Preparación que contiene toxina botulínica de tipo A muy purificada derivada de patógeno de botulismo del lactante.

Medicamento que comprende un agente bloqueador de la transmisión neuromuscular que comprende,

como ingrediente activo, una neurotoxina de tipo A muy purificada que es de una Clostridium botulinum negativa para HA de tipo A aislada como patógeno del botulismo del lactante y que tiene un peso molecular de 150 kDa, para uso en el tratamiento de una enfermedad con una sobreactividad muscular.

Preparación que contiene toxina botulínica de tipo A muy purificada derivada de patógeno de botulismo del lactante

CAMPO TÉCNICO

La presente invención se refiere a un agente bloqueador de la transmisión neuromuscular que comprende como ingrediente activo una neurotoxina de tipo A de 150 kDa obtenida de Clostridium botulinum de tipo A, negativa para HA, aislada como patógeno del botulismo del lactante, y a un medicamento para tratar una enfermedad con una sobreactividad muscular, que comprende dicha neurotoxina como ingrediente activo.

TÉCNICA ANTECEDENTE

Una toxina botulínica producida por la bacteria grampositiva anaerobia Clostridium botulinum es la neurotoxina más letal en la Tierra. Se clasifica en siete tipos, A, B, C, D, E, F y G, y se ha elucidado la propiedad de cada tipo. Los tipos son distinguibles entre sí por anticuerpos neutralizantes específicos del tipo respectivos. Dependiendo de los tipos, una toxina botulínica puede variar en la especie animal a la que afecta, en la gravedad de la parálisis que induce, en la duración del tiempo de su acción, y similar. Una proteína central activa de una toxina botulínica tiene un peso molecular de alrededor de 150 kDa (NTX) , común en los siete tipos conocidos.

Cualquier toxina botulínica, cuando se produce a partir de Clostridium botulinum, es un complejo compuesto de NTX y proteínas no tóxicas relevantes. Una toxina botulínica de tipo A se produce en una forma molecular de 900 kDa (toxina LL) , 500 kDa (toxina L) , o 300 kDa (toxina M) (Fig. 1) . Estas toxinas botulínicas se separan para liberar NTX y NTNH (una proteína no tóxica) en condiciones alcalinas (pH 7, 2 o mayor) . Utilizando esta propiedad, es posible aislar NTX de 150 kDa (una proteína central activa que dota de una neurotoxina con la actividad; también denominada "toxina S") sola. Estas toxinas LL, L y M se denominan complejo de toxina botulínica o toxina progenitora. Estas toxinas botulínicas, al absorberlas en el intestino delgado superior, se separan para liberar proteínas no tóxicas y una neurotoxina en un vaso linfático. La neurotoxina liberada se une entonces a un receptor en la terminación nerviosa y en su término C de una cadena pesada, y es llevada a las neuronas vía el receptor. Después, escinde específicamente una proteína en la membrana presináptica a través de una actividad de metaloendopeptidasa de cinc de la cadena ligera e inhibe la liberación dependiente de calcio de acetilcolina para bloquear de ese modo la transmisión neuromuscular en la sinapsis (referencia 1 no de patente) .

Aunque la toxina botulínica es una neurotoxina que puede conducir al ser humano a la muerte en intoxicación botulínica a través del bloqueo de la transmisión neuromuscular sistémica, también se puede utilizar como remedio para tratar una enfermedad con una sobreactividad muscular tal como, por ejemplo, distonía, haciendo uso de forma positiva de su actividad y administrándola directamente en el músculo de un paciente que sufre la enfermedad, de forma que se puede aliviar la tensión muscular local (referencia 2 no de patente) . Por ejemplo, un complejo de toxina botulínica de tipo A (Allergan Inc., BOTOX; marca registrada) ha sido aprobado por la Food and Drug Administration (FDA) como medicamento para tratar blefarospasmo, estrabismo, espasmo hemifacial, y distonía cervical, y para tratar arrugas en la mitad de la frente. Un complejo de toxina botulínica de serotipo B (Elan Pharmaceuticals, MYOBLOC; marca registrada) también ha sido aprobado por la FDA como un medicamento para el tratamiento de distonía cervical. Se afirma que una toxina botulínica de tipo A tiene una mayor potencia y una duración de acción más prolongada en comparación con tipos distintos de una toxina botulínica de tipo A. Una duración media de acción de una toxina botulínica de tipo A desde su administración muscular única hasta la mejora de los síntomas es típicamente alrededor de 3 a 4 meses.

