Anticuerpos humanizados contra interferón alfa humano.

Un anticuerpo humanizado anti-IFN-α,

o un fragmento del mismo de enlazamiento al antígeno,

que comprende las siguientes secuencias de CDR del VH:

(a) una secuencia de CDR H1 que consiste de la SEQ ID NO: 15;

(b) una secuencia de CDR H2 que consiste de la SEQ ID NO: 21; y

(c) una secuencia de CDR H3 que consiste de la SEQ ID NO: 17; y

comprende además las siguientes secuencias de CDR de VH:

(d) una secuencia de CDR L1 que consiste de la SEQ ID NO: 18;

(e) una secuencia de CDR L2 que consiste de la SEQ ID NO: 19; y

(f) una secuencia de CDR L3 que consiste de la SEQ ID NO: 20.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2009/055448.

Solicitante: Argos Therapeutics, Inc.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 4233 Technology Drive Durham, NC 27704 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: SVENSSON,LARS ANDERS, PADKJÆR,SØREN, FRIEDRICHSEN,BIRGITTE, OLSEN KROGH,BERIT, LUND PEDERSEN,INGER, FLECKNER,JAN.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C07K16/24 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02;   proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra citoquinas, linfoquinas o interferones.
  • C07K16/46 C07K 16/00 […] › Inmoglobulinas híbridas (híbridos de una inmunoglobulina con un péptido distinto de una inmunoglobulina C07K 19/00).

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Ilustración 1 de Anticuerpos humanizados contra interferón alfa humano.
Ilustración 2 de Anticuerpos humanizados contra interferón alfa humano.
Ilustración 3 de Anticuerpos humanizados contra interferón alfa humano.
Ilustración 4 de Anticuerpos humanizados contra interferón alfa humano.
Ver la galería de la patente con 12 ilustraciones.
Anticuerpos humanizados contra interferón alfa humano.

Fragmento de la descripción:

Anticuerpos humanizados contra interferón alfa humano Campo de la invención La presente invención se refiere a anticuerpos humanizados contra interferón alfa (IFN-α) humano y su uso en el tratamiento o prevención de varias enfermedades y trastornos en pacientes humanos.

Antecedentes de la invención Con base a una variedad de diferentes observaciones, el interferón alfa (IFN-α) es una citoquina que se cree que está involucrada en una variedad de enfermedades autoinmunes. Aunque los pacientes con lupus eritematoso sistémico (SLE) frecuentemente no tienen niveles medibles en suero de IFN-α, parecen tener la firma clara del gen del IFN-α. Además, la inducción de la maduración de células dendríticas (DC) mediante el tratamiento de las DC con suero de pacientes con SLE, se puede inhibir por un anticuerpo anti-IFN-α. También se ha demostrado que la inactivación del receptor de IFN-α/β en ratones New Zeeland Black (NZB) que tienen un fenotipo de SLE da por resultado un fenotipo casi normal (Santiago-Raber y colaboradores, J Exp. Med. 2003; 197 (6) : 777-88) .

Por lo tanto, se han sugerido anticuerpos contra IFN-α como herramientas para neutralizar la actividad de esta citoquina para el tratamiento de estas enfermedades autoinmunes, solos o en combinación. Se generaron y caracterizaron anticuerpos murinos específicos (ACO-1 a ACO-6) que reconocen una amplia variedad de diferentes subtipos de IFN-α, como se describe en la solicitud de patente internacional, publicada como WO20060086586. Sin embargo, los anticuerpos murinos no son adecuados para el uso en humanos debido a su inmunogenicidad, y por lo tanto es deseable generar anticuerpos humanizados donde se injertan las CDR de murino en un anticuerpo humano de andamiaje. Sin embargo, los anticuerpos humanizados padecen frecuentemente de deficiencias funcionales en comparación con los progenitores murinos, tales como por ejemplo, una menor afinidad y/o estabilidad y/o inmunogenicidad indeseable. Estas deficiencias en los anticuerpos humanizados se pueden compensar, en algunos casos, mediante una o unas pocas retromutaciones puntuales. Usualmente, es deseable no realizar o solamente muy pocas retromutaciones puntuales ya que la presencia de muchas retromutaciones tiende a dar como resultado una baja estabilidad indeseable y/o un grado indeseable de inmunogenicidad. Por lo tanto, es deseable proporcionar un anticuerpo anti-IFN-α humanizado, seguro y estable, que tenga propiedades biológicas deseables tal como, por ejemplo, la retención de la afinidad y potencia del anticuerpo anti-IFN-α humanizado en un gran número de subtipos de IFN-α.

