Compuestos para la inhibición de la histona de acetilasa.

Compuesto representado por la siguiente fórmula (I):**Fórmula**

en la que

R1 y R2 son cada uno de ellos independientemente:

O-alquilo, S-alquilo, NH-alquilo, O-alquenilo, S-alquenilo, NH-alquenilo, O-alquinilo, S-alquinilo, NH-alquinilo, O-C3-8cicloalquilo, S-C3-8cicloalquilo, NH-C3-8cicloalquilo, anillos O- no saturados de 5 a 10 miembros monocíclicos o bicíclicos, anillos O-bencilo, anillos S- no saturados de 5 a 10 miembros monocíclicos o bicíclicos, anillos NH- no saturados de 5 a 10 miembros monocíclicos o bicíclicos, alquilo, alquilenilo, alquinilo, C3-8cicloalquilo, un anillo no saturado de 5 a 10 miembros monocíclico o bicíclico o un anillo no saturado de 5 a 10 miembros heterocíclico que comprende, como mínimo, un heteroátomo de anillo seleccionado del grupo que consiste en: N, O y S; o bien

R1 y R2 pueden formar conjuntamente dioxolano;

R3 es O-alquilo, S-alquilo, NH-alquilo, O-alquenilo, S-alquenilo, NH-alquenilo, O-alquinilo, S-alquinilo, NH-alquinilo, O-C3-8cicloalquilo, S-C3-8cicloalquilo, NH-C3-8cicloalquilo, anillo O- no saturado de 5 a 10 miembros monocíclico o bicíclico, O-bencilo, anillo S- no saturado de 5 a 10 miembros monocíclico o bicíclico, anillo NH- no saturado de 5 a 10 miembros monocíclico o bicíclico, alquilo, alquilenilo, alquinilo, C3-8cicloalquilo, un anillo no saturado de 5 a 10 miembros monocíclico o bicíclico o un anillo saturado o no saturado de 5 a 10 miembros heterocíclico que comprende, como mínimo, un heteroátomo de anillo seleccionado del grupo que consiste en: N, O y S; R4 es OH, OC(≥O)alquilo, O-alquilo, S-alquilo, NH-alquilo, O-alquenilo, S-alquenilo, NH-alquenilo, O-alquinilo, S-alquinilo, NH-alquinilo, O-C3-8cicloalquilo, S-C3-8cicloalquilo, NH-C3-8cicloalquilo, anillo O- no saturado de 5 a 10 miembros monocíclico o bicíclico, O-bencilo, anillo S- no saturado de 5 a 10 miembros monocíclico o bicíclico, anillo NH- no saturado de 5 a 10 miembros monocíclico o bicíclico, alquilo, alquilenilo, alquinilo, C3-8cicloalquilo, un anillo no saturado de 5 a 10 miembros monocíclico o bicíclico o un anillo saturado o no saturado de 5 a 10 miembros heterocíclico que comprende, como mínimo, un heteroátomo de anillo seleccionado del grupo que consiste en: N, O y S;

R5 es C4-16 alquilo o C4-16alquenilo no sustituido o sustituido con uno o varios C1-6alquilo, OH, halógeno, CN, NO, N3, NH2, CHO, OR9, SR9, NR9, COOR9,**Fórmula**

Compuestos para la inhibición de la histona de acetilasa Sector de la invención La presente invención se refiere a nuevos compuestos que son útiles como agentes para la prevención o el tratamiento de enfermedades asociadas con la histona deacetilasa (HDAC) , en particular enfermedades tumorales o proliferativas de las células. También se pueden utilizar como agentes para aumentar el crecimiento de las neuritas. En particular, los compuestos de la invención pueden ser utilizados como agentes para enfermedades anti-neurodegenerativas y de la atrofia muscular espinal humana (SMA)

Antecedentes de la invención El ADN eucariótico está altamente organizado y empaquetado en el núcleo. La organización y empaquetado se consiguen por la adición de proteínas, incluyendo histonas del núcleo H2A, H2B, H3 y H4, que forman una estructura compleja, la cromatina, conjuntamente con el ADN. La modificación de histonas del núcleo es de fundamental importancia para los cambios de conformación de la cromatina. El nivel de acetilación se relaciona con la actividad de transcripción y entonces la acetilación induce una conformación abierta de la cromatina que permite que los instrumentos de la transcripción accedan a promotores. La histona deacetilasa (HDAC) e histona acetiltransferasa (HAT) son enzimas que influyen en la transcripción al desacetilar o acetilar selectivamente los grupos ε-amino de la lisina situada cerca de los amino terminales de las proteínas de histona del núcleo. La HDAC es una familia de 11 enzimas (isoformas) que pueden actuar como reguladores maestro de muchas enfermedades, incluyendo el cáncer, porque están involucrados en el control de expresión de genes. La disrupción de las HDAC se ha relacionado con una amplia variedad de cánceres humanos. Las enzimas de HDAC o isoformas aparecen involucradas en muchos tipos diferentes de cáncer.

