Métodos y productos para pronosticar la evolución clínica o predecir el riesgo de recidiva de una lesión papilar de mama.

Métodos y productos para pronosticar la evolución clínica o predecir el riesgo de recidiva de una lesión papilar de mama.

La presente invención se refiere a métodos y productos in vitro para pronosticar la evolución clínica o predecir el riesgo y tipo de recidiva de una lesión papilar de mama, en base a expresión de la proteína proCOL11A1, con el objetivo de determinar el tratamiento y patrón de seguimiento más adecuado para cada paciente.

MÉTODOS Y PRODUCTOS PARA PRONOSTICAR LA EVOLUCIÓN CLÍNICA O PREDECIR EL RIESGO DE RECIDIVA DE UNA LESIÓN PAPILAR DE MAMA

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a métodos y productos in vitro para pronosticar la evolución clínica o predecir el riesgo y tipo de recidiva de una lesión papilar de mama, útiles como herramienta para seleccionar el tratamiento y seguimiento más adecuados a cada paciente.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

El cáncer es uno de los principales problemas de salud pública a escala mundial. Según la base de datos GLOBOCAN, de la Agencia Internacional de Investigación en Cáncer, perteneciente a la Organización Mundial de la Salud, más de 10 millones de casos de cáncer se diagnosticaron en todo el mundo durante el año 2000, y el número de muertes debidas al cáncer el año 2.000 fue superior a 6 millones de personas.

Las células tumorales durante el proceso de malignización cambian su patrón de expresión génica, lo que altera procesos celulares, tales como el mantenimiento de la arquitectura celular, la adhesión, la muerte y la proliferación celular. Estas modificaciones no sólo generan cambios en las propias células, sino que hacen que algunas células del estroma reciban señales moleculares alteradas y cambien su pauta de comportamiento y su patrón de expresión génica, adquiriendo una morfología típica de miofibroblastos. Las moléculas secretadas por estos miofibroblastos en respuesta al tumor adyacente pueden a su vez contribuir de diferente manera a promover el crecimiento e invasión tumoral, de manera que se establece un bucle paracrino entre tumor y estroma. En los últimos años, se han generado evidencias científicas que apuntan cada vez con mayor precisión hacia el estroma peritumoral, como uno de los principales promotores de la invasividad tumoral, así como de fenómenos de resistencia a terapia.

Los métodos y productos para diagnóstico que los autores de la presente invención reivindican, se enmarcan en este novedoso marco de investigación, ya que se basan en la explotación del gen col11a1 y de la proteína proCOL11A1, presente en células del

estroma de carcinomas invasivos, como potencial marcador para la clasificación de papilomas intraductales de mama según su tendencia a progresar a un tumor maligno.

El cáncer de mama es la neoplasia con mayor tasa de incidencia y mortalidad entre las mujeres, de ahí que su diagnóstico precoz y tratamiento sean de vital importancia. En los últimos años, con la introducción de la genética en la medicina (en especial en la oncología médica), se han realizado diversos descubrimientos que influyen en el pronóstico y tratamiento del cáncer de mama, que han llevado a reclasificar esta patología en cuanto a su perfil genético; los descubrimientos más significativos han sido acerca del componente epitelial de estos tumores, fundamentalmente los factores de crecimiento epidérmico (EGFR y Her-2), que se han convertido en dianas terapéuticas al igual que los receptores de estrógenos y progesterona (Perou C., Sorlie T., Eisen M., 2000, Nature, 406:747-752; Nielsen T., Hsu F., Jensen K., 2004, Clin. Cáncer Res, 10:5367-5374). Además, se han desarrollado una serie de marcadores inmuno- histoquímicos, de gran utilidad para diferenciar entre lesiones benignas y malignas en los casos en que las técnicas histoquímicas convencionales son insuficientes. En la mama existen lesiones benignas esclerosantes, principalmente la adenosis esclerosante y la cicatriz radial que, en ocasiones (debido a su patrón morfológico), plantean dificultad en el diagnóstico diferencial con lesiones malignas infiltrantes (tales como el carcinoma tubular y carcinoma ductal infiltrante); esta situación es aún más compleja en biopsia con aguja gruesa, ya que al no existir una representación total de la lesión no se pueden apreciar los contornos de la misma, lo cual es una de las claves para el diagnóstico diferencial, especialmente cuando con las tinciones habituales no se pueden reconocer las células básales mioepiteliales presentes en las lesiones benignas y ausentes en las lesiones malignas infiltrantes.

