Anticuerpo monoclonal anti-virus de la hepatitis C como un medicamento para el tratamiento terapéutico y prevención de infecciones por el virus de la hepatitis C.

Un anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo capaz de enlazar la glicoproteína E2 VHC de los genotipos 1a,

1b, 2a, 2b, 3, 4, 5 y 6 de VHC, en donde el anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo comprende por lo menos una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:1 o una secuencia por lo menos 95% idéntica a SEQ ID NO:1 y por lo menos una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:2 o una secuencia por lo menos 95% idéntica a SEQ ID NO:2, para usar en el tratamiento terapéutico o prevención de infecciones por VHC.

Anticuerpo monoclonal anti-virus de la hepatitis C como un medicamento para el tratamiento terapéutico y prevención de infecciones por el virus de la hepatitis C

La presente invención se refiere a un anticuerpo monoclonal contra la glicoproteína E2 del virus de la hepatitis C (VHC) como un medicamento para el tratamiento terapéutico y la prevención de las infecciones por VHC.

El VHC es un virus que tiene una envoltura vírica y un ARN de una sola cadena, que pertenece a la familia Flavivirus. Con base en las diferencias genéticas observadas entre los diferentes aislados de VHC, estas especies de virus se clasifican en 6 diferentes genotipos, cada uno de las cuales está marcado con un número. Cada genotipo, a su vez, comprende un número de subtipos, cada uno de ellos está marcado con una letra. La prevalencia y distribución de los diferentes genotipos de VHC es variable en todo el mundo. En Europa, el genotipo predominante es 1b, mientras que en Norteamérica, el genotipo 1a prevalece. Determinar las variedades de genotipo es importante a partir de un punto de vista clínico, en tal, una característica contribuye al determinar de la respuesta potencial a la terapia basada en la combinación del interferón alfa con ribavirina, que es actualmente el tratamiento más utilizado. De hecho, los genotipos 1 y 4 responden menos que los genotipos 2, 3, 5 y 6 a la terapia de interferón.

A la fecha, no están disponibles vacunas ni inmunoterapias que prueben ser realmente efectivas contra el virus de la hepatitis C. La alta variabilidad de la estructura antigénica del VHC hasta ha dificultado el desarrollo de los anticuerpos capaces de neutralizar el virus, mientras que están dotados con la reactividad cruzada hacia los diferentes genotipos de virus. De este modo, existe la necesidad de anticuerpos anti-VHC que estén provistos contra las características y por consiguientes son realmente efectivos en la terapia y prevención de las infecciones por VHC.

Los anticuerpos dirigidos contra el VHC se describen en la técnica antecedente. Por ejemplo, Burioni et al., Hepatology Vol. 28, n. 3, 1998, describe la clonación y la caracterización de secuencias que codifican cinco fragmentos de anticuerpo humano recombinante (Fab) específicos para la glicoproteína E2 de VHC (E2 VHC), capaz de enlazar las glicoproteínas de diferentes genotipos de virus (reactividad cruzada). Entre los Fab descritos en este artículo está el fragmento de anticuerpo designado como e2. Burioni et al., 1998, cit. describe que e2 tiene una actividad alta mínima al neutralizar el enlace de E2 VHC (actividad NOB). Sin embargo, en vista de la alta actividad de NOB, en la solicitud de patente internacional WO 3/64473, el fragmento de anticuerpo e2 se describe como incapaz de neutralizar la infección viral incluso en concentraciones altas (8 pg/ml) (ver, en particular, página 16 líneas 8 a 1 en WO 3/64473).

Johansson D et al, Proceedings of the National Academy of Sciences of USA, National Academy of Sciences, Washington D.C., USA, vol. 14, No. 41,9,27, páginas 16269-16274, describe la producción de Fab anti-VHC, de los que dos de ellos muestran un genotipo cruzado de unión y neutralización de la infección.

WO 2/5556 describe el Fab anti-VHC identificado como VHC#4 que desarrolla una reacción cruzada con todos los genotipos.

Los presentes inventores han encontrado ahora sorprendentemente que, contrario a lo que se mencionó en la técnica antecedente y en particular en WO 3/64473, el fragmento e2 es capaz de neutralizar efectivamente la infección mediante genotipos diferentes de VHC in vitro. Esto hace a e2 particularmente adecuado para la neutralización de VHC y eliminación de las células infectadas por VHC y para el uso como un medicamento para la inmunoterapia y la inmunoprevención de infecciones por VHC.

El logro de tal un resultado requirió un trabajo experimental largo y complejo, el cual se ilustra detalladamente en la siguiente sección experimental.

En síntesis extrema, el trabajo experimental llevado a cabo por los presentes inventores permitió demostrar que el fragmento de anticuerpo e2 muestra las siguientes características no esperadas:

- se genera en el curso de una infección natural debido a una cepa de VHC que pertenece al genotipo 1b, pero es capaz de enlazar a las glicoproteínas de todos los genotipos de VHC conocidos (genotipos particularmente 1a,1b, 2a, 2b, 3, 4, 5 y 6) y como tal es reactivo cruzado en gran medida;

- posee una capacidad de neutralización particularmente alta hacia los genotipos de VHC 1a, 1b, 2a y 4, como se mide mediante una neutralización con base en las pseudopartículas de VHC (VHCpp);

- ciertos residuos de aminoácidos esenciales para el enlace de e2 a la glicoproteína E2 VHC también son esenciales en la infección por VHC, lo cual sugiere que los mutantes capaces de escapar del enlace e2 están al mismo tiempo provistos con una capacidad de duplicación disminuida.

Las características antes mencionadas aparentemente son ventajosas para la finalidad de uso del fragmento de anticuerpo e2 como un medicamento para inmunoterapia e inmunoprevención de las infecciones por VHC.

