Célula para su uso en la producción de proteína exógena, y procedimiento de producción usando la célula.

Método de producción de un anticuerpo, que comprende cultivar una célula que expresa fuertemente un transportador de bicarbonato y tiene un ADN transferido que codifica un anticuerpo y permitiendo de ese modo que la célula produzca dicho anticuerpo,

en el que la célula que expresa fuertemente un transportador de bicarbonato es una célula a la que se ha transferido un ADN que codifica el transportador de bicarbonato.

Célula para su uso en la producción de proteína exógena, y procedimiento de producción usando la célula Campo técnico

La presente invención se refiere a una célula que va a usarse en la producción de heteroproteínas y a un método de producción usando la célula. En más detalle, la presente invención se refiere a una célula que expresa fuertemente un transportador de bicarbonato y a un método para producir un polipéptido usando la célula.

Técnica anterior

Cuando se producen proteínas útiles como productos farmacéuticos con la técnica de ADN recombinante, el uso de células animales permite una modificación postraduccional y un plegamiento complicados que las células procariotas no pueden realizar. Por tanto, con frecuencia se usan células animales como células huésped para producir proteínas recombinantes.

Recientemente se han desarrollado un gran número de productos biofarmacéuticos, tales como anticuerpos y proteínas fisiológicamente activas. Las técnicas que permiten la producción eficaz de proteínas recombinantes por células animales conducen a una reducción del coste de los productos biofarmacéuticos y prometen su suministro estable a los pacientes.

En estas circunstancias, se desea un método de producción de proteínas con mayor eficacia de producción.

Un intercambiador aniónico es un transportador que media el antiporte de aniones intracelulares y extracelulares a través de una membrana plasmática (proteína de transporte de membrana). Una familia SLC4 es una familia de transportadores de HCO3", y tres miembros pertenecientes a la familia SLC4, concretamente AE1, AE2 y AE3, tienen la función de intercambiar CI' fuera de una membrana plasmática por HCO3' dentro de una membrana plasmática.

En el riñón, se encuentra AE1 en células a intercaladas en los conductos colectores en la membrana basolateral (documento no de patente 1). Se ha sabido que mutaciones en AE1 humano producen acidosis tubular renal distal (documentos no de patente 2 y 3).

Además, en el riñón, se han encontrado tres ¡soformas de AE2, concretamente AE2a, AE2b y AE2c. Se considera que AE2 regula la homeostasls del pH ¡ntracelular para la transducción de señales celulares (documento no de patente 4). Sin embargo, se ha encontrado que un ratón deficiente en AE2 que muere durante el periodo de destete no padece anomalías fenotíplcas renales (documento no de patente 5).

SLC26 es una familia de intercambiadores aniónicos relativamente nueva, y se ha sugerido que un gran número de sus miembros (por ejemplo, SLC26A3, SLC26A4, SLC26A6 y SLC26A9) son intercambiadores de bicarbonato (documentos no de patente 6 a 11).

Por otra parte, se desconoce absolutamente si expresando fuertemente un intercambiador aniónico que tiene una función de transportador de bicarbonato, puede promoverse artificialmente la captación de aniones al interior de una célula en cultivo y la excreción de aniones al exterior de la célula, mediado por el intercambiador aniónico, lo que contribuye a la mejora en la producción de una proteína recombinante deseada en la célula en cultivo.

[Documento no de patente 1]

van Adelsberg JS. et. al., J Biol Chem 1993; 268:11283-11289 [Documento no de patente 2]

Shayakui C. et. al., Curr Opin Nephrol Hypertens 2000; 9:541-546 [Documento no de patente 3]

Alper SL. et. al., Annu Rev Physiol 2002; 64:899-923 [Documento no de patente 4]

Komlosi P. et. al., Am J Physiol Renal Physiol 2005; 288:F380-F386 [Documento no de patente 5]

Gawenis LR. et. al., J Biol Chem 2004; 279:30531-30539 [Documento no de patente 6]

Melvin etal, J Biol Chem 1999; 274:22855-22861

[Documento no de patente 7]

Ko et al., EMBO J. 2002; 21:5662-5672 [Documento no de patente 8]

Soleimani et al., Am. J. Physiol. Renal Physiol. 2001; 280:F356-F364 [Documento no de patente 9]

Wang et al, Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2002; 282:G573-G579 [Documento no de patente 10]

Petrovlc etal., Am. J. Physiol. Renal Physiol. 2004; 286:F161-F169 [Documento no de patente 11]

Xu etal., Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2005; 289:C493-C505

Descripción de la invención

Problemas que va a solucionar la invención

Un objeto de la presente Invención es proporcionar un método que pueda producir un polipéptido eficazmente. Medios para resolver el problema

Como resultado de extensas e Intensivas investigaciones enfocadas a la solución del problema anterior, los presentes inventores han encontrado que es posible aumentar el rendimiento de un polipéptido deseado mediante el uso de una célula que expresa fuertemente un transportador de bicarbonato. Así se ha logrado la presente invención. Además, el péptido deseado podría producirse en una cantidad incluso mayor mediante el uso de células que pueden coexpresar un transportador de bicarbonato y ácido cisteína-sulfínico descarboxilasa (a continuación en el presente documento denominada en ocasiones "OSAD") o alanina aminotransferasa (a continuación en el presente documento denominada en ocasiones "ALT").

La presente invención puede resumirse de la siguiente manera.

(1) Un método de producción de un polipéptido, que comprende cultivar una célula que expresa fuertemente un transportador de bicarbonato y tiene un ADN transferido que codifica un polipéptido deseado y permitiendo de ese modo que la célula produzca dicho polipéptido.

