FKBP-L y usos del mismo como inhibidor de la angiogénesis.

Un compuesto activo que comprende un polipéptido FKBP-L aislado o un fragmento biológicamente activo de un polipéptido FKBP-L,

o un derivado biológicamente activo de un polipéptido FKBP-L o (ii) un polinucleótido que codifica tal polipéptido FKBP-L, fragmento o derivado para su uso como un inhibidor de la angiogénesis, o para uso en el tratamiento de trastornos oculares mediados por la angiogénesis, en donde el derivado biológicamente activo de un polipéptido FKBP-L comprende una secuencia de aminoácidos idéntica en al menos 70% a la secuencia de aminoácidos mostrada en uno cualquiera de los SEQ ID NO: 1 a 28.

FKBP-L y usos del mismo como inhibidor de la angiogénesis Reivindicación de prioridad sobre solicitudes relacionadas

Esta solicitud reivindica prioridad sobre la Solicitud de Patente del reino Unido Núm. 0611405.2 de Robson et al., presentada el 9 de Junio de 2006.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a polipéptidos FKBP-L, péptidos FKBP-L, fragmentos y derivados de péptidos FKBP-L, y usos de los mismos.

Antecedentes de la invención

La angiogénesis es la formación de nuevos vasos sanguíneos a partir de la vasculatura preexistente y puede ser controlada por medio de señalización intrincada a través de factores solubles. Las patologías asociadas con la angiogénesis pueden incluir cáncer (Folkman J. (1971) N. Engl. J. Med. 285: 1182; Folkman J. (1999) Nature Med.1: 27-31), arteriesclerosis (Lip, G.Y., Blann, A.D. (2004) Ann Med. 36(2) 119-125), psoriasis (Powell, J. (1999) Curr. Opin. Pediatr. 11:457-463), endometriosis (Olive, D.L., Lindheim, S.R., Pritts, E.A. (2004) Best Pract. Res. Clinc. Obste! Gynaecol. 18(2) 319-328) y algunos trastornos oculares como la retinopatía diabética (Folkman J. (1999) Nature Med. 1:27-31). La angiogénesis también puede ser necesaria para la reparación de heridas ya que los nuevos vasos proporcionan nutrientes para apoyar a las células activas, promover la formación de tejido de granulación y facilitar el aclaramiento de desechos. Aproximadamente 60% de la masa de tejido de granulación puede estar compuesta por vasos sanguíneos que también suministran el oxígeno necesario para estimular la reparación y el crecimiento del vaso. Está bien documentado que los factores angiogénicos están presentes en el líquido de la herida y promueven la reparación mientras que los factores antiangiogénicos inhiben la reparación. En los tumores, cuando las células endoteliales están expuestas a factores solubles que estimulan la angiogénesis, pueden someterse a vahos cambios fisiológicos, incluyendo un aumento masivo de la proliferación, la degradación y la invasión a través de la membrana basal del vaso existente, y la migración de distancia desde el vaso sanguíneo a una nueva ubicación. En la nueva ubicación las células endoteliales pueden proliferar de nuevo y formar túbulos capilares antes de la formación en última Instancia de una vasculatura tumoral altamente desorganizada (Garcea G, Lloyd TD, Gescher A, Dennlson AR, Steward WP, Berry DP. (2004) Eur J Cáncer. Junio, 4099): 1302-13). Las células endoteliales activadas pueden mostrar un patrón distinto de expresión génica, lo que conduce a la modificación de las principales funciones celulares Implicadas en la angiogénesis. Estas incluyen la regulación del equilibrio proteolítico que conduce a la degradación de la matriz pericelular localizada, la síntesis de moléculas de adherencia que participan en la interacción de la matriz extracelular, y lo más importante, la reorganización del citoesqueleto involucrado en la migración celular (Garcea G, Lloyd TD, Gescher A, Dennison AR, Steward WP, Berry DP. (2004) Eur J Cáncer. Junio, 4099): 1302-13).

