Una forma de PRELP de 38 KDA como nuevo diagnóstico y objetivo terapéutico.

Un método in vitro para evaluar el riesgo de que un sujeto padezca cánceres de tejidos u órganos derivados de las tres capas embrionarias de ectodermo,

mesodermo y endodermo, que comprende medir el nivel de expresión de una forma de 38 kDa de la proteína rica en prolina/arginina con repeticiones de leucina terminales (PRELP) en células de dicho sujeto, en el que un nivel de expresión incrementado de PRELP, comparado con donantes sanos, indica una probabilidad incrementada de que dicho sujeto padezca dicho cáncer

Una forma de PRELP de 38 KDA como nuevo diagnóstico y objetivo terapéutico Campo de la invención La presente invención se refiere al campo de la terapia y diagnóstico del cáncer. Más específicamente, se refiere a la terapia y diagnóstico de cánceres de tejidos y órganos que se originan de ectodermo, mesodermo y endodermo, y a productos útiles en dichas terapias y diagnóstico.

Antecedentes de la invención El microentorno es importante para la proliferación y supervivencia de células de leucemia linfocítica crónica (CLL) 1, 2 . Varios tipos de células pueden contribuir para proporcionar señales y factores de liberación que previenen la apoptosis de las células CLL 3, 4. Las moléculas que facilitan la interacción entre las células leucémicas y el microentorno pueden ser críticas en la patofisiología de CLL y sirven potencialmente como estructuras para terapias dirigidas.

En 2001, el perfil de expresión génica en CLL mostró una expresión incrementada de la proteína de la matriz extracelular (ECM) fibromodulina (FMOD) 5. FMOD es un miembro de la familia de los proteoglicanos pequeños ricos en leucina (SLRP) y se expresa normalmente en tejidos ricos en colágeno. Nosotros demostramos que FMOD se expresaba a nivel génico y de proteína en CLL y linfoma de células del manto (MCL) 6. La regulación de agrupamientos de genes se ha indicado en enfermedades malignas 7. La proteína rica en prolina/arginina con repeticiones de leucina terminales (PRELP) tiene una estructura relacionada de cerca con FMOD y está localizada aproximadamente 80 kb 3' cerca de FMOD en el cromosoma 1q32.18. PRELP tiene un peso molecular (MW) de 55 kDa y se expresa normalmente en la matriz extracelular de tejidos conectivos, principalmente en el cartílago, pulmón, riñón, piel y tendón 9, 10. La función de PRELP no está clara, pero las interacciones entre PRELP y el colágeno de tipo I y II así como heparina y heparán sulfato11, 12 sugieren que PRELP puede ser una molécula que ancla las membranas basales con el tejido conectivo12 .

US2003/0219767 describe PRELP (número de registro Genbank NM_002725) como un marcador potencial para cáncer de mama, pero no identifica la forma de 38 kDa de PRELP como un biomarcador.

WO2007/082352 describe PRELP como un biomarcador ejemplar para cáncer de hueso, pero asimismo no identifica la forma de 38 kDa de PRELP como un biomarcador.

Resumen de la invención La sobreexpresión de genes en células tumorales podría deberse a regulaciones epigenéticas que pueden abarcar un agrupamiento de genes localizados muy cerca. Después de nuestros estudios previos sobre FMOD6 y ROR-I13 en CLL, ambos localizados en el cromosoma 1, el presente estudio se comenzó inicialmente para explorar la expresión génica y de proteína de PRELP en CLL y otras malignidades hematológicas, en nuestro esfuerzo para explorar moléculas expresadas únicamente en CLL que podrían jugar un papel en la patología de la enfermedad.

De forma natural, PRELP es una proteína secretada. El presente inventor ha mostrado que en las células cancerosas no sólo no se secreta sino que es secuestrada en el interior de las células cancerosas. También, una fracción de esta proteína no procesada se expresa en la superficie celular, véase la Fig. 14. Esto se ha encontrado para células leucémicas y también para células cancerosas que se originan de las capas germinales embrionarias de ectodermo, mesodermo y endodermo. También se ha encontrado que los anticuerpos generados frente a PRELP inducen apoptosis en las células cancerosas que expresan PRELP en la superficie celular.