(2) El método de (1) anterior, en el que la célula que expresa fuertemente un transportador de bicarbonato es una célula a la que se ha transferido un ADN que codifica el transportador de bicarbonato.

(3) El método de producción de (1) ó (2) anterior, en el que la célula que expresa fuertemente un transportador de bicarbonato expresa además fuertemente ácido cisteína-sulfínico descarboxilasa o alanina aminotransferasa.

(4) El método de producción según uno cualquiera de (1 )-(3) anteriores, en el que el transportador de bicarbonato es un intercambiador aniónico SLC4 o un intercambiador aniónico SLC26.

(5) El método de producción según uno cualquiera de (1 )-(3) anteriores, en el que el transportador de bicarbonato es un intercambiador aniónico SLC4.

(6) El método de producción de (5) anterior, en el que el intercambiador aniónico SLC4 es AE1.

(7) El método según uno cualquiera de (1)-(6) anteriores, en el que la célula son células de ovario de hámster chino.

(8) El método según uno cualquiera de (1)-(7) anteriores, en el que el péptido deseado es un anticuerpo.

(9) El método según uno cualquiera de (4)-(6) anteriores, en el que el ADN que codifica el intercambiador aniónico SLC4 es uno cualquiera de los siguientes (a) a (e):

(a) un ADN que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos tal como se muestra en SEQ ID NO:

2;

(b) un ADN que codifica un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos derivada de la secuencia de aminoácidos tal como se muestra en SEQ ID NO: 2 mediante sustitución, deleción, adición y/o inserción de uno o más residuos de aminoácido y aún tiene actividad de intercambiador aniónico SLC4;

(c) un ADN que codifica un polipéptido que tiene una homología de secuencia de aminoácidos del 50% o más con la

secuencia de aminoácidos tal como se muestra en SEQ ID NO: 2 y que aún tiene actividad de intercambiador aniónico SLC4;

(d) un ADN que tiene la secuencia de nucleótidos tal como se muestra en SEQ ID NO: 1;

(e) un ADN que se híbrida con un ADN complementario a un ADN que tiene la secuencia de nucleótidos tal como se muestra en SEQ ID NO: 1 en condiciones rigurosas y aún codifica un polipéptido que tiene actividad de intercambiador aniónico SLC4.

(10) Un método de preparación de un producto farmacéutico que contiene un polipéptido preparado mediante el método según uno cualquiera de (1 )-(9) anteriores.

(11) Una célula que tiene un ADN transferido que codifica un transportador de bicarbonato y un ADN transferido que codifica un polipéptido deseado.

(12) La célula según (11) anterior, que tiene además un ADN transferido que codifica ácido cisteína-sulfínico descarboxilasa o alanina aminotransferasa.

(13) Una célula que tiene un ADN transferido que codifica un transportador de bicarbonato y un ADN transferido que codifica ácido cisteína-sulfínico descarboxilasa o alanina aminotransferasa.

Efecto de la invención

Según la presente invención, se ha hecho posible producir un polipéptido deseado con alto rendimiento.

La presente memoria descriptiva engloba el contenido descrito en la memoria descriptiva y/o los dibujos de la solicitud... [Seguir leyendo]

Método de producción de un anticuerpo, que comprende cultivar una célula que expresa fuertemente un transportador de bicarbonato y tiene un ADN transferido que codifica un anticuerpo y permitiendo de ese modo que la célula produzca dicho anticuerpo, en el que la célula que expresa fuertemente un transportador de bicarbonato es una célula a la que se ha transferido un ADN que codifica el transportador de bicarbonato.

Método de producción según la reivindicación 1, en el que la célula que expresa fuertemente un transportador de bicarbonato expresa además fuertemente ácido cistefna-sulfínico descarboxilasa o alanina aminotransferasa.

Método de producción según la reivindicación 1 ó 2, en el que el transportador de bicarbonato es un intercambiador aniónico SLC4 o un intercambiador aniónico SLC26.

Método de producción según la reivindicación 1 ó 2, en el que el transportador de bicarbonato es un intercambiador aniónico SLC4.

Método de producción según la reivindicación 4, en el que el intercambiador aniónico SLC4 es AE1.

Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que la célula son células de ovario de hámster chino.

Método según una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5, en el que el ADN que codifica el intercambiador aniónico SLC4 es uno cualquiera de los siguientes (a) a (e):

(a) un ADN que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos tal como se muestra en SEQ ID NO: 2;

(b) un ADN que codifica un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos derivada de la secuencia de aminoácidos tal como se muestra en SEQ ID NO: 2 mediante sustitución, deleción, adición y/o inserción de uno o más residuos de aminoácido y aún tiene actividad de intercambiador aniónico SLC4;

(c) un ADN que codifica un polipéptido que tiene una homología de secuencia de aminoácidos del 50% o más con la secuencia de aminoácidos tal como se muestra en SEQ ID NO: 2 y que aún tiene actividad de intercambiador aniónico SLC4;

(d) un ADN que tiene la secuencia de nucleótidos tal como se muestra en SEQ ID NO: 1;

(e) un ADN que se híbrida con un ADN complementario a un ADN que tiene la secuencia de nucleótidos tal como se muestra en SEQ ID NO: 1 en condiciones rigurosas y aún codifica un polipéptido que tiene actividad de intercambiador aniónico SLC4.

Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que dicho método se usa para producir un anticuerpo en la preparación de un producto farmacéutico.

Célula que tiene un ADN transferido que codifica un transportador de bicarbonato, y

(a) un ADN transferido que codifica un anticuerpo; y/o

(b) un ADN que codifica ácido cisteína-sulfínico descarboxilasa o alanina aminotransferasa.