BIOMARCADORES, MÉTODO Y KIT PARA EL DIAGNÓSTICO TEMPRANO DEL ADENOCARCINOMA DUCTAL DE PÁNCREAS.

Biomarcadores, método y kit para el diagnóstico temprano del adenocarcinoma ductal de páncreas.

Biomarcadores, método y kit de diagnóstico temprano de cáncer de páncreas, en particular, de adenocarcinoma ductal de páncreas (PDAC).

BIOMARCADORES, MÉTODO Y KIT PARA EL DIAGNÓSTICO TEMPRANO DEL ADENOCARCINOMA DUCTAL DE PÁNCREAS

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se encuentra dentro del campo de la Biología Molecular y la Medicina. Específicamente, se refiere a un método de obtención de datos útiles para el diagnóstico temprano del adenocarcinoma ductal de páncreas. El diagnóstico precoz se realiza mediante el análisis de los biomarcadores FGF-10, CXCL11, OSM, GPNMB y SCF.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

El adenocarcinoma ductal de páncreas (PADC) posee una de las tasas de mortalidad más altas entre todos los tipos de cáncer. Los nuevos casos de este cáncer alcanzaron los 44.000 individuos el año pasado (2012) y de ellos, 37.400 murieron (el 85%). Hombres y mujeres tienen aproximadamente un riesgo similar de padecerlo (Siegel et al., 2012. C.A. Cáncer J. Clin. 62, 10-29). Entre los motivos de la escasa respuesta al tratamiento se encuentran el diagnóstico tardío dado que en la mayoría da los casos cuando el cáncer es detectado se ha producido metástasis y los mecanismos intrínsecos de resistencia a la quimioterapia (Hidalgo, 2010. N. Engl. J. Med. 362, 1605-1617; Sakar et al. 2007. Toxico!. Appl. Pharmacol. 224, 326-336). Debido al impacto que el diagnóstico temprano tiene en la supervivencia de los pacientes (Agarwal et al., 2008. Páncreas 36, 15-20), son necesarias mejores herramientas de diagnóstico sencillas para la detección y evaluación de la enfermedad. El suero es la mejor opción para obtener muestras donde estudiar los tumores malignos ya que puede ser tomado por métodos no invasivos. En el caso del cáncer de páncreas es especialmente útil ya queel acceso al órgano diana es muy difícil. Por estas razones, los biomarcadores del cáncer basados en suero constituyen las pruebas de detección más sencillas. Hasta la fecha, el único biomarcador basado en suero para el PDAC usado es el antígeno carbohidrato 19-9 (CA), con sensibilidad entre el 70 y 90% y especificidad entre el 70 y 98%, dependiendo del tamaño del tumor (Chan et al., 2012. J. Proteomics). No obstante, este biomarcador no es detectado si el tamaño del tumor es menor a 2 centímetros y por la falta de expresión en el 10% de los pacientes. Esto también ocurre en otras patologías. Por ello y desde

hace poco, la Sociedad Americana de Oncología no recomienda CA 19-9 para las pruebas de detección del PADC (Duffy et al., 2010. Ann. Oncí. 21, 441-447)

Existe una estrecha relación entre los procesos inflamatorios y la carcinogénesis (Mantovani et al., 2008. Nature 454, 436-444; Germano et al., 2008. Cytokine 43, 374- 379). El cáncer pancreático está caracterizado por una densa reacción desmoplásica, la cual representa una barrera importante que previene la liberación efectiva de los agentes quimioterapéuticos en el sitio principal de la enfermedad. Además, el microambiente del complejo tumoral nutre la invasión y metástasis del cáncer pancreático (Shields et al., 2012. Biochem J. 441, 541-542; Nesse et al., 2011. Gut. 60, 861-868; Luo et al., 2012. Biochim. Biophys Acta. 1826, 170-178). Las citoquinas liberadas por células cancerosas o por células en el interior del microambiente tumoral son los arquitectos de esta reacción. Teniendo en cuenta lo anterior, consideramos que una modulación en los niveles de citoquinas podría reflejar los procesos que llevan al desarrollo de la enfermedad o a la quimioresistencia.