El presente inventor ha encontrado que PRELP se expresa en CLL y una línea celular de linfoma de Burkitt humano (Raji) . El linfoma de Burkitt es un cáncer del sistema linfático en particular linfocitos B. La leucemia linfocítica crónica también es un cáncer de linfocitos B. La expresión de PRELP tanto en linfoma como leucemia con origen en linfocitos B formula PRELP como una diana terapéutica en las malignidades de las células B sin expresión de PRELP en las células B normales. Aparte de las malignidades de las células B, PRELP también se expresa en los tumores sólidos listados en la Tabla 1. Según estos datos, PRELP se expresa en cáncer de mama, cáncer de ovario y cáncer de próstata así como en tumores de neuroblastoma, glioblastoma y meduloblastoma.

Los tejidos y órganos siguientes derivan de tres capas germinales embrionarias de ectodermo, mesodermo y endodermo: el tejido de mama deriva de ectodermo y mesodermo. El sistema nervioso central deriva de ectodermo. El ovario, sistemas linfáticos y tejidos óseos incluyendo células sanguíneas derivan de mesodermo y finalmente la próstata deriva de endodermo.

Aunque la expresión de PRELP no se ha mostrado en todos los cánceres, el origen de tejidos y órganos más la expresión de PRELP en los cánceres mencionados anteriormente (como representativos para cada capa embrionaria)

ratificarían PRELP como un marcador tumoral universal, especialmente en el formato de la preproproteína inmadura (precursor) . Incluso si PRELP se expresa en los tejidos normales correspondientes, la expresión en la superficie celular de PRELP en el formato precursor sería una ventaja para tomar a las células cancerosas como diana sin dañar a las células normales. En conclusión, dos propiedades distintas de precursor y expresión en la superficie celular de PRELP en las células cancerosas la hacen una diana ideal (Fig. 14) para la detección de dichas células cancerosas así como para la terapia y diagnóstico de dichos cánceres como se discute en la presente memoria.

En un primer aspecto, la invención se refiere a un método in vitro para evaluar el riesgo de que un sujeto padezca cánceres de tejidos u órganos derivados de las tres capas embrionarias de ectodermo, mesodermo y endodermo, que comprende medir el nivel de expresión de una forma de 38 kDa de la proteína rica en prolina/arginina con repeticiones de leucina terminales (PRELP) en las células de dicho sujeto, en el que un nivel de expresión incrementado de PRELP, comparado con donantes sanos, indica una probabilidad incrementada de que dicho sujeto padezca dicho cáncer.

En un aspecto adicional, la invención se refiere a un ligante de afinidad, siendo un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de éste, específico para la forma de 38 kDa de PRELP.

En un aspecto adicional, la invención se refiere a un ligante de afinidad, siendo un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de éste, según el aspecto anterior, para uso en terapia, particularmente en terapia de cáncer y especialmente en terapia de cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de próstata, glioblastoma, linfoma de Burkitt, neuroblastoma, meduloblastoma, leucemia linfocítica crónica (CLL) o linfoma de células del manto (MCL) . Dichos ligantes de afinidad, siendo un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de éste, pueden estar "armados", es decir, unidos a un resto que tiene un efecto tóxico en las células, particularmente células cancerosas. Dichos restos son conocidos para el experto en la técnica, véase Polakis P. Arming antibodies for cancer therapy. Curr Opin Pharmacol 2005; 5: 382-7.

En un aspecto adicional, la invención se refiere a un método para el tratamiento de un cáncer, que comprende administrar un ligante de afinidad, siendo un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de éste, específico para la forma de 38 kDa de PRELP a un sujeto que padece un cáncer.

En un aspecto adicional, la invención se refiere a un método para indicar una célula como una célula cancerosa, que comprende detectar una presencia o no presencia de la forma de 38 kDa de PRELP en la superficie de dicha célula, en el que la presencia de la forma de 38 kDa de PRELP en dicha superficie de dicha célula indica que dicha célula es una célula cancerosa. Dicha detección puede hacerse usando un ligante de afinidad, siendo un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de éste, específico para la forma de 38 kDa de PRELP, conjugado opcionalmente con un resto detectable tal como un resto fluorescente, en métodos de detección rutinarios conocidos para el experto en la técnica.

Las realizaciones preferidas se muestran en las reivindicaciones dependientes.