En años recientes, la acción de la toxina botulínica ha sido aprobada en (1) las conjunciones neuromusculares, (2) los ganglios de los nervios autónomos, (3) la terminación del nervio parasimpático postganglional, (4) la terminación del nervio simpático postganglional, y (5) las fibras receptoras del dolor. Para las conjunciones neuromusculares del músculo esquelético, la terminación de los nervios acetilcolinérgicos muscarínicos es el principal sitio activo. Entre los ganglios de los nervios autónomos, se concibe que una acción directa a los ganglios de los nervios parasimpáticos está relacionada con una acción clínica. También se da a conocer que la acción a los nervios autónomos periféricos provoca la inhibición de la liberación de ATP, VIP (polipéptido intestinal vasoactivo) o sustancia P, o la inhibición de la acción de NO (óxido nítrico) sintetasa. También se ha sabido que la toxina botulínica es útil para aliviar el dolor. En esta acción, se da a conocer que la toxina botulínica inhibe la liberación de ácido glutámico, sustancia P y CGRP (péptido relacionado con el gen de calcitonina) (referencia 2 no de patente) . Como tal, la toxina botulínica es un agente bloqueador de la transmisión neuromuscular útil que inhibe la liberación de diversos neurotransmisores en diversos nervios.

Actualmente, un potencial biológico de una preparación terapéutica de una toxina botulínica, tal como una toxina botulínica de tipo A, está indicado como una unidad de LD50 de ratón. Una LD50 se define como LD50 que, en base a la administración intraperitoneal a ratones, se define como una cantidad con la cual muere la mitad del número de ratones estudiados. A saber, un potencial se cuantifica con un nivel o una cantidad de una neurotoxina con la que mueren los ratones como consecuencia de la relajación muscular respiratoria. Una LD50, es decir, una unidad, en ratones de complejo de toxina botulínica de tipo A comercialmente disponible (Allergan, Inc., BOTOX; marca registrada; que contiene 100 unidades) es alrededor de 50 pg.

Las preparaciones terapéuticas de toxina botulínica están disponibles de Allergan Inc. (U.S.A.) , Ipsen Limited (U.K.)

o Elan Pharmaceuticals (Irlanda) . Estas preparaciones terapéuticas comercialmente disponibles de toxina botulínica consisten en un complejo de toxina botulínica purificada (toxina LL) solo en una estructura molecular unido con proteínas no tóxicas relevantes. En años recientes, las preparaciones de NTX de tipo A (Merz Pharma, Xeomin (marca registrada) , Alemania) que no comprenden proteínas no tóxicas se vendieron en el año 2005; de forma similar, otras preparaciones se sometieron a ensayos clínicos en los Estados Unidos de América, y se ha llevado a cabo de forma activa el desarrollo de preparaciones de nueva generación.

Las preparaciones terapéuticas actualmente disponibles en el comercio de toxina botulínica de tipo A, es decir, BOTOX (marca registrada) de Allergan Inc. y Dysport (marca registrada) de Ipsen Limited, consisten en un complejo de toxina botulínica (toxina LL) que comprende como su componente proteína hemaglutinina (HA) tal como HA17, HA34, y HA70 (positivo para HA) .