Existe por lo tanto la necesidad en la técnica de anticuerpos anti-IFN-α humanizados que tengan características deseables con respecto a características tales como, por ejemplo, estabilidad, especificidad, seguridad, inmunogenicidad, etc. Adicionalmente, existe la necesidad en la técnica de métodos eficientes para producir estos anticuerpos.

Resumen de la invención En un primer aspecto, la presente invención se refiere a un anticuerpo humanizado que se enlaza de manera específica a interferón α (IFN-α) humano, o a un fragmento del mismo de enlazamiento al antígeno, que comprende las siguientes secuencias de CDR del VH.

(a) una secuencia de la CDR H1 que consiste de la SEQ ID NO: 15;

(b) una secuencia de la CDR H2 que consiste de la SEQ ID NO: 21; y

(c) una secuencia de la CDR H3 que consiste de la SEQ ID NO: 17;

y además comprende las siguientes secuencias VL de la CDR:

(d) una secuencia de la CDR L1 que consiste de la SEQ ID NO: 18;

(e) una secuencia de la CDR L2 que consiste de la SEQ ID NO: 19; y

(f) una secuencia de la CDR L3 que consiste de la SEQ ID NO: 20.

La presente divulgación se refiere además a un anticuerpo humanizado que se enlaza de manera específica a IFN-α, o un fragmento del mismo que se enlaza al antígeno, en donde dicho anticuerpo es capaz de enlazar a los subtipos de IFN-α A, 2, B2, C, F, G, H2, I, J1, K, 4a, 4b y WA, pero no a los subtipos 1 o D, y en donde dicho anticuerpo comprende menos residuos de aminoácido del donante que las CDR no humanas de acuerdo a Kabat.

La presente divulgación se refiere además a métodos para obtener estos anticuerpos. En otro aspecto, la presente invención gira alrededor del uso de tales anticuerpos para propósitos terapéuticos y de composiciones que comprenden estos anticuerpos.

Los anticuerpos de acuerdo a la presente invención pueden ser adecuados para el tratamiento de varias enfermedades inflamatorias.

Descripción de las figuras La Figura 1 muestra el análisis de las secuencias de ACO-1 VH y VL (B) de murino para humanización (hz = humanizadas) , donde la máscara se muestra en texto sombreado, las CDR de Kabat se muestran en negrita, las diferencias entre la secuencia de ratón y la secuencia de línea germinal humana se muestran en texto subrayado en negrita, y los residuos de retromutación potenciales, en texto subrayado, sombreado. ACO-1 VH = SEQ ID NO: 1; VH1_46/JH4 de línea germinal humana = SEQ ID NO:2; hzACO-1 VH = SEQ ID NO: 3; ACO-1 VL = SEQ ID NO: 4; VKIII_L6/JK2 de línea germinal humana = SEQ ID NO: 5; hzACO-1 VL = SEQ ID NO: 6.

La Figura 2 muestra una alineación entre las secuencias ACO-1 y ACO-2 VH (A) y VL (B) , así cómo las correspondientes secuencias de línea germinal de ratón. ACO-2 VH = SEQ ID NO 7; J558.33/D_/JH3_1 de línea germinal de ratón = SEQ ID NO: 8; ACO-2 VL = SEQ ID NO: 9; ae4/ JK4_1 de línea germinal de ratón = SEQ ID NO: 10.

La Figura 3 muestra la ubicación de los residuos de ACO-2 seleccionados para la introducción en hzACO-1.

La Figura 4 muestra la inhibición de hzACO-1 del efecto protector de todos los subtipos de interferón probados excepto para IFN-αD y IFN-α1 en un ensayo de CPE.