Existen marcadores inmunohistoquímicos (como la p63, la a-actina, la miosina de cadenas pesadas para músculo liso, la calponina, la proteína s100, o el CD10) que tiñen las células mioepiteliales de los conductos mamarios, ayudando a diferenciar entre este tipo de lesiones. Dentro de estos marcadores, la a-actina, la miosina de cadenas pesadas para el músculo liso y la calponina, presentan una alta sensibilidad (89%) para las células básales mioepiteliales; sin embargo, no son específicas de éstas, tiñendo igualmente a las células musculares lisas vasculares y a los miofibroblastos estromales; problemas semejantes se plantean con s100 y CD10 (Lerwill, M.F., 2004, Am J Surg Path, 28:1076- 1091). Werling y colaboradores (Werling, R. W., Hwang, H., Yaziji, H., 2003, Am J Surg Path, 27:82-90) estudiaron una serie de casos correspondientes a adenosis esclerosante,

carcinoma ductal infiltrante, carcinoma lobulillar y carcinoma ductal in situ, analizando el patrón de reactividad de los anticuerpos p63, miosina de músculo liso y calponina, demostrando que todos ellos tiñeron las células mioepiteliales de los casos benignos y malignos no infiltrantes, corroborando a su vez la positividad de miosina y calponina en miofibroblastos y células musculares lisas vasculares. En ese trabajo, p63 fue el marcador que menor reactividad cruzada presentó con los fibroblastos estromales, sin teñir ninguno de ellos, lo cual reveló su alta sensibilidad y especificidad para teñir células mioepiteliales en comparación con el resto de anticuerpos estudiados; no obstante, presentó algunas desventajas como la tinción en ocasiones discontinua de las células mioepiteliales (en particular en los carcinomas in situ) e, igualmente, la positividad focal hasta en un 11% de los casos de las células tumorales. Meryem y colaboradores describieron, por otra parte, la positividad con p63 de 13 casos de carcinoma mamario metaplásico de un total de 14 casos (Meryem, Koker, M., Kleer, C.G., 2004, Am J Surg Path, 28:1506-1512). Actualmente p63 es uno de los marcadores más usados para el diagnóstico diferencial entre lesiones benignas esclerosantes y malignas infiltrantes de la mama; sin embargo, hasta la fecha no existe ningún marcador estromal que ayude a diferenciar entre estas lesiones (Mattia Barbareschi, M., Pecciarini L., Cangi G., 2001, Am J Surg Path, 25:1054-1060).

Dentro de las lesiones de mama, las de arquitectura papilar (papiloma intraductal, papilomatosis, papiloma atípico y carcinoma papilar intraductal) son las que generan una mayor dificultad en su diagnóstico (Collins, L.C. and S.J. Schnitt, Histopathology, 2008. 52(1):20-9). Debido a su similitud, el diagnóstico certero de estas lesiones mediante morfología únicamente se puede complicar, por lo que el anatomopatólogo recurre a marcadores diferenciales. El principal indicador de la invasividad de una lesión papilar es la presencia o ausencia de células mioepiteliales (Ueng, S.H., etal. Arch Pathol Lab Med, 2009. 133(6):893-907) que se pueden poner de manifiesto mediante tinción inmunohostoquímica de los marcadores comentados en el párrafo anterior (Mulligan, A.M. and F.P. O'Malley, Adv Anat Pathol, 2007. 14(2):108-19). También se han utilizado los receptores de estrógenos (Mulligan & OMalley citado supra) o distintas citoqueratinas tales como CK5/6 y CK8 (Moumen, M., et al. Int J Dev Biol, 2011. 55(7-9):763-71). Sin embargo, aunque estas técnicas ayudan en el diagnóstico no hay un consenso claro que determine la sensibilidad y precisión de estos marcadores (Ueng, S.H., et al. Arch Pathol Lab Med, 2009. 133(6):893-907; Shouhed, D., etal. Am Surg, 2012. 78(10): 1161-5).

