Agente inductor de inmunidad.

Un agente para su uso como agente inductor de inmunidad en un método de tratamiento médico o veterinario,

comprendiendo el agente, como principio activo, al menos un polipéptido que tiene actividad inductora de inmunidad y seleccionado de los siguientes polipéptidos (a), (b) y (c), o un vector recombinante que comprende un polinucleótido que codifica dicho polipéptido y capaz de expresar dicho polipéptido in vivo:

(a) un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada por cualquiera de las SEC ID Nº: 43 a 76 en el listado de secuencias;

(b) un polipéptido que tiene el 85 % o más de identidad de secuencia con el polipéptido (a); y

(c) un polipéptido de hasta 12 aminoácidos que comprende el polipéptido (a) como secuencia parcial del mismo.

Agente inductor de inmunidad Campo de la técnica

La presente invención se refiere a un nuevo agente inductor de la inmunidad que es útil como agente terapéutico y / o preventivo para el cáncer o similar.

Técnica anterior

El cáncer es la principal causa global de muerte. En la actualidad, la principal forma de técnica de tratamiento del cáncer es el tratamiento quirúrgico, que se lleva a cabo en combinación con tratamiento de radiación y quimioterapia. A pesar del desarrollo de nuevas técnicas quirúrgicas y el descubrimiento de nuevos agentes anticancerosos de los últimos años, los resultados del tratamiento del cáncer siguen sin haber mejorado, excepto en los casos de algunos tipos de cáncer. En los últimos años, los antígenos del cáncer reconocidos por linfocitos T citotóxicos son reactivos para el cáncer y se han identificado genes que codifican antígenos del cáncer junto con el desarrollo de biología molecular e inmunología del cáncer y han aumentado las expectativas para la inmunoterapia específica del antígeno (Tsuyoshi Akiyoshi, Gan to Kagaku Ryouhou (Cáncer and Chemotherapy), 1997, vol. 24, pp. 551-519, Cáncer and Chemotherapy Publishers Inc., Japan).

La inmunoterapia requiere la presencia de células de cáncer específicas de un péptido, polipéptido o proteína que es reconocida como un antígeno diana, así como la ausencia sustancial del mismo en las células normales desde la perspectiva del alivio de los efectos secundarios. En 1991, Boon et al. (the Ludwig Institute for Cáncer Research, Belgium) aisló el antígeno de melanoma MAGE1 humano reconocido por los linfocitos T CD8 + a través de la clonación de la expresión de ADNc usando una línea celular de cáncer autóloga y linfocitos T reactivos al cáncer (Bruggen P. et al., Science, 254: 1643-1647, 1991). Después, se informó sobre el método SEREX (identificaciones serológicas de antígenos por clonación de expresión recombinante), que identifica el antígeno tumoral reconocido por el anticuerpo producido en respuesta al cáncer autólogo en el cuerpo de un paciente de cáncer a través de la clonación de la expresión génica (Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A., 92: 1181-11813, 1995; y la patente de EE.UU. N2 5.698.396). Algunos antígenos del cáncer se han aislado mediante dichas técnicas (Int. J. Cáncer, 72: 965-971, 1997; Cáncer Res., 58: 134-141, 1998; Int. J. Cáncer, 29: 652-658, 1998; Int. J. Oncol., 14: 73-78, 1999; Cáncer Res., 56: 4766-4772, 1996; y Hum. Mol. Genet. 6: 33-39, 1997). Además, la prueba clínica de la inmunoterapia del cáncer dirigida a algunos de estos antígenos se ha iniciado.

Como en el caso de los humanos, se sabe que perros y gatos sufren varios tumores, como el cáncer de la glándula mamaria, la leucemia y el linfoma, y los tumores están en los puestos más altos en las estadísticas de las enfermedades caninas o felinas. Sin embargo, no hay agentes terapéuticos, preventivos o de diagnóstico eficaces para el cáncer canino o felino en la actualidad. La mayoría de los dueños de perros o gatos no notarían tumores caninos o felinos hasta que los tumores han avanzado y se han agrandado. Incluso si los tumores se eliminan través de operación quirúrgica o se administran fármacos para uso humano (por ejemplo, los medicamentos contra el cáncer), los tumores a menudo están más allá de la cura, y los animales suelen morir poco después del tratamiento. En dichas circunstancias, si se dispone de agentes terapéuticos, preventivos y de diagnóstico para el cáncer que sean eficaces para perros o gatos, se puede esperar su aplicación para el cáncer canino o felino cáncer.