Los inhibidores de la histona deacetilasa (HDAC) están mostrando como una atractiva nueva clase de agentes anticancerosos potenciales para el tratamiento de enfermedades malignas sólidas y hematológicas. En estos últimos años, han sido identificados un número creciente de inhibidores estructuralmente diversos de HDAC; inhiben la proliferación e inducen la diferenciación y/o la apoptosis de células tumorales en cultivos y en modelos animales. La inhibición de HDAC provoca que las histonas del núcleo acetiladas se acumulen tanto en los tejidos tumorales como los normales, proporcionando un marcador subrogado para la actividad biológica de inhibidores de HDAC in vivo. Los efectos de los inhibidores de HDAC sobre la expresión de los genes son altamente selectivos, conduciendo a la activación transcripcional de ciertos genes, tales como el inhibidor de quinasa dependiente de ciclina p21WAF1/CIP1 pero conduciendo a la represión de otros. La inhibición de HDAC no solamente resulta de la acetilación de histonas, sino también de factores de transcripción tales como p53, GATA-1 y el receptor alfa de estrógeno. La significación funcional de la acetilación de proteínas de no histona y los mecanismos precisos por los que los inhibidores de HDAC inducen la detención del crecimiento de células tumorales, diferenciación y/o apoptosis son actualmente el núcleo de intensas investigaciones. Los inhibidores de HDAC, actualmente en pruebas clínicas, han mostrado actividad y representan una clase de agentes antitumorales molecularmente dirigidos con potencial de eficacia basados en un nuevo mecanismo de acción.

Un artículo de resumen publicado en Medicinal Research Reviews, Vol. 26, nº 4, págs. 397-413, 2006 señaló que se ha informado sobre cuatro clases de inhibidores de HDAC, ácidos grasos de cadena corta, ácidos hidroxámicos, benzamidas y péptidos cíclicos. Los compuestos polares híbridos basados en ácido hidroxámico (HPC) son inhibidores de HDAC que inducen diferenciación a concentraciones micromolares o inferiores (Journal of the National Cancer Institute, Vol. 92, nº 15, 2 de agosto, 2000, págs. 1210-1216) . Las Patentes: USA nº 6.174.905, EP 0847992, JP 258863/96, y la Solicitud de Patente Japonesa nº 10138957 dan a conocer derivados de benzamida que inducen diferenciación celular HDAC. El documento WO 01/38322 da a conocer compuestos adicionales que sirven como inhibidores de HDAC. Se ha informado en la Publicación Hum Genet, 2006, 120, págs. 101-110 que la benzamida M344 regula de modo creciente la expresión de la proteína SMN2 en células de fibroblastos derivadas de pacientes SMA hasta 7 veces después de 64 horas de tratamiento. Se ha informado que el butirato sódico mejora la expresión fenotípica en un modelo de ratón transgénico de atrofia muscular espinal y bulbar (Human Molecular Genetics, 2004, Vol. 13, nº 11, págs. 1183-1192) . La tricostatina A, un inhibidor de histona deacetilasa, se descubrió que inducía degradación de ciclina D1 dependiente de ubiquitina en células de cáncer de mama MCF-7 (Molecular Cancer 2006, 5:8; este artículo se puede conseguir del enlace: http://www.molecular-cancer.com/content/5/1/81) . La Patente US nº 7.169.801 dio a conocer compuestos que pueden ser utilizados para inhibir la histona deacetilasa teniendo la fórmula Z-Q-L-M o Z-L-M. La Patente US Número 6888027 cubre una familia de inhibidores de sulfonamida de HDAC que incluyen PXD101. La Patente Europea Número EP 1 301 184 cubre la utilización de ácido valpróico y derivados como inhibidores de HDAC en el tratamiento de tumores sólidos. El documento EP-A-1 640 371 da a conocer en la página 6 el compuesto nimfaeol C, que es conocido también como Propolin G. No obstante, los sustituyentes en posiciones R1 y R2 de Propolin G es OH. CHEN C-N Y OTROS: "COMPARISON OF RADICAL SCAVENGING ACTIVITY, CYTOTOXIC EFFECTS AND APOPTOSIS INDUCTION IN HUMAN, MELANOMA CELLS BY TAIWANESE PROPOLIS FROM DIFFERENT SOURCES" EVIDENCE-BASED COMPLEMENTARY AND ALTERNATIVE MEDICINE", XX, XX, vol. 1, nº 2, 18 de agosto de 2004 (2004-08-18) ,

páginas 175185, XP009069460 da a conocer siete compuestos de tipo natural, a saber Propolinas A a F, que se pueden aislar de propolis. FUKAI T Y OTROS: "CYTOTOXIC ACTIVITY OF LOW MOLECULAR WEIGHT POLYPHENOLS AGAINST HUMAN ORAL TUMOR CELL LINES", ANTI-CANCER RESEARCH, HELENIC ANTICANCER INSTITUTE, ATENAS, vol. 20, nº 4, 1 de enero de 2000 (2000-01-01) , páginas 2525-2536, XP001

016407 ISSN: 0250-7005 da a conocer actividad citotóxica contra tumores normales y células infectadas por HIV de 150 polifenoles naturales y sintéticos. No obstante, este documento no indica ni sugiere que estos polifenoles sean efectivos como inhibidores de HDAC.