Los arrays basados en anticuerpos representan una herramienta útil para el descubrimiento de biomarcadores del cáncer. Esta metodología destaca por su capacidad de ofrecer percepciones rápidas y correctas para la detección temprana de biomarcadores del cáncer, aportando nuevos enfoques para terapias contra el cáncer (Breman et al., 2010. Nat. Rev. Cáncer 10, 605-617)

Por tanto la identificación y validación de biomarcadores individuales o conjuntos de biomarcadores para la rápida detección del PDAC (biomarcadores diagnóstico) ayudaría a incrementar la supervivencia de los pacientes.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

Un primer aspecto de la invención se refiere al uso de los genes (y/o proteínas) FGF- 10, CXCL11, OSM, GPNMB y SCF, para el diagnóstico temprano del cáncer de páncreas. El uso puede ser simultáneo o puede elegirse cualquiera de los genes (y/o proteínas), o cualquiera de sus combinaciones.

En una realización preferida de este aspecto de la invención el cáncer de páncreas es el adenocarcinoma ductal de páncreas (PDAC)

Otro aspecto de la invención se refiere a un método de obtención de datos útiles, de ahora en adelante primer método de la invención, para el diagnóstico temprano del cáncer de páncreas, que comprende:

a) Obtener una muestra aislada del individuo.

b) cuantificar el producto de expresión de los genes que se seleccionan de la lista que consiste en: FGF-10, CXCL11, OSM, GPNMB y SCF.

Se puede cuantificar el producto de expresión de todos los genes simultáneamente, o puede elegirse cualquiera de los genes (y/o proteínas), o cualquiera de sus combinaciones.

En otra realización preferida, el método de la invención además comprende:

c) comparar las cantidades obtenidas en el paso (b) con una cantidad de referencia.

En una realización preferida del método de la invención, los pasos (b) y/o (c) de los métodos descritos anteriormente pueden ser total o parcialmente automatizados.

Otro aspecto de la invención se refiere a un método de diagnóstico del cáncer de páncreas que comprende los paso (a)-(c) según el primer método de la invención, y además comprende asignar al individuo del paso (a) al grupo de individuos que padecen cáncer de páncreas cuando presentan una cantidad de producto de expresión del los genes FGF-10, CXCL11, OSM, GPNMB y SCF, superior a la cantidad de referencia.

En una realización preferida de este aspecto de la invención el cáncer de páncreas es el adenocarcinoma ductal de páncreas (PDAC)

En una realización preferida del método de la invención, la muestra biológica aislada de un individuo del paso (a) es una muestra de sangre.

En otra realización preferida, la detección de la cantidad de expresión de cualquiera de los genes FGF-10, CXCL11, OSM, GPNMB y SCF se realiza mediante un inmunoensayo.

En otra realización preferida, el inmunoensayo es un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas o ELISA {Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay).

Otro aspecto de la invención se refiere a un anticuerpo para tratar un individuo que padece cáncer de páncreas (o alternativamente al uso de un anticuerpo en la elaboración de un medicamento para el tratamiento del cáncer de páncreas), identificable por un método de la invención, donde el anticuerpo se selecciona de entre anti-FGF-10, anti-CXCL11, anti-OSM, anti-GPNM y anti-SCF, o cualquiera de sus

combinaciones. Preferiblemente se emplea una combinación de todos los anticuerpos anteriores. En otra realización preferida de este aspecto de la invención el cáncer de páncreas es el adenocarcinoma ductal de páncreas (PDAC).

Otro aspecto de la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un agente modulador de al menos uno de los genes que se seleccionan de entre FGF-10, CXCL11, OSM; GPNMB y SCF, para tratar a un individuo que padece cáncer de páncreas (o alternativamente al uso de una composición farmacéutica que comprende un agente modulador de al menos uno de los genes que se seleccionan de entre FGF-10, CXCL11, OSM, GPNMB y SCF en la elaboración de un medicamento para el tratamiento del cáncer de páncreas), y más preferiblemente del adenocarcinoma ductal de páncreas (PDAC), identificable por un método de la invención.