Un primer objetivo de la presente invención es así un anticuerpo monoclonal o un fragmento del mismo, capaz de enlazar la glicoproteína E2 VHC de los genotipos 1a, 1b, 2a, 2b, 3, 4, 5 y 6 de VHC como un medicamento para tratamiento terapéutico o prevención de las infecciones por VHC, caracterizado porque el anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo comprende por lo menos una región variada de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 1 o una secuencia por lo menos 95% idéntica a SEQ ID NO: 1 y por lo menos una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 2 o una secuencia por lo menos 95% idéntica a SEQ ID NO: 2.

Otros porcentajes de identidad de secuencia preferidos son por lo menos 95%, 96%, 97%, 98% ó 99%, en donde la expresión "por lo menos" se refiere a cada uno de los porcentajes mencionados.

En una modalidad de la invención, la región variable de cadena pesada está codificada mediante la secuencia de nucleótidos SEQ ID NO: 3 y la región variable de cadena ligera está codificada por SEQ ID NO: 4.

El término "anticuerpo" está previsto para referirse a una clase de inmunoglobulina de longitud completa y cualquier fragmento del mismo que comprende una región variable de cadena ligera y una región variable de cadena pesada tal como por ejemplo un Fab, un F(ab)2 o un anticuerpo de una sola cadena que comprende las regiones variables de cadena pesada y ligera o CDR, o soportes que comprenden una o más copias de fragmentos CDR de regiones variables de cadena pesada y ligera de inmunoglobulina. Esto incluye los fragmentos de anticuerpo funcionales designados como ScFvs, diacuerpos, VHHs o cadenas ligeras o pesadas aisladas. La expresión "anticuerpo" además abarca los anticuerpos que pueden generarse al utilizar las secuencias de la región variable de fragmento de anticuerpo e2 en un procedimiento de transportaciones para la región variable de cadena ligera para establecer las combinaciones VH/VL con las propiedades de afinidad, estabilidad y/o producción recombinante mejoradas. La expresión "anticuerpo" también incluye un tipo de inmunoglobulina de longitud completa o un fragmento de inmunoglobulina fusionado con las inmunoglobulinas de longitud completa específicas o fragmentos de inmunoglobulina que pueden dirigirse a fragmentos de anticuerpo e2 o a la inmunoglobulina a los tejidos, células o estructuras de proteína solubles específicos. El anticuerpo monoclonal de la invención es preferiblemente humano.

El anticuerpo utilizado en la invención puede estar en la forma libre o en una forma conjugada. Una forma conjugada es un anticuerpo, como se define anteriormente, conjugado con una molécula capaz de modular la persistencia in vitro, promover o limitar la distribución de cuerpos, disminuir la sensibilidad a agentes proteolíticos, disminuir la antigenicidad, aumentar la habilidad citotóxica y/o facilitar la detección en fluidos y tejidos corporales. Los ejemplos no limitantes de moléculas adecuadas para la conjugación incluyen albúmina de suero humano, proteína de enlace de maltosa, glutatión-S-transferasa, proteínas p3 o p8 de revestimiento de fagos, péptidos, azúcares, PEG o moléculas similares a PEG, toxinas derivadas de animales, plantas o microbios, citocinas, enzimas, compuestos quimioluminiscentes, compuestos bioluminiscentes, átomos metálicos, radioisótopos, compuestos fluorescentes, grupos de etiquetado o sustratos para fosforilación, glicosilación, ubiquitinación, SUMOilación o escisión endoproteolítica. Para facilitar la conjugación, puede... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo capaz de enlazar la glicoproteína E2 VHC de los genotipos 1a, 1b, 2a, 2b, 3, 4, 5 y 6 de VHC, en donde el anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo comprende por lo menos una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:1 o una secuencia por lo menos 95% idéntica a SEQ ID NO:1 y por lo menos una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:2 o una secuencia por lo menos 95% idéntica a SEQ ID NO:2, para usar en el tratamiento terapéutico o prevención de infecciones por VHC.

2. El anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo para usar de conformidad con la reivindicación 1, que es una inmunoglobulina de tamaño completo o un fragmento de inmunoglobulina que comprende por lo menos una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera.

3. El anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo para usar de conformidad con la reivindicación 2, en donde el fragmento se selecciona de un Fab, un F(ab)2, o un anticuerpo de cadena simple que comprende regiones variables de cadena pesada y de cadena ligera.

4. El anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo para usar de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2 que se conjuga con una molécula capaz de modular la persistencia in vivo, promover o limitar la distribución del cuerpo, disminuir la sensibilidad a los agentes proteolíticos, disminuir la antigenicidad, aumentar la habilidad citotóxica y/o facilitar la detección en los fluidos y tejidos corporales.

5. El anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo para usar de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 que se fusiona con una inmunoglobulina de longitud completa específica o un fragmento de inmunoglobulina capaz de dirigir el anticuerpo a tejidos, células o estructuras de proteínas solubles específicas.

6. Una composición farmacéutica para uso en el tratamiento terapéutico o prevención de infecciones por VHC que comprende una cantidad farmacéuticamente efectiva de un anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo según se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.

7. La composición farmacéutica para usar de conformidad con la reivindicación 6 en una forma de dosis farmacéutica adaptada para ser administrable por vía parenteral, oral, ocular, tópica, locorregional, como un enema o aerosol.

8. La composición farmacéutica para usar de conformidad con la reivindicación 6 ó 7 en forma de una solución inyectable o suspensión, una infusión, un comprimido, una cápsula, una crema, un ungüento, una loción o un supositorio.

9. El uso de un anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo según se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 para preparar un medicamento para tratar o prevenir infecciones por VHC.