Se ha demostrado que los compuestos antl-anglogénicos novedosos inhiben una gama de marcadores endoteliales, que han sido identificados por estar regulados al alza en las células endoteliales activadas. Estos pueden incluir receptores, metaloproteínas de la matriz, y proteínas de adherencia. La tasa de éxito de estos inhibidores ha sido bastante alta. Recientemente el compuesto antl-angiogénico novedoso Avastin, un anticuerpo contra VEGF, ha pasado la aprobación por la FDA y la antl-anglogénesis ha sido reconocida ahora como la cuarta modalidad utilizada en el tratamiento del cáncer (Abdollhi A., Hlatky L., Huber P.E. (2005) Drug Resistance Updates, Febrero-Abril; 8:59- 74). Estas terapias pueden tener las siguientes ventajas sobre los tratamientos quimioterapéuticos convencionales. En primer lugar, la angiogénesis es principalmente un mecanismo onco-fetal, por lo tanto se deben esperar efectos secundarios mínimos cuando se administra, Incluso después de un tratamiento prolongado. En segundo lugar, la angiogénesis asociada al tumor es un mecanismo fisiológico del anfitrión y su inhibición farmacológica no debe, en consecuencia, conducir al desarrollo de resistencia. Finalmente la propia masa tumoral es un objetivo difícil, donde las células endoteliales que recubren la vasculatura de suministro se clasifican con frecuencia como vulnerables.

Los compuestos pro-angiogénicos pueden ser también terapéuticos. Por ejemplo, los compuestos pro-angiogénicos que pueden promover la reparación de heridas Incluyen citoqulnas anglogénlcas, tales como FGF, VEGF, TGF-beta, angiopoyetina, y triptasa de mastocitos.

Un nuevo polipéptido y su gen han sido recientemente identificados y caracterizados parcialmente. Este nuevo polipéptido ha sido nombrado FKBP-L, DIR1 o WISP39. Se ha demostrado que este gen tiene un papel en las respuestas al estrés (Robson, T., Lohrer, H., Bailie, J.R., Hirst, D.G., Jolner, M.C., Arrand, J.E. (1997) Biochemical J. Transactions 25, 335-341). También se ha demostrado que la represión del gen de FKBP-L puede proteger contra el daño celular oxidativo Inducido por rayos X y UV (Robson, T., Jolner, M.C., McCullough, W., Precio, M.E., McKeown, S.R., Hirst, D.G. (1999) Radlation Research 152, 451-461; Robson, T., Prlze, M.E., Moore, M.L, Joiner, M.C.,

McKelvey-Martin, V.J., McKeown, S.R., Hirst, D.G., (2000) Int. J. Radiat). FKBP-L también puede estabilizar p21 recién sintetizado (un inhibidor de quinasa dependiente de ciclina y un regulador crítico del ciclo celular) mediante la formación de un complejo trimérico con p21 y Hsp90 (Jascur, T. et al (2005) Molecular Cell, Vol. 17, 237- 249).

Existe una necesidad de proporcionar nuevos agentes terapéuticos que puedan Inhibir la angiogénesls y la migración celular. Tales agentes terapéuticos pueden ser importantes como tratamientos independientes, o para ser utilizados junto con otros agentes terapéuticos.

Compendio de la invención

Las realizaciones de la presente invención se refieren al uso de polipéptidos FKBP-L para modular la angiogénesls y la migración celular. La presente invención se puede realizaren una variedad de maneras.

Por ejemplo, en ciertas realizaciones, se pueden utilizar FKBP-L y fragmentos del mismo para modular la angiogénesls. También, en algunas realizaciones, los polipéptidos FKBP-L se pueden utilizar para modular la migración celular y/o la metástasis de las células tumorales. La acción de FKBP-L puede estar mediada por CD44. Por lo tanto, el polipéptido FKBP-L puede, en ciertas realizaciones, ser utilizado para modular la angiogénesis, la migración celular y/o la metástasis de las células que expresan CD44.