Otro aspecto de la presente invención se refiere a un kit o dispositivo, de ahora en adelante kit de la invención, que comprende los elementos necesarios para cuantificar la cantidad de producto de expresión de los genes que se seleccionan de entre FGF- 10, CXCL11, OSM, GPNMB y SCF o cualquiera de sus combinaciones.

En una realización preferida, el kit de la presente invención comprende los anticuerpos que se seleccionan de la lista que consiste en anticuerpos: anti-FGF-10, anti- CXCL11, anti-OSM, anti- GPNM y anti-SCF, o cualquiera de sus combinaciones. Preferiblemente, el kit de la invención comprende simultáneamente al menos un anticuerpo de cada tipo: anti-FGF-10, anti- CXCL11, anti-OSM, anti- GPNM y anti- SCF.

En otra realización preferida, el kit de la invención comprende anticuerpos secundarios o controles positivos y/o negativos. El kit además puede incluir, sin ningún tipo de limitación, tampones, soluciones de extracción de proteínas, agentes para prevenir la contaminación,...

1.- El uso simultáneo de los genes FGF-10, CXCL11, OSM, GPNMB y SCF, para el diagnóstico del cáncer de páncreas.

5 2.- El uso, según la reivindicación anterior, donde el cáncer de páncreas es el

adenocarcinoma ductal de páncreas (PDAC).

3.- Un método de obtención de datos útiles, para el diagnóstico del cáncer de páncreas, que comprende:

a) obtener una muestra aislada del individuo.

10 b) cuantificar la cantidad de producto de expresión de los genes FGF-10,

CXCL11, OSM, GPNMB y SCF.

4.- El método según la reivindicación anterior, que además comprende:

c) comparar las cantidades obtenidas en el paso (b) con una cantidad de referencia.

15 5. El método según cualquiera de las reivindicaciones 3-4, donde los pasos (b) y/o (c)

pueden ser total o parcialmente automatizados.

6.- Un método de diagnóstico del cáncer de páncreas que comprende los paso (a)-(c) según cualquiera de las reivindicaciones 3-5, y además comprende asignar al individuo del paso (a) al grupo de individuos que padecen cáncer de páncreas cuando

20 presentan una cantidad de producto de expresión del los genes FGF-10, CXCL11, OSM, GPNMB y SCF, superior a la cantidad de referencia.

7.- El método según cualquiera de las reivindicaciones 3-6, donde cáncer de páncreas es el adenocarcinoma ductal de páncreas (PADC).

8.- El método según cualquiera de las reivindicaciones 3-7, donde la muestra biológica 25 es una muestra de sangre, y preferiblemente suero.

9.- El método según cualquiera de las reivindicaciones 3-8, donde la cuantificación se hace mediante inmunoensayo.

10.- El uso de un anticuerpo en la elaboración de un medicamento para tratar un individuo que padece cáncer de páncreas, identificable por un método según

cualquiera de las reivindicaciones 3-9, donde el anticuerpo se selecciona de entre anti- FGF-10, anti- CXCL11, anti-OSM, anti- GPNM y anti-SCF.

11.- Un kit o dispositivoque comprende los anticuerpos anti-FGF-10, anti- CXCL11, anti-OSM, anti- GPNM y anti-SCF.

5 12.- Un soporte sólido, o chip de proteínas, que comprende al menos uno de los

anticuerpos anti-FGF-10/, anti- CXCL11, anti-OSM, anti- GPNM y anti-SCF, o cualquiera de sus combinaciones, para llevar a cabo un método según cualquiera de las reivindicaciones 3-9.

13.- Un soporte sólido, o chip de DNA, que comprende oligonucleótidos o 10 microarreglos de canal único diseñados a partir de una secuencia conocida o un ARNm de al menos uno de los genes FGF-10, CXCL11, OSM, GPNM y SCF, o cualquiera de sus combinaciones, para llevar a cabo un método según cualquiera de las reivindicaciones 3-9.