De todas las lesiones papilares de la mama, el papiloma intraductal es la patología que más discrepancias genera, en cuanto al diagnóstico y el tratamiento (Mulligan & OMalley citado supra). Este desacuerdo se debe principalmente a que, aunque el papiloma intraductal es per se una lesión benigna, la asociación entre el papiloma intraductal y la recidiva en forma de patologías malignas es bastante alta, llegando hasta el 33% si la lesión inicial posee atipias (Ueng, S.H., etal. Arch Pathol Lab Med, 2009. 133(6):893-907; Ahmadiyeh, N. et al., Ann Surg Oncol, 2009,16(8):2264-9; Valdes, E.K., et al. Ann Surg Oncol, 2006. 13(4):480-2; Rosen, Papilloma and related benign tumors, in Rosen's breast pathology, R. PP, Editor. 2009, Williams & Wilkins: Philadelphia. pp. 85-136).

De hecho, existe gran controversia en la forma de actuar cuando se diagnostica un nuevo caso, al existir grupos que abogan por una extirpación completa de la lesión en todos los casos (Rizzo,... [Seguir leyendo]

Un método in vitro para pronosticar la evolución clínica y/o predecir el riesgo de recidiva de una lesión papilar de mama, seleccionado entre el Método (A) y el Método (B), en donde

A) el Método (A) comprende

- detectar en una muestra de un sujeto diagnosticado de una lesión papilar de mama la presencia de la proteína proCOL11A1;

en donde

- la detección de la presencia de la proteína proCOL11A1 en dicha muestra de un sujeto diagnosticado de una lesión papilar de mama es indicativa de que el riesgo de recidiva es alto, o

- la no detección de la presencia de la proteína proCOL11A1 en dicha muestra de un sujeto diagnosticado de una lesión papilar de mama es indicativa de que el riesgo de recidiva es bajo, y

B) el Método (B) comprende

- comparar el nivel de expresión de la proteína proCOL11A1 en dicha muestra con el nivel de expresión de dicha proteína proCOL11A1 en una muestra control;

en donde

- un nivel de expresión de la proteína proCOL11A1 en dicha muestra de un sujeto diagnosticado de una lesión papilar de mama superior al nivel de expresión de dicha proteína proCOL11A1 en una muestra control es indicativa de que el riesgo de recidiva es alto, o

- un nivel de expresión de la proteína proCOL11A1 en dicha muestra de un sujeto diagnosticado de una lesión papilar de mama igual o

inferior al nivel de expresión de dicha proteína proCOL11A1 en una muestra control es indicativa de que el riesgo de recidiva es bajo.

2. Método según la reivindicación 1, en el que dicha muestra es una muestra de

tejido de mama o una muestra de un fluido biológico.

3. Método según la reivindicación 2, en el que dicha muestra de tejido de mama se obtiene mediante biopsia, citología o resección quirúrgica.

4. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que comprende, además,

la obtención a partir de dicha muestra de un extracto de proteínas o de un extracto que comprende RNA total.

5. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que la detección de

la proteína proCOL11A1 comprende poner en contacto el tejido de mama, o el

extracto de proteínas de la muestra, con un anticuerpo específico contra la proteína proCOL11A1, bajo condiciones que permiten la formación de un complejo anticuerpo-proteína proCOL11A1.

6. Método según la reivindicación 5, en el que dicho anticuerpo específico contra la

proteína proCOL11A1 es un anticuerpo que reconoce un epítopo situado en el dominio VAR del extremo N-terminal de la proteína proCOL11A1.

7. Método según la reivindicación 5 ó 6, en el que dicho anticuerpo específico

contra la proteína proCOL11A1 es el anticuerpo monoclonal 1E8.33.

