Proteína específica del timo.

Un polipéptido aislado que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 2 o de SEC ID Nº 4.

Proteína específica del timo Campo de la invención

La presente invención se refiere a una nueva proteína específica del timo.

Técnica anterior

Las siguientes publicaciones anteriores se consideran relevantes para ilustrar la técnica anterior de la presente invención

[1] Maurer, HR, Eckert, K, Stange, R: Einfluss der Therapie mit Thymoject auf die antitumorale Immunotoxizitát der Leukozyten von Mamma-Tumorpatientinnen. Pers. Mitt. (1999).

[2] Mustacchi, G, Pavés, L, Milani, S et al: High-dose folinic acid and fluouracil plus or minus thymostimulin for the treatment of metastatic colorectal cáncer: results of a randomised multicentered trial. Anticancer Res. (1994) 14: 617-619.

[3] Schulof, RS, Loyd, MJ, Cleary, PA, et al: A randomized trial to evalúate the immunorestorative properties of synthetic thymosin-alphal in patients with lung cáncer. J Biol Resp Modif (1985) 4:147-158.

[4] Azizi A, Brenner HJ, Shoham J: Postoperative adjuvante Behandlung von Patienten mit malignem Melanom durch den Thymusfaktor Thymostimulin. Arzneim-Forsch/Drg Res (1984) 34(ll): 143-146.

[5] Massimo F, Gobbi P, Moretti G, Avanzini P, Italian Lymphoma Study Group: Effects of Thymostimulin with combination Chemotherapy in patients with aggressive non-Hogkins lymphoma. Am J Clin Oncol (CCT) (1995) 18(1): 8-14.

[6] Peretti P, Tonelli F, Mazzei T, Ficari F, Italian study group on antimicrobal prophylaxis in abdominal surgery. J Chemotherapy (1993) 5(1): 37-42.

[7] Gonelli S, Petrioli R, Cepollaro C, Palmieri R, Aquino A, Gennari C: Thymostimulin in association with chemotherapy in breast cáncer patients with bone metastases. Clin Drug Invest (1995) 9(2): 79-87.

[8] laffaioli RV, Frasci G, Tortora G, Ciardiello F, Nuzzo F, Scala S, Pacelli R, Bianco AR: Effect of thymic extract Thymostimulin on the incidence of infections and myelotoxicity during adjuvant chemotherapy for breast cáncer. Thymus (1988) 12: 69-75. Kluwer Academic Publishers.

Se hará referencia a estas publicaciones de la lista anterior en el siguiente texto, indicando su número entre corchetes.

Antecedentes de la invención

En la actualidad se han identificado muchos modificadores de la respuesta biológica (MRB). Los ejemplos incluyen interleucinas y citocinas. El timo también desempeña un papel importante en la inmunomodulación general. Se podría decir que el timo es el cerebro del sistema inmunológico. Se considera que el timo tiene una función clave en el desarrollo y función del sistema inmunológico y los mecanismos de defensa biológica contra el cáncer y células infectadas de forma crónica.

El tejido del timo es responsable de la transformación seleccionada de células precursoras en diferentes linfocitos T: es decir, linfocitos T colaboradores (CD4+), que ayudan a la diferenciación de otros linfocitos; células asesinas (células NK); células citotóxicas y linfocitos T supresores (citotóxicos) (CD8+) (1-3). Una vez liberados en la circulación sanguínea y los tejidos intestinal y periféricos, los linfocitos se caracterizan por tener antígenos bien definidos o marcadores de activación en su superficie. Sus actividades son extratímicas.

Existe una delicada interacción entre el timo y la médula ósea activa. Existe una correlación directa y positiva entre la hipofunción del timo y la disminución de la producción de factores estimulantes de colonias (CSF). Por tanto, en los casos en los que existe una producción insuficiente de CSF, la aplicación terapéutica de péptidos del timo puede ser útil.

La hepatitis B crónica (HBC), el VIH, la hepatitis C crónica (HCC) y el paludismo son enfermedades crónicas que en la actualidad sufren decenas de millones de personas sin ninguna cura. La rama celular de la inmunidad es responsable de la vigilancia contra estas infecciones crónicas por virus, hongos, levaduras y parásitos, así como contra neoplasias y los síntomas del envejecimiento. Los extractos de timo se han usado clínicamente de varias formas en algunas de estas afecciones. Se han usado por vía oral y como inyectables, solos o en combinación con otras sustancias terapéuticas. Los extractos de timo se han usado para tratar alergias graves y crónicas que afectan a las vías respiratorias y a la piel, así como en enfermedades infecciosas graves agudas y crónicas. Se ha demostrado que los extractos reducen las infecciones posquirúrgicas y disminuyen los daños de la quimioterapia y radiación y también se han usado como adyuvantes de la terapia principal para el tratamiento de neoplasias. Todas estas afecciones se han tratado con éxito con extractos de timo bovino.

En un estudio aleatorizado en pacientes con melanoma maligno, los péptidos del timo produjeron un incremento del periodo sin tumor, un tiempo de supervivencia mayor y una mayor calidad de vida (4). En otro estudio aleatorizado

en pacientes con linfoma no Hodgkin de grado intermedio y alto se trató a los pacientes con péptidos del timo además de con la quimioterapia convencional. Los pacientes tratados toleraron los péptidos del timo bastante bien y tuvieron una tasa de respuesta completa significativamente mayor que los pacientes que no recibieron péptidos del timo (5). En un estudio aleatorizado adicional en pacientes sometidos a cirugía colorrectal se mostró que en los pacientes que habían recibido péptidos del timo además de cefotetán, la tasa de abscesos abdominales y las infecciones de las vías respiratorias altas disminuyeron significativamente (6). Un estudio aleatorizado realizado en mujeres con cáncer de mama avanzado documentó que las mujeres que habían recibido péptidos del timo además de su régimen quimioterapéutico toleraron la quimioterapia significativamente mejor y presentaban una tasa reducida de infecciones secundarias (7,8).