La Figura 5 muestra la inhibición de hzACO-1 de 12 especies de IFN-α por un ensayo de gen reportero (RG) . Los valores para cada concentración de anticuerpo se normalizaron y se calculó el promedio de cuatro repeticiones. Los datos se muestran como el promedio +/-los errores estándar. Se calcularon las curvas de respuesta sigmoidal de mejor ajuste usando el software Prism. Los valores de R2 estuvieron para todos los conjuntos de datos por arriba de 0.98 (excepto para IFN-αD para el cual no se hizo ajuste de la curva) .

La Figura 6 muestra una comparación del ensayo de RG de hzACO-1 con variantes de hzACO-1 que tiene la única mutación A93V derivada de ACO-2, usando IFN-αA (A) o IFN-αF (B) . Los cálculos de los datos se hicieron como se describe en la Figura 5.

La Figura 7 muestra las temperaturas de transición para hzACO-1 y sus variantes a pH 3.5 (A) , 4.5 (B) , y 5.5 (C) , sin aditivos.

La Figura 8 muestra la estructura de las cadenas (H, L) del fragmento Fab hzACO-1, enlazadas a IFN-α8, determinada por cristalografía de rayos X.

La Figura 9 muestra los epítopos de enlace a IFN-α8 para IFNAR1 y IFNAR2 (Quadt-Akabayov S. R. y colaboradores, Protein Sci. 15, 2656-2668, 2006 y Roisman L.C y colaboradores, J. Mol. Biol. 353, 271-281, 2005) , como se indica por los cajones coloreados por abajo de la secuencia de IFN-α8. Los residuos indicados por los cajones coloreados de gris están conservados parcialmente entre todos los subtipos de IFN-α en tanto que los residuos indicados por cajones coloreados de negro están completamente conservados. El epítopo enlazado a hzACO-1, usando un corte a una distancia de 4 A Å, en IFN-α8 se indica por medio de u “*” arriba de la secuencia de aminoácidos de IFN-α8.

La Figura 10 muestran la comparación del mAb de ACO-1 de ratón con hzACO-1 así como dos variantes del mismo en el ensayo de RG. Una variante es un ACO-1 humanizado que alberga la CDRH2 completa (denominado CDRH2 hzACO-1-kabat) mientras que el hzACO-1-se construyó con una CDRH2 más corta como se describe en el ejemplo 2. Además, la figura muestra otro hzACO-1 mutado que ha sido optimizado para interacción con IFN-αs (hzACO-1 Y32E, T30R) a través de un diseño racional. Estas cuatro variantes recombinantes de mAb se compararon con respecto a la inhibición de cinco subtipos diferentes representativos de IFN-α, como se indica.

La Figura 11 muestra un estudio de estabilidad de proteína de hzACO-1 expresado con los isotipos humanos IgG1, IgG2 e IgG4. Se determinó la agregación por HPLC después de la incubación en regulador de histidina durante 5 semanas.

La Figura 12 muestra un ensayo de liberación de 51Cr que ilustra la carencia de ADCC por hzACO-1 IgG4, IFN-α y diferentes... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un anticuerpo humanizado anti-IFN-α, o un fragmento del mismo de enlazamiento al antígeno, que comprende las siguientes secuencias de CDR del VH:

(a) una secuencia de CDR H1 que consiste de la SEQ ID NO: 15;

(b) una secuencia de CDR H2 que consiste de la SEQ ID NO: 21; y

(c) una secuencia de CDR H3 que consiste de la SEQ ID NO: 17;

y comprende además las siguientes secuencias de CDR de VH:

(d) una secuencia de CDR L1 que consiste de la SEQ ID NO: 18;

(e) una secuencia de CDR L2 que consiste de la SEQ ID NO: 19; y

(f) una secuencia de CDR L3 que consiste de la SEQ ID NO: 20.

2. Un anticuerpo o anticuerpo o fragmento del mismo de enlazamiento al antígeno de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicho anticuerpo o fragmento del mismo de enlazamiento al antígeno compite con y/o se enlaza al mismo epítopo en un subtipo de IFN-α como el anticuerpo ACO-1.

3. Un anticuerpo o fragmento del mismo de enlazamiento a antígeno de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en donde el anticuerpo o fragmento del mismo de enlazamiento al antígeno es un subtipo IgG4.