La proteína 1 citoplasmática asociada con la proliferación 1 (CAPRIN-1) se expresa cuando las células normales latentes se activan o sufren división celular. La CAPRIN-1 es una proteína intracelular que se sabe que forma gránulos intracelulares de estrés con ARN en la célula y que está asociada con la regulación del transporte y la traducción del ARNm. La CAPRIN-1 también se conoce con otros nombres, y ejemplos de los mismos incluyen la proteína 1 de membrana anclada a GPI y la proteína 1 marcador de superficie del componente de la membrana 1 (M11S1). CAPRIN-1 tiene nombres que transmiten la impresión de que se ha conocido como una proteína de membrana de la célula. Tales otros nombres se derivan de un informe sobre el efecto que la secuencia del gen de CAPRIN-1 tiene una región de unión a GPI y es una proteína de membrana expresada en una línea celular derivada del intestino grueso (J. Biol Chem, 27: 2717-2723, 1995). Más tarde, sin embargo, se supo que la secuencia del gen CAPRIN-1 en este informe era incorrecta, y en la secuencia del gen, la deleción de un solo nucleótido de la secuencia del gen CAPRIN-1 actualmente registrado en el GenBank o similar provoca un cambio de marco, lo que conduce a la deleción de 8 aminoácidos del terminal C, y por lo tanto, el artefacto resultante (74 aminoácidos) era la región de unión a GPI mencionada en el informe anterior. Además, también se supo que la secuencia del gen CAPRIN-1 mostrada en el informe también tenía un error en el lado 5 ' y 53 residuos de aminoácidos se habían delecionado del extremo N (J. Immunol., 172: 2389-24, 24). También se ha informado de que la proteína codificada por la secuencia del gen CAPRIN-1 actualmente registrada en GenBank o similar no es una proteína de membrana celular(J. Immunol., 172: 2389-24, 24).

Basándose en el informe de J. Biol. Chem., 27: 2717-2723, 1995, que CAPRIN-1 es una proteína de membrana celular, los documentos US 28/75722 y WO 25/1998 describen que CAPRIN-1 puede ser una diana de la terapia del cáncer como una proteína de membrana celular con el nombre de M11S1. Sin embargo, no incluyen

ninguna descripción específica en los ejemplos. Como se informó en J. Immunol, 172.: 2389-24, 24, sin embargo, hasta ahora se ha aceptado ya que se presentó el documento US 28/75722 en el que la CAPRIN-1 no se expresa en una superficie celular. Es evidente que las divulgaciones de los documentos US 28/75722 y WO 25/1998 basados únicamente en la información incorrecta de que CAPRIN-1 es una proteína de la membrana celular no deben entenderse como conocimiento técnico general en la técnica. Además, no hay ningún informe de que el nivel de expresión de CAPRIN-1 es mayor en las células cancerosas tales como las células de cáncer de mama que en las células normales.

Los documentos W2888583, W2511651 y W2837 describen péptidos para usar en el tratamiento del cáncer, incluyendo péptidos que tienen alguna homología con la CAPRIN-1.

Sumario de la invención

Problema que se ha de resolver mediante la invención

Es un objetivo de la presente invención descubrir un nuevo polipéptido útil para un agente terapéutico y / o preventivo para el cáncer y proporcionar el uso de dicho polipéptido como un agente inductor de inmunidad.

Medios para resolver el problema

Los presentes inventores han realizado estudios concentrados, y después obtuvieron ADNc que codifican proteínas que se unen a los anticuerpos en el suero obtenido a partir de un cuerpo vivo portador de cáncer mediante el método SEREX usando una biblioteca de ADNc derivado de tejido testicular canino y el suero de un perro afectados con cáncer de mama, y prepararon un polipéptido de CAPRIN-1 canino que tiene las secuencias de aminoácidos mostradas por las SEC ID N2 6, 8, 1, 12 y 14 usando dichos ADNc. Utilizando el gen homólogo humano del gen obtenido, también, prepararon un polipéptido CAPRIN-1 humano que tiene las secuencias de aminoácidos como se muestra por las SEC ID N2 2 y 4. Además, encontraron que tales polipéptidos CAPRIN-1 se expresaban específicamente en un cáncer de mama, tumor cerebral, leucemia, linfoma, cáncer de pulmón, cáncer de esófago, y cáncer colorrectal. Además, encontraron que la administración de tales polipéptidos CAPRIN-1 a los cuerpos vivos daría lugar a la inducción de inmunocitos contra polipéptidos CAPRIN-1 en los cuerpos vivos y regresión de los tumores en los cuerpos vivos que expresan los genes de CAPRIN-1. Además, encontraron que los anticuerpos contra tales polipéptidos CAPRIN-1 romperían las células cancerosas que expresan los genes de CAPRIN-1 e inducen efectos antitumorales in vivo. Esto ha llevado a la realización de la presente invención.