En línea con los hallazgos anteriores, parece que los péptidos del timo se pueden usar para potenciar la función de la médula ósea y proteger al paciente frente a la mielosupresión que produce la quimioterapia convencional; para soportar la recuperación de la médula ósea tras radioterapia y quimoterapia; para prevenir las infecciones secundarias debido a la inmunosupresión causada por la quimoterapia convencional y las intervenciones quirúrgicas; para aumentar la tasa de respuesta completa y parcial a las terapias anticancerosas y para mejorar la función linfocitaria y los mecanismos de defensa biológica.

El sistema inmunológico está compuesto por muchas células diferentes, incluidos linfocitos T, linfocitos B, células NK etc. El origen de estas diferentes células varía. Los linfocitos T prematuros se originan en la médula ósea y después pasan al timo. En el timo se producen diferentes procesos que conducen a la producción de linfocitos T maduros y a la secreción de vahos péptidos que controlan la respuesta inmunitaria. Los linfocitos T se pueden dividir en varios subgrupos, por ejemplo linfocitos T colaboradores, linfocitos T citotóxicos, linfocitos T de memoria y células reguladoras T. Cada subpoblación tiene su propia función durante la respuesta inmunitaria. Estos subgrupos se caracterizan por los diferentes antígenos presentados en sus membranas. Por ejemplo, los linfocitos T colaboradores presentan el antígeno CD4 en su membrana, mientras que los linfocitos T citotóxicos presentan el antígeno CD8 en su membrana.

Los linfocitos T CD4+ desempeñan un papel regulador y se cree que están relacionados con la autotolerancia periférica. Inicialmente se sugirió la existencia de los linfocitos T derivados del timo mediante el inicio de enfermedades autoinmunitarias en ratones tras timectomía al 3er día de vida. Se encontró que estos trastornos se debían a la pérdida de linfocitos T CD4+ periféricos que expresan de forma constitutiva IL-2R alfa (CD25), que aparece más tarde en la periferia tras el nacimiento. Las células CD4+CD25+ generadas fisiológicamente inhiben una amplia gama de trastornos autoinmunitarios e inflamatorios, por ejemplo colitis.

A pesar de numerosos estudios, el mecanismo por el cual los linfocitos T CD4+CD25+ ejerecen su función reguladora no está claro. En algunos estudios se ha demostrado que la regulación in vivo depende de la producción de citocinas supresoras, tales como IL-1 y TGF-p y moléculas de la superficie celular, tales como CTLA-4. En estudios in vivo se ha demostrado que el efecto supresor no está mediado por citocinas sino por contacto celular.

Se ha indicado que los linfocitos T CD8+ son esenciales in vivo para prevenir la encefalomielitis autoinmunitaria experimental y para participar en la tolerancia oral. Los linfocitos T CD8+CD28- reguladores se pueden generar y expandir in vitro mediante múltiples rondas de estimulaciones por CPA alogénicas,... [Seguir leyendo]

1. Un polipéptido aislado que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID N2 2 o de SEC ID N2 4.

2. Un polipéptido aislado que comprende una secuencia contigua de los 13 restos de aminoácidos de la SEC ID N2 5.

3. Un polipéptido aislado que comprende una secuencia seleccionada de la SEC ID N2 5, la SEC ID N2 7, la SEC ID

N2 9, la SEC ID N21 y la SEC ID N212, y que tiene una característica biológica seleccionada de la inducción de la proliferación de esplenocitos y timocitos de ratón, la unión a PBL humanos, la modulación del número de glóbulos blancos en ratones, el incremento del nivel de IL-1 in vivo o la reducción del crecimiento tumoral y los síntomas de colitis/enfermedad de Crohn en un modelo de ratón.

4. Un polipéptido aislado que comprende una secuencia modificada de la SEC ID N2 2 o la SEC ID N2 4, en el que

hasta tres restos están cada uno sustituido por otro resto de aminoácido mediante sustitución conservadora.

5. Una secuencia polipeptídica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en la que los aminoácidos están en orden inverso y que tiene una característica biológica seleccionada de la inducción de la proliferación de esplenocitos y timocitos de ratón, la unión a PBL humanos, la modulación del número de glóbulos blancos en

ratones, el incremento del nivel de IL-1 in vivo o la reducción del crecimiento tumoral y de los síntomas de colitis/enfermedad de Crohn en un modelo de ratón.

6. Una secuencia polipeptídica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en la que uno o más aminoácidos están sustituidos por el correspondiente D-aminoácido y que tiene una característica biológica seleccionada de la inducción de la proliferación de esplenocitos y timocitos de ratón, la unión a PBL humanos, la

modulación del número de glóbulos blancos en ratones, el incremento del nivel de IL-1 in vivo o la reducción del crecimiento tumoral y de los síntomas de colitis/enfermedad de Crohn en un modelo de ratón.

7. Una composición farmacéutica que comprende el polipéptido aislado de una cualquiera de las reivindicaciones 1-

6.

8. Una cantidad eficaz del polipéptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1-6 para su uso en el tratamiento de 25 una enfermedad o trastorno.

9. El polipéptido para su uso de acuerdo con la reivindicación 8, en el que la enfermedad o trastorno es seleccionada de una afección inflamatoria o alérgica, un trastorno de la piel, una enfermedad de cáncer y una enfermedad autoinmunitaria.