4. El anticuerpo o fragmento del mismo de enlazamiento a antígeno de cualquiera de las reivindicaciones 1 -3, en donde el anticuerpo o fragmento del mismo de enlazamiento al antígeno comprende un dominio VH que comprende la SEQ ID NO: 3 y un dominio VL que comprende la SEQ ID NO: 6.

5. El anticuerpo o fragmento del mismo de enlazamiento a antígeno de cualquiera de las reivindicaciones 1 -3, en donde el anticuerpo o fragmento del mismo de enlazamiento al antígeno comprende un dominio VH que comprende una secuencia que contiene una mutación T30R de la SEQ ID NO: 3.

6. El anticuerpo o fragmento del mismo de enlazamiento a antígeno de cualquiera de las reivindicaciones 1 -5, en donde el anticuerpo o fragmento del mismo de enlazamiento al antígeno comprende las mutaciones A93V de la SEQ ID NO: 3.

7. Una composición terapéutica que comprende un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1

6.

8. Un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-6 para uso en la prevención, manejo, tratamiento o mejoría de una enfermedad o trastorno autoinmune o inflamatorio relacionado con IFN-alfa seleccionado del grupo que consiste de: SLE, artritis reumatoide, artritis crónica juvenil, osteoartritis, espondiloartropatías; escleroderma, dermatomiositis, polimiositis, síndrome de Sjogren, vasculitis, vasculitis sistémica, sarcoidosis, pancitopenia inmune, hemoglobinuria paroxística nocturna, púrpura trombocitopénica idiopática, trombocitopenia mediada en forma inmune, enfermedad de Grave, SIDA, tiroiditis de Hashimoto, tiroiditis linfocítica juvenil, tiroiditis atrófica, diabetes tipo I, glomerulonefritis, nefritis tubulointersticial, esclerosis múltiple, polineuropatía desmielinizante idiopática, síndrome de Guillain-Barre, polineuropatía desmielinizante inflamatoria crónica, hepatitis A, hepatitis B, hepatitis C, hepatitis D, hepatitis E, hepatitis activa crónica autoinmune, cirrosis biliar primaria, hepatitis granulomatosa, colangitis esclerosante, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, enfermedad celíaca, enteropatía sensible al gluten, enfermedad de Whipple, enfermedad bullosa de la piel, eritema multiforme, dermatitis de contacto, psoriasis, asma, rinitis alérgica, dermatitis atópica, hipersensibilidad a los alimentos, urticaria, neumonía eosinofílica, fibrosis pulmonar idiopática, neumonitis por hipersensibilidad, rechazo de injerto, y enfermedad de injerto contra huésped.

9. Uso de un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-6 en la preparación de un medicamento para la prevención, manejo, tratamiento o mejoría de una enfermedad o trastorno autoinmune o inflamatorio relacionado con IFN-alfa seleccionado del grupo que consiste de: SLE, artritis reumatoide, artritis crónica juvenil, osteoartritis, espondiloartropatías, escleroderma, dermatomiositis, polimiositis, síndrome de Sjogren, vasculitis, vasculitis sistémica, sarcoidosis, pancitopenia inmune, SIDA, hemoglobinuria paroxística nocturna, púrpura trombocitopénica idiopática, trombocitopenia mediada en forma inmune, enfermedad de Grave, tiroiditis de Hashimoto, tiroiditis linfocítica juvenil, tiroiditis atrófica, diabetes tipo I, glomerulonefritis, nefritis tubulointersticial, esclerosis múltiple, polineuropatía desmielinizante idiopática, síndrome de Guillain-Barre, polineuropatía desmielinizante inflamatoria

crónica, hepatitis A, hepatitis B, hepatitis C, hepatitis D, hepatitis E, hepatitis activa crónica autoinmune, cirrosis biliar primaria, hepatitis granulomatosa, colangitis esclerosante, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, enfermedad celíaca, enteropatía sensible al gluten, enfermedad de Whipple, enfermedad bullosa de la piel, eritema multiforme, dermatitis de contacto, psoriasis, asma, rinitis alérgica, dermatitis atópica, hipersensibilidad a los alimentos, urticaria, neumonía eosinofílica, fibrosis pulmonar idiopática, neumonitis por hipersensibilidad, rechazo de injerto, y enfermedad de injerto contra huésped.