De acuerdo con esto, la presente invención tiene las características siguientes.

(1) Un agente para su uso como agente inductor de inmunidad en un método de tratamiento médico o veterinario, el agente que comprende, como principio activo, al menos un polipéptido que tiene actividad inductora de inmunidad y seleccionado de los siguientes polipéptidos (a), (b), y (c), o un vector recombinante que... [Seguir leyendo]

1. Un agente para su uso como agente inductor de inmunidad en un método de tratamiento médico o veterinario, comprendiendo el agente, como principio activo, al menos un polipéptido que tiene actividad inductora de inmunidad y seleccionado de los siguientes polipéptidos (a), (b) y (c), o un vector recombinante que comprende un polinucleótido que codifica dicho polipéptido y capaz de expresar dicho polipéptido in vivo:

(a) un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada por cualquiera de las SEC ID N2: 43 a 76 en el listado de secuencias;

(b) un polipéptido que tiene el 85 % o más de identidad de secuencia con el polipéptido (a); y

(c) un polipéptido de hasta 12 aminoácidos que comprende el polipéptido (a) como secuencia parcial del mismo.

2. El agente para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende, como principio activo, uno o una pluralidad de dichos polipéptidos.

3. El agente para su uso de acuerdo con la reivindicación 2, que es:

para su uso tratando una célula presentadora de antígeno con el agente in vitro y administrando a un paciente la célula presentadora de antígeno; o

para su uso tratando una célula presentadora de antígeno con el agente in vitro, poniendo en contacto la célula presentadora de antígeno con células T in vitro, y administrando a un paciente las células T aisladas que se unen selectivamente a la célula presentadora de antígeno; o para su uso administrando el agente al paciente.

4. El agente para su uso de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, que es para su uso en el tratamiento o la prevención del cáncer de animales.

5. El agente para su uso de acuerdo con la reivindicación 4, en el que el cáncer es cáncer de mama, tumor cerebral, leucemia, linfoma, cáncer de pulmón, cáncer de esófago o cáncer colorrectal.

6. El agente para su uso de acuerdo con la reivindicación 4 o la reivindicación 5, en el que el animal es un ser humano, un perro o un gato.

7. El agente para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, que comprende además un agente inmunopotenciador.

8. El agente para su uso de acuerdo con la reivindicación 7, en el que el agente inmunopotenciador es al menos un adyuvante o una citoquina seleccionados del grupo que consiste en adyuvante incompleto de Freund, Montanide, poli IC y un derivado del mismo, oligonucleótido CpG, interleucina 12, interleucina 18, interferón a, interferón p, interferón to, interferón y y ligando de Flt3.

9. Uso de al menos un polipéptido que tiene actividad inductora de inmunidad o vector recombinante como se define en la reivindicación 1 o la reivindicación 2 en la fabricación de un medicamento para inducir inmunidad.

1. Uso de acuerdo con la reivindicación 9, en el que el medicamento es para su uso como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 6.

11. Uso de acuerdo con la reivindicación 9 o la reivindicación 1, en el que el medicamento comprende además un agente inmunopotenciador.

12. Uso de acuerdo con la reivindicación 11, en el que el agente inmunopotenciador es al menos un adyuvante o una citoquina seleccionados del grupo que consiste en adyuvante incompleto de Freund, Montanide, poli IC y un derivado del mismo, oligonucleótido CpG, interleucina 12, interleucina 18, interferón a, interferón p, interferón co, interferón y y ligando de Flt3.

13. Una célula presentadora de antígeno aislada que comprende un complejo del polipéptido que tiene la actividad inductora de inmunidad indicada en la reivindicación 1 y una molécula de HLA.

14. Una célula T aislada que se une de forma selectiva a un complejo del polipéptido que tiene la actividad inductora de inmunidad indicada en la reivindicación 1 y una molécula de HLA.

15. La célula presentadora de antígeno de la reivindicación 13 o la célula T aislada de la reivindicación 14, para su uso en la inducción de inmunidad en un método de tratamiento médico o veterinario.

16. La célula presentadora de antígeno o la célula T aislada para su uso de acuerdo con la reivindicación 15, que es para su uso como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6.

17. Uso de la célula presentadora de antígeno de la reivindicación 13 o la célula T aislada de la reivindicación 14, en la fabricación de un medicamento para inducir inmunidad.

18. Uso de acuerdo con la reivindicación 17, en el que el medicamento es para su uso como se define en una 5 cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6.