Por otro lado, una toxina botulínica aislada de pacientes que sufren botulismo de lactante en 1990, aunque pertenece al tipo A, consiste en toxina M sin proteínas HA (negativa para HA) . Clostridium botulinum de tipo A que produce la toxina M sin proteína HA se ha identificado por primera vez en Japón en 1986 en pacientes que sufren botulismo de lactante (referencia 3 no de patente) . Las cepas aisladas clínicamente incluyen Kyoto-F, Chiba-H, Y8036, 7I03-H, 7I05-H y KZ1828. Cuando se compara con los otros tipos A a G de toxinas botulínicas, una toxina botulínica de Clostridium botulinum que provoca botulismo de lactante es una neurotoxina peculiar distinta de cualesquiera tipos de estas moléculas toxínicas.

Desde el punto de vista genético, un mecanismo genético de Clostridium botulinum como patógeno del botulismo del lactante es diferente de los de los otros tipos de toxina botulínica. La mayoría de las toxinas botulínicas convencionales, típicamente toxina botulínica de tipo A, se han observado como un complejo de toxina botulínica que tiene proteína hemaglutinina (HA) como un componente del mismo. Los genes que codifican proteínas HA, tales como HA17, HA34 y HA70, están incluidos en genes de neurotoxinas de Clostridium botulinum de tipos A, B, C, D y G, pero están completamente ausentes en aquellos de Clostridium botulinum como patógeno del botulismo del lactante. También, los genes de Clostridium botulinum como patógeno de botulismo del lactante incluyen un gen regulador tal como p47 (referencia 4 no de patente) . Además, se mostró que una secuencia de la proteína NTNH... [Seguir leyendo]

1. Medicamento que comprende un agente bloqueador de la transmisión neuromuscular que comprende, como ingrediente activo, una neurotoxina de tipo A muy purificada que es de una Clostridium botulinum negativa para HA de tipo A aislada como patógeno del botulismo del lactante y que tiene un peso molecular de 150 kDa, para uso en el tratamiento de una enfermedad con una sobreactividad muscular.

2. Uso de un agente bloqueador de la transmisión neuromuscular que comprende como ingrediente activo una neurotoxina de tipo A muy purificada que es de una Clostridium botulinum negativa para HA de tipo A aislada como patógeno del botulismo del lactante y que tiene un peso molecular de 150 kDa, para la preparación de un medicamento para tratar una enfermedad con una sobreactividad muscular.

3. Medicamento para uso de la reivindicación 1, o el uso de la reivindicación 2, en el que el agente bloqueador de la transmisión neuromuscular tiene un margen más amplio de seguridad y muestra una eficacia más rápida y una propiedad menos difusiva que las toxinas botulínicas LL, L y M.

4. Medicamento para uso de la reivindicación 1 ó 3, o el uso de la reivindicación 2 ó 3, en el que dicha neurotoxina muy purificada es producida por una cepa negativa para HA de Kyoto-F, Chiba-H, Y-8036, 7I03-H, 7I05-H o KZ1828, 15 derivada del patógeno del botulismo del lactante.

5. Medicamento para uso de las reivindicaciones 1, 3 ó 4, o el uso de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que el agente bloqueador de la transmisión neuromuscular comprende además un agente estabilizante para la toxina botulínica.

6. Medicamento para uso o el uso de la reivindicación 5, en el que dicho agente estabilizante es una seroalbúmina 20 humana.

7. Medicamento para uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1, y 3 a 6, o el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 6, en el que dicha enfermedad con una sobreactividad muscular es una enfermedad inducida por sobreactividad local, seleccionándose dicha enfermedad de estrabismo, blefarospasmo, espasmo hemifacial, tortícolis espasmódico, apasticidad tras apoplejía, parálisis cerebral, disfonía espasmódica, cefalea tal como migraña, dolor crónico tal como lumbago, rigidez en los hombros, paresia que aparece en el comienzo de la enfermedad del Parkinson o esclerosis múltiple, síndrome de dolor miofascial, espasmo de los músculos masticatorios, fisura anal crónica, vejiga sobreactiva, bruxismo, mioquimia facial, tic, distonía local, o arruga.