10. Un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-6 para uso en el tratamiento de una enfermedad o trastorno autoinmune o inflamatorio asociado con la expresión anormal de al menos un subtipo de IFNalfa seleccionado del grupo que consiste en de los subtipos A, 2, B2, C, F, G, H2, I, J1, K, 4a, 4b y WA, en donde dicha enfermedad o trastorno se selecciona entre el grupo que consiste de: SLE, artritis reumatoide, artritis crónica juvenil, osteoartritis, espondiloartropatías; escleroderma, dermatomiositis, polimiositis, síndrome de Sjogren, vasculitis, vasculitis sistémica, sarcoidosis, pancitopenia inmune, hemoglobinuria paroxística nocturna, púrpura trombocitopénica idiopática, trombocitopenia mediada en forma inmune, enfermedad de Grave, SIDA, tiroiditis de Hashimoto, tiroiditis linfocítica juvenil, tiroiditis atrófica, diabetes tipo I, glomerulonefritis, nefritis tubulointersticial, esclerosis múltiple, polineuropatía desmielinizante idiopática, síndrome de Guillain-Barre, polineuropatía desmielinizante inflamatoria crónica, hepatitis A, hepatitis B, hepatitis C, hepatitis D, hepatitis E, hepatitis activa crónica autoinmune, cirrosis biliar primaria, hepatitis granulomatosa, colangitis esclerosante, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, enfermedad celíaca, enteropatía sensible al gluten, enfermedad de Whipple, enfermedad bullosa de la piel, eritema multiforme, dermatitis de contacto, psoriasis, asma, rinitis alérgica, dermatitis atópica, hipersensibilidad a los alimentos, urticaria, neumonía eosinofílica, fibrosis pulmonar idiopática, neumonitis por hipersensibilidad, rechazo de injerto, y enfermedad de injerto contra huésped.

11. Uso de un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-6 para la preparación de un medicamento adecuado para el tratamiento de una enfermedad o trastorno autoinmune o inflamatorio asociado con la expresión anormal de al menos un subtipo de IFN-alfa seleccionado del grupo que consiste en de los subtipos A, 2, B2, C, F, G, H2, I, J1, K, 4a, 4b y WA, en donde dicha enfermedad o trastorno se selecciona entre el grupo que consiste de: SLE, artritis reumatoide, artritis crónica juvenil, osteoartritis, espondiloartropatías, escleroderma, dermatomiositis, polimiositis, síndrome de Sjogren, vasculitis, vasculitis sistémica, sarcoidosis, pancitopenia inmune, SIDA, hemoglobinuria paroxística nocturna, púrpura trombocitopénica idiopática, trombocitopenia mediada en forma inmune, enfermedad de Grave, tiroiditis de Hashimoto, tiroiditis linfocítica juvenil, tiroiditis atrófica, diabetes tipo I, glomerulonefritis, nefritis tubulointersticial, esclerosis múltiple, polineuropatía desmielinizante idiopática, síndrome de Guillain-Barre, polineuropatía desmielinizante inflamatoria crónica, hepatitis A, hepatitis B, hepatitis C, hepatitis D, hepatitis E, hepatitis activa crónica autoinmune, cirrosis biliar primaria, hepatitis granulomatosa, colangitis esclerosante, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, enfermedad celíaca, enteropatía sensible al gluten, enfermedad de Whipple, enfermedad bullosa de la piel, eritema multiforme, dermatitis de contacto, psoriasis, asma, rinitis alérgica, dermatitis atópica, hipersensibilidad a los alimentos, urticaria, neumonía eosinofílica, fibrosis pulmonar idiopática, neumonitis por hipersensibilidad, rechazo de injerto, y enfermedad de injerto contra huésped.

12. Un anticuerpo para el uso de acuerdo con la reivindicación 8 o 10 o el uso de acuerdo con la reivindicación 9 o 11, en donde la enfermedad o el trastorno se selecciona entre el grupo que consiste en SLE, artritis reumatoide, SIDA, diabetes tipo I, y psoriasis.


 

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