De acuerdo con la invención, se proporciona un compuesto activo que comprende un polipéptido FKBP-L aislado o un fragmento biológicamente activo de un polipéptido FKBP-L, o un derivado biológicamente activo de un polipéptido FKBP-L o (¡I) un polinucleótido que codifica tal polipéptido FKBP-L, fragmento o derivado para su uso como un inhibidor de la angiogénesls, o para su uso en el tratamiento de trastornos oculares mediados por angiogénesis, en donde el derivado biológicamente activo de un polipéptido FKBP-L comprende una secuencia de aminoácidos idéntica en al menos 70% a la secuencia de aminoácidos mostrada en cualquiera de los SEQ ID NO: 1 a 28.

Existen características adicionales de la invención que se describirán más adelante. La invención es susceptible de otras realizaciones y de ponerse en práctica o llevarse a cabo de vahas maneras.

Breve descripción de los dibujos

La presente invención puede entenderse mejor mediante la referencia a los siguientes dibujos.

La FIG. 1, paneles AC, muestra secuencias de aminoácidos alternativas de FKPB-L completo, fragmentos de FKBP-L de acuerdo con realizaciones alternativas de la presente invención.

La FIG. 2, paneles A-E, muestra secuencias de polinucleótidos que codifican FKBP-L y algunos de sus mutantes por deleción y variantes de acuerdo con realizaciones alternativas de la presente invención.

La FIG. 3 muestra los efectos inhibidores del ADNc de FKBP-L transfectado transitoriamente (SEQ ID NO: 31) sobre el cierre de heridas en HMEC-1 de acuerdo con una realización de la presente invención.

La FIG. 4 ilustra un gráfico de dosis-respuesta del efecto de un polipéptido recombinante FKBP-L etiquetado con His (SEQ ID NO: 1) sobre la migración de HMEC-1 en un ensayo in vitro de cierre de heridas de acuerdo con una realización de la presente invención.

La FIG. 5 ilustra que un polipéptido FKBP-L completo etiquetado con Hemaglutinina (HA) es secretado... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto activo que comprende un polipéptido FKBP-L aislado o un fragmento biológicamente activo de un polipéptido FKBP-L, o un derivado biológicamente activo de un polipéptido FKBP-L o (ii) un polinucleótido que codifica tal polipéptido FKBP-L, fragmento o derivado para su uso como un inhibidor de la angiogénesis, o para uso en el tratamiento de trastornos oculares mediados por la angiogénesis, en donde el derivado biológicamente activo de un polipéptido FKBP-L comprende una secuencia de aminoácidos idéntica en al menos 70% a la secuencia de aminoácidos mostrada en uno cualquiera de los SEQ ID NO: 1 a 28.

2. Un compuesto activo que comprende un polipéptido FKBP-L aislado o un fragmento biológicamente activo de un polipéptido FKBP-L, o un derivado biológicamente activo de un polipéptido FKBP-L o (ii) un polinucleótido que codifica tal polipéptido FKBP-L, fragmento o derivado para su uso en el tratamiento del cáncer, o para uso como un inhibidor de la migración y/o metástasis de células tumorales, o para su uso como un inhibidor del crecimiento y/o la proliferación de células tumorales, en donde el derivado biológicamente activo de un polipéptido FKBP-L comprende una secuencia de aminoácidos idéntica en al menos 70% a la secuencia de aminoácidos mostrada en cualquiera de los SEQ ID NO: 1 a 28.

3. Un compuesto activo para su uso de acuerdo con la reivindicación 2, en donde el polipéptido FKBP-L, fragmento biológicamente activo de un polipéptido FKBP-L, o un derivado biológicamente activo de un polipéptido FKBP-L o fragmento del mismo se proporcionan combinados con al menos un agente quimioterapéutico o quimiopreventivo adicional o radioterapia.

4. Un compuesto activo para su uso de acuerdo con la reivindicación 3, en donde el al menos un agente quimioterapéutico o quimiopreventivo adicional comprende al menos uno de un antiangiogénico, endostatina, angiostatina, un inhibidor de VEGF, un agente citotóxico, un alcaloide, un antimetabolito, un inhibidor del crecimiento del cáncer, un agente terapéutico para terapia génica, una vacuna contra el cáncer, interferón, Aldesleucina, un anticuerpo monoclonal, un fármaco quimioterapéutico, radioterapia, terapia hormonal u otra terapia de apoyo.