De manera general existe todavía la necesidad de desarrollar una nueva clase de inhibidores de HDAC para 10 prevenir o tratar cánceres.

Resumen de la invención El objetivo de la invención es dar a conocer un grupo de compuestos representados por la siguiente fórmula (I) : 15

y sales farmacéuticamente aceptables, estereoisómeros, enantiómeros, y solvatos de la misma, que son compuestos útiles como agente para aumentar el crecimiento de neuritas y prevenir o tratar enfermedades asociadas con HDAC, en particular, enfermedades tumorales o de proliferación de las células. En particular, los compuestos de la invención pueden ser utilizados como agentes para enfermedades anti-neurodegenerativas y para la atrofia muscular espinal humana (SMA) .

Breve descripción de los dibujos La figura 1 muestra fotografías microscópicas de células de glioma C6 de rata, tratadas con diferentes concentraciones de NBM-HD-1.

La figura 2 muestra el contenido de ADN de las células de glioma C6 de rata analizadas por medio de citometría 30 FACScan.

La figura 3 muestra el gráfico de electroforesis de los genes del ciclo celular de las células C6 de glioma de rata tratadas con diferentes dosis de NBM-HD-1.

La figura 4 muestra las fotografías de tinción inmuno-fluorescente y datos RT-PCR de las células de glioma C6 de rata tratadas con NBM-HD-1.

La figura 5 muestra un gráfico de transferencia Western de las células de glioma C6 de rata tratadas con NBM-HD-1 y butirato sódico.

La figura 6 muestra la actividad inhibida del HDAC en las células de glioma C6 de rata tratadas con NBM-HD-1 y butirato sódico.

La figura 7 muestra las fotografías microscópicas de células de cáncer DBTRG-05MG de giloblasatoma humano 45 tratadas con diferentes dosis de NBM-HD-1.

La figura 8 muestra las fotografías microscópicas de células de cáncer MCF-7 de mama humana tratadas con diferentes dosis de NBM-HD-1.

La figura 9 muestra que NBM-HD-1 inhibieron notablemente el crecimiento de células MCF-7 por modulación del ciclo celular detenido en la fase G0/G1 de forma dependiente de la dosis.

WAF1/CIP1

La figura 10... [Seguir leyendo]

1. Compuesto representado por la siguiente fórmula (I) :

en la que R1 y R2 son cada uno de ellos independientemente: O-alquilo, S-alquilo, NH-alquilo, O-alquenilo, S-alquenilo, NH-alquenilo, O-alquinilo, S-alquinilo, NH-alquinilo, O-C3-8cicloalquilo, S-C3-8cicloalquilo, NH-C3-8cicloalquilo, anillos O-no saturados de 5 a 10 miembros monocíclicos o bicíclicos, anillos O-bencilo, anillos S-no saturados de 5 a 10 miembros monocíclicos o bicíclicos, anillos NH-no saturados de 5 a 10 miembros monocíclicos o bicíclicos, alquilo, alquilenilo, alquinilo, C3-8cicloalquilo, un anillo no saturado de 5 a 10 miembros monocíclico o bicíclico o un anillo no saturado de 5 a 10 miembros heterocíclico que comprende, como mínimo, un heteroátomo de anillo seleccionado del grupo que consiste en: N, O y S; o bien R1 y R2 pueden formar conjuntamente dioxolano; R3 es O-alquilo, S-alquilo, NH-alquilo, O-alquenilo, S-alquenilo, NH-alquenilo, O-alquinilo, S-alquinilo, NH-alquinilo, O-C3-8cicloalquilo, S-C3-8cicloalquilo, NH-C3-8cicloalquilo, anillo O-no saturado de 5 a 10 miembros monocíclico o bicíclico, O-bencilo, anillo S-no saturado de 5 a 10 miembros monocíclico o bicíclico, anillo NH-no saturado de 5 a 10 miembros monocíclico o bicíclico, alquilo, alquilenilo, alquinilo, C3-8cicloalquilo, un anillo no saturado de 5 a 10

