel de expresión de una proteína antigénica sola como en trastuzumab es insuficiente y será necesario un método de prueba recién establecido. Esto es porque, incluso cuando un determinado antígeno se expresa mucho como una proteína y es detectable cuantitativamente, dicho antígeno se puede evaluar como inadecuado si exhibe diversidad en una secuencia de aminoácidos de un epítopo de tipo salvaje reconocido por un anticuerpo monoclonal y hay multiplicidad de variantes antigénicas con menor reactividad con dicho anticuerpo monoclonal. De acuerdo con lo anterior, cuando existe diversidad en una secuencia de aminoácidos de un epítopo de un antígeno determinado, una extensión de reactividad de un anticuerpo a cada uno de los epítopos con diferentes secuencias de aminoácidos tiene que confirmarse directamente a través de una reacción de antígeno-anticuerpo. No obstante, con el fin de distinguir moléculas antigénicas con diferentes secuencias de aminoácidos de una región de epítopo entre sí entre antígenos que pueden producirse en cantidades extremadamente pequeñas y capturar y detectar dichas moléculas con un anticuerpo, será necesaria una sensibilidad más alta. También es difícil detectar de forma distinguible un nivel de expresión de un antígeno por un lado y la reactividad de un anticuerpo por otro lado.

Desde los puntos de vista mencionados anteriormente, para una preparación de anticuerpo monoclonal donde un antígeno al cual está dirigido un anticuerpo monoclonal es una proteína con diversidad en la secuencia de aminoácidos de un epítopo reconocido por dicho anticuerpo monoclonal, se desea desarrollar un método de prueba con una elevada sensibilidad y rapidez para la selección de sujetos a los que se va a administrar dicha preparación.

(Medios para resolver los problemas)

La presente invención se refiere a un método para potenciar la eficacia de una preparación de anticuerpo monoclonal como se caracteriza en las reivindicaciones adjuntas.

De acuerdo con la presente invención dicho método comprende las etapas: (1) deducir una secuencia de aminoácidos de una proteína expresada en pacientes de una secuencia de nucleótidos de un gen de una molécula diana determinada mediante aislamiento y análisis de dicho gen en la biopsia de pacientes; (2) evaluar la idoneidad de los pacientes para la administración de dicha preparación de anticuerpo monoclonal comparando la secuencia de aminoácidos deducida en la etapa (1) con una secuencia de aminoácidos que es reconocible por dicho anticuerpo monoclonal como ya se ha determinado anteriormente (en lo sucesivo denominado "secuencia de referencia"); y (3) seleccionar pacientes a los que administrar dicha preparación de anticuerpo monoclonal con su eficacia prevista basada en la idoneidad evaluada en la etapa (2).

La diversidad en una secuencia de aminoácidos de un epítopo antigénico reconocido por una preparación de anticuerpo monoclonal puede alterar la afinidad de unión del anticuerpo por el antígeno. En el caso de un antígeno que exhibe un polimorfismo genético en una región epítopo, los presentes inventores tenían la visión de que, en lugar de una medición directa de la unión de un anticuerpo monoclonal a través de detección ¡nmunoquímica, la diversidad de un antígeno expresado en pacientes se puede analizar en base al análisis de su secuencia de nucleótidos para predecir de este modo la unión entre dicho antígeno y dicho anticuerpo. Por tanto, para un anticuerpo monoclonal donde se encontró una correlación entre una secuencia de aminoácidos de un epítopo y la reactividad de antígeno/anticuerpo se recogieron datos de dicha correlación. Los datos obtenidos de este modo se compararon después con una secuencia de nucleótidos de una región epítopo de un antígeno de pacientes para permitir una selección eficiente de pacientes a los que se va a administrar una preparación de anticuerpo monoclonal para completar un método de acuerdo con la presente invención.

Con le progreso de la PCR y las técnicas de análisis de la secuencia de nucleótidos, el método de acuerdo con la presente invención se puede realzar con una sensibilidad elevada en un uso amplio y permite el análisis directo sin clonar los ADN entre los cuales están presentes sus variantes. Por tanto, de acuerdo con la presente Invención, la predicción de la eficacia de una preparación de anticuerpo monoclonal se hace ahora posible simplemente determinando una secuencia de nucleótidos que codifica una región de epítopo de un antígeno de una proteína expresada sin la necesidad de medir realmente la afinidad de unión entre dicho antígeno y dicho anticuerpo monoclonal.

(Efectos más eficaces que la técnica anterior)

De acuerdo con la presente invención se proporciona un método para potenciar la eficacia global de una preparación de anticuerpo monoclonal como se caracteriza en las reivindicaciones adjuntas sin medir realmente la afinidad de unión entre un antígeno de una proteína diana expresada y dicho anticuerpo monoclonal mediante aislamiento y purificación de... [Seguir leyendo]

1. Un método para potenciar la eficacia de una preparación de anticuerpo monoclonal, donde dicho anticuerpo monoclonal es un anticuerpo que reconoce como antígeno el virus de la ¡nmunodeficiencia humana de tipo 1 (VIH- 1), que comprende seleccionar pacientes ¡dóneos para la administración de dicha preparación de anticuerpo monoclonal analizando previamente una secuencia de aminoácidos de una proteína antigénica de una molécula diana presente en una muestra de pacientes, donde dicho método comprende las etapas: (1) deducir una secuencia de aminoácidos de una proteína expresada en pacientes de una secuencia de nucleótidos de un gen de una molécula diana determinada mediante aislamiento y análisis de dicho gen en la biopsia de pacientes; (2) evaluar la idoneidad de los pacientes para la administración de dicha preparación de anticuerpo monoclonal comparando la secuencia de aminoácidos deducida en la etapa (1) con una secuencia de aminoácidos que es reconocible por dicho anticuerpo monoclonal como ya se ha determinado anteriormente; y (3) seleccionar pacientes a los que administrar dicha preparación de anticuerpo monoclonal con su eficacia prevista basada en la idoneidad evaluada en la etapa (2).

2. El método para potenciar la eficacia de una preparación de anticuerpo monoclonal de la reivindicación 1, donde la comparación entre una secuencia de aminoácido deducida de una proteína diana y una o más secuencias de aminoácidos que es/son reconocibles por dicho anticuerpo monoclonal como se ha determinado anteriormente usando como índice la unión de un anticuerpo monoclonal a un péptido o una proteína expresada que tiene dicha secuencia de aminoácidos deducida.

3. El método para potenciar la eficacia de una preparación de anticuerpo monoclonal de la reivindicación 1 o 2, donde dicho anticuerpo monoclonal es un anticuerpo frente a la región V3 de la glicoproteína gp2 de la cubierta del virus de la ¡nmunodeficiencia humana de tipo 1 (VIH-1).

4. El método para potenciar la eficacia de una preparación de anticuerpo monoclonal de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde la secuencia, o secuencias, de aminoácidos que es/son reconocibles por dicho anticuerpo monoclonal como se ha determinado previamente para el VIH-1 se selecciona del grupo que consiste en "IGPARAF" (SEC ID N° 5), "IGPGRSF" (SEC ID N° 6), "IGPGRAL" (SEC ID N° 7), "IGPGRTF" (SEC ID N° 8), "IGPGRAI" (SEC ID N° 9), "VGPGRAL" (SEC ID N° 1), y "IGPGRAF" (SEC ID N° 11).