5. Un compuesto activo para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el polipéptido FKBP-L comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 10.

6. Un compuesto activo para su uso de acuerdo con la reivindicación 5, en donde el polipéptido FKBP-L comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en el SEQ ID NO: 1, el SEQ ID NO: 2, o el SEQ ID NO: 29.

7. Un compuesto activo para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el fragmento biológicamente activo de FKBP-L comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en cualquiera de los SEQ ID NO: 3 a 7, 10 a 28.

8. Un compuesto activo para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde el derivado biológicamente activo de un polipéptido FKBP-L comprende una secuencia de aminoácidos idéntica en al menos 90% a la secuencia de aminoácidos mostrada en cualquiera de los SEQ ID NOs: 1 a 28, o una secuencia que consiste en al menos 18 aminoácidos contiguos del SEQ ID NO: 10, o una secuencia idéntica en al menos 90% a la misma.

9. Un compuesto activo para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el polinucleótido que codifica dicho polipéptido FKBP-L, fragmento o derivado comprende la secuencia de nucleótidos mostrada en cualquiera de los SEQ ID NOs: 30 a 39, o al menos 54 nucleótidos contiguos de los SEQ ID NO: 30 a 39, o una secuencia idéntica en al menos 90% a la misma.

10. Un polipéptido aislado que comprende la secuencia de aminoácidos que se muestra en el SEQ ID NO: 10, o una secuencia idéntica en al menos 90% al SEQ ID NO: 10, en donde dicho polipéptido incluye no más de 200 aminoácidos consecutivos de la secuencia de aminoácidos mostrada en el SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, o SEQ ID NO: 29, y en donde dicho polipéptido exhibe actividad antiangiogénica.

11. Un polipéptido de acuerdo con la reivindicación 10, que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en cualquiera de los SEQ ID NO: 3 a 28, o una secuencia de aminoácidos idéntica en al menos 90% a la secuencia de aminoácidos mostrada en cualquiera de los SEQ ID NO: 3 a 28.

12. Un polipéptido aislado que comprende un fragmento de FKBP-L biológicamente activo, en donde dicho fragmento consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en al menos uno de los SEQ ID NO: 3 a 7, 10 a 28, en ausencia de cualquier otra secuencia de aminoácido contigua de FKBP-L.

13. Un polipéptido aislado de acuerdo con la reivindicación 12, que consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en al menos uno de los SEQ ID NO: 3 a 7 o 10 a 28.

14. Una molécula de ácido nucleico aislada que codifica el polipéptido de una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 13.

15. La molécula de ácido nucleico aislada de la reivindicación 14, que comprende al menos los nucleótidos 100 a

5 172 del SEQ ID NO: 31 para codificar un péptido del SEQ ID NO: 10.

16. Un vector, tal como un vector de expresión, que comprende el ácido nucleico de la reivindicación 14 o la reivindicación 15.

10 17. Una célula anfitriona transfectada con un vector de acuerdo con la reivindicación 16.

18. Un método para producir un polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 13, cuyo método comprende cultivar una célula anfitriona transformada con un vector de expresión de acuerdo con la reivindicación 16 bajo condiciones que permiten la expresión de dicho polipéptido y recuperar el polipéptido

15 expresado.

19. Una composición que comprende un polipéptido aislado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 13, mezclado con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

20 20. Un polipéptido FKBP-L aislado o un fragmento biológicamente activo de un polipéptido FKBP-L, o un derivado

biológicamente activo de tal polipéptido FKBP-L o fragmento para su uso como un medicamento, en donde el derivado biológicamente activo de un polipéptido FKBP-L comprende una secuencia de aminoácidos idéntica en al menos 70% a la secuencia de aminoácidos mostrada en cualquiera de los SEQ ID NO: 1 a 28.

25 21. Un polipéptido FKBP-L aislado o un fragmento biológicamente activo de un polipéptido FKBP-L para su uso de

acuerdo con la reivindicación 20, en donde dicho polipéptido FKBP-L o fragmento se define como en una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 13.