miembros monocíclico o bicíclico o un anillo saturado o no saturado de 5 a 10 miembros heterocíclico que comprende, como mínimo, un heteroátomo de anillo seleccionado del grupo que consiste en: N, O y S; R4 es OH, OC (=O) alquilo, O-alquilo, S-alquilo, NH-alquilo, O-alquenilo, S-alquenilo, NH-alquenilo, O-alquinilo, S-alquinilo, NH-alquinilo, O-C3-8cicloalquilo, S-C3-8cicloalquilo, NH-C3-8cicloalquilo, anillo O-no saturado de 5 a 10 miembros monocíclico o bicíclico, O-bencilo, anillo S-no saturado de 5 a 10 miembros monocíclico o bicíclico, anillo NH-no saturado de 5 a 10 miembros monocíclico o bicíclico, alquilo, alquilenilo, alquinilo, C3-8cicloalquilo, un anillo no saturado de 5 a 10 miembros monocíclico o bicíclico o un anillo saturado o no saturado de 5 a 10 miembros heterocíclico que comprende, como mínimo, un heteroátomo de anillo seleccionado del grupo que consiste en: N, O y S; R5 es C4-16 alquilo o C4-16alquenilo no sustituido o sustituido con uno o varios C1-6alquilo, OH, halógeno, CN, NO, N3,

NH2, CHO, OR9, SR9, NR9, COOR9,

R6 es C2-12alquilo o C2-12alquenilo no sustituido o sustituido con uno o varios C1-6alquilo, OH, halógeno, CN, NO, N3, 35 NH2, CHO, OR9, SR9, NR9,

o bien

R7 es hidrógeno, halógeno, OH, NH2, COOH, CHO, CN, NO, o bien R7 y R8 pueden formar conjuntamente un doble enlace, un C3-6cicloalquilo, o un anillo de 5 a 10 miembros heterocíclico que comprende, como mínimo, un heteroátomo de anillo seleccionado del grupo que consiste en: N, O y S;

R8 es hidrógeno, halógeno, OH, NH2, COOH, CHO, CN o NO; R9 es fenilo, C (=O) R10 o C (=O) OR10; y R10 es OH, NHOH o NH2; en las que tanto R5 como R6 no son simultáneamente alquilo o alquenilo no sustituido;

o bien sales farmacéuticamente aceptables, estereoisómeros, enantiómeros y solvatos de los mismos. 10

2. Compuesto, según la reivindicación 1, en el que R1 y R2 son cada uno de ellos independientemente OC1-6alquilo, O-fenilo o O-bencilo o bien R1 y R2 conjuntamente forman dioxaleno.

3. Compuesto, según la reivindicación 2, en el que R1 y R2 son cada uno de ellos independientemente OCH3, 15 OCH2CH3, OCH2CH2CH3, O-fenilo o O-bencilo.

4. Compuesto, según la reivindicación 1, en el que R1 y R2 conjuntamente forman dioxaleno.

5. Compuesto, según la reivindicación 1, en el que R3 y R4 son cada uno de ellos independientemente 20 OC1-6alquilo, O-fenilo o O-bencilo.

6. Compuesto, según la reivindicación 1, en el que R3 y R4 son cada uno de ellos independientemente OCH3, OCH2CH3, OCH2CH2CH3, O-fenilo o O-bencilo.

7. Compuesto, según la reivindicación 1, en el que R5 es

9. Compuesto, según la reivindicación 1, seleccionado del grupo que consiste en:

y

10. Compuesto, según la reivindicación 1, seleccionado del grupo que consiste en:

5y

11. Estereoisómero del compuesto de fórmula (I) , según la reivindicación 1, que está representado por la siguiente 10 fórmula (II) :

en la que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 y R8 son definidos como en la fórmula (I) .

12. Compuesto, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 para su utilización como medicamento. 5

13. Composición farmacéutica que comprende el compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, o sales farmacéuticamente aceptables, estereoisómeros, enantiómeros y solvatos del mismo como un ingrediente activo y un portador farmacéuticamente aceptable.

14. Utilización del compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 o sales farmacéuticamente aceptables, estereoisómeros, enantiómeros y solvatos del mismo en la fabricación de un medicamento para inhibir la histona deacetilasa (HDAC) en un paciente.

15. Utilización del compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 o sales farmacéuticamente aceptables, estereoisómeros, enantiómeros y solvatos del mismo en la fabricación de un medicamento para tratar tumores o enfermedades proliferativas de las células en un paciente.

16. Utilización del compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 o sales farmacéuticamente aceptables, estereoisómeros, enantiómeros y solvatos del mismo en la fabricación de un medicamento para 20 aumentar el crecimiento de las neuritas en un paciente.

17. Utilización del compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 o sales farmacéuticamente aceptables, estereoisómeros, enantiómeros y solvatos del mismo en la fabricación de un medicamento para tratar enfermedades neurodegenerativas y atrofia muscular espinal humana (SMA) en un paciente.