Descripción breve de los dibujos Figura 1. Análisis de transferencia Western para validar la especificidad de los anticuerpos anti-PRELP. El gen PRELP precursor se clonó en el vector pCMV6-Neo y se transfectó en la línea celular de ratón SP2/0. Carril 1: Lisado celular de células SP2/0 transfectadas con el vector solo (control negativo) . Carril 2: Lisado celular de células SP2/0 transfectadas con la construcción PRELP. El PRELP... [Seguir leyendo]

1. Un método in vitro para evaluar el riesgo de que un sujeto padezca cánceres de tejidos u órganos derivados de las tres capas embrionarias de ectodermo, mesodermo y endodermo, que comprende medir el nivel de expresión de una forma de 38 kDa de la proteína rica en prolina/arginina con repeticiones de leucina terminales (PRELP) en células de dicho sujeto, en el que un nivel de expresión incrementado de PRELP, comparado con donantes sanos, indica una probabilidad incrementada de que dicho sujeto padezca dicho cáncer.

2. Método según la reivindicación 1, en el que el cáncer es cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de próstata, glioblastoma, linfoma de Burkitt, neuroblastoma, meduloblastoma, leucemia linfocítica crónica (CLL) o linfoma de células del manto (MCL) , preferiblemente CLL.

3. Método según la reivindicación 1 ó 2, en el que el nivel de expresión de PRELP se mide en células de tejidos u órganos derivados de las tres capas embrionarias de ectodermo, mesodermo y endodermo, tales como tejido de mama, tejido de ovario, tejido de próstata, células neuronales y células sanguíneas, preferiblemente células mononucleares de sangre periférica.

4, Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que se mide el nivel de expresión de PRELP no glicosilada.

5. Un anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno de éste, específico para la forma de 38 kDa de PRELP.

6. Anticuerpo según la reivindicación 5, siendo un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de éste, que tiene la secuencia de VH SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 5 y/o la secuencia de VL SEQ ID NO: 2.

7. Un anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno de éste, según la reivindicación 5 que es específico para la parte N terminal de PRELP.

8. Anticuerpo según la reivindicación 5, o fragmento de unión a antígeno de éste, específico para un inmunógeno con la secuencia MRSPLCWLLPLLILASVAQG (SEQ ID NO: 7) .

9. Anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno de éste, según cualquiera de las reivindicaciones 5-8 que es un anticuerpo monoclonal.

10. Anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno de éste, según cualquiera de las reivindicaciones 5-9, unido a un resto que tiene actividad anti-cancerosa.

11. Anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno de éste, específico para una forma de 38 kDa de PRELP, para uso en terapia.

12. Anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno de éste, específico para una forma de 38 kDa de PRELP, para uso en un método para el tratamiento de cáncer.

13. Anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno de éste, específico para una forma de 38 kDa de PRELP para uso en un método para el tratamiento de cáncer, en el que las células de dicho cáncer expresan una forma de 38 kDa de PRELP en su superficie.

14. Anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno de éste, específico para una forma de 38 kDa de PRELP para uso en un método para el tratamiento de un cáncer, en el que el cáncer es cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de próstata, glioblastoma, linfoma de Burkitt, neuroblastoma, meduloblastoma, leucemia linfocítica crónica (CLL) o linfoma de células del manto (MCL) .

15. Anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno de éste, para uso según la reivindicación 11-14, que es un anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno de éste, según cualquiera de las reivindicaciones 6-10.

16. Un método para indicar una célula como una célula cancerosa, que comprende detectar una presencia o no presencia de una forma de 38 kDa de PRELP en la superficie de dicha célula, en el que la presencia de una forma de 38 kDa de PRELP en dicha superficie de dicha célula indica que dicha célula es una célula cancerosa.

17. Método según la reivindicación 16, en el que se mide el nivel de expresión de una forma de 38 kDa de PRELP en células derivadas de las tres capas embrionarias de ectodermo, mesodermo y endodermo, tales como tejido de mama, tejido de ovario, tejido de próstata, células neuronales o células sanguíneas de dicho sujeto.

18. Método según la reivindicación 17 ó 18, en el que el cáncer es cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de próstata, glioblastoma, linfoma de Burkitt, neuroblastoma, meduloblastoma, leucemia linfocítica crónica (CLL) o linfoma de células del manto (MCL) , preferiblemente CLL.

19. Método según cualquiera de las reivindicaciones 16-18, en el que se mide la presencia o no presencia de PRELP no glicosilada.