8. Método según cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, que comprende, además, la detección y/o cuantificación del complejo anticuerpo-proteína proCOL11A1 formado.

9. Método según cualquiera de las reivindicaciones 5 a 8, en el que la detección y/o cuantificación del complejo anticuerpo-proteína proCOL11A1 formado se lleva a cabo mediante una técnica seleccionada del grupo formado por Western-blot, ELISA, RIA, EIA competitivo, DAS-ELISA, técnicas inmunocitoquímicas e

inmunohistoquímicas, técnicas de detección multiplex basadas en el empleo de

microsferas, biochips o microarrays de proteínas que incluyen anticuerpos específicos, o ensayos basados en precipitación coloidal.

10. Método según cualquiera de las reivindicaciones 5 a 9, en el que la detección de la proteína proCOL11A1 se lleva a cabo mediante un análisis inmunohistoquímico.

11. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicha recidiva es una recidiva en un tumor o carcinoma de mama.

12. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicha recidiva es una recidiva en adenocarcinoma ductal, carcinoma ductal in situ, carcinoma ductal invasivo, carcinoma lobular o lobulillar, carcinoma lobular in situ, carcinoma lobular invasivo, carcinoma tubular, carcinoma medular, carcinoma mucinoso o coloidal, carcinoma papilar, carcinoma inflamatorio, carcinoma cribiforme, cáncer de Paget, cáncer de mama invasivo o cáncer de mama metastásico.

13. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicha lesión papilar de mama es un papiloma intraductal de mama.

14. Un método para seleccionar un sujeto diagnosticado de una lesión papilar de mama para un tratamiento que comprende la extirpación quirúrgica de dicha lesión papilar de mama mediante un método que permita asegurar la extirpación completa de la lesión y el tratamiento farmacológico preventivo para evitar la recidiva, así como el seguimiento exhaustivo de la progresión de la lesión, que permita detectar precozmente la posible recidiva, que comprende

- detectar en una muestra de un sujeto diagnosticado de una lesión papilar de mama, la presencia de la proteína proCOL11A1; o

- comparar el nivel de expresión de la proteína proCOL11A1 en dicha muestra con el nivel de expresión de dicha proteína proCOL11A1 en una muestra control;

en donde dicho sujeto es seleccionado para dicho tratamiento:

- si se detecta la presencia de la proteína proCOL11A1 en dicha muestra del sujeto diagnosticado de una lesión papilar de mama; o

- si el nivel de expresión de la proteína proCOL11A1 en dicha muestra del sujeto diagnosticado de una lesión papilar de mama es superior al nivel de expresión de dicha proteína proCOL11A1 en la muestra control.

15. Un método para seleccionar un sujeto diagnosticado de una lesión papilar de mama para un tratamiento seleccionado entre un tratamiento que comprende la extirpación de dicha lesión papilar de mama por cirugía conservadora y un tratamiento que comprende la no extirpación de dicha lesión papilar de mama, que comprende

- detectar en una muestra de un sujeto diagnosticado de una lesión papilar de mama la presencia de la proteína proCOL11A1; o

- comparar el nivel de expresión de la proteína proCOL11A1 en dicha muestra con el nivel de expresión de dicha proteína proCOL11A1 en una muestra control;

en donde dicho sujeto es seleccionado para dicho tratamiento:

- si no se detecta la presencia de la proteína proCOL11A1 en dicha muestra del sujeto diagnosticado de una lesión papilar de mama; o

- si el nivel de expresión de la proteína proCOL11A1 en dicha muestra del sujeto diagnosticado de una lesión papilar de mama es igual o inferior al nivel de expresión de dicha proteína proCOL11A1 en la muestra control.

16. Un método para seleccionar un tratamiento para un sujeto diagnosticado de una lesión papilar de mama, que comprende

- detectar en una muestra de un sujeto diagnosticado de una lesión papilar de mama la presencia de la proteína proCOL11A1; o

- comparar el nivel de expresión de la proteína proCOL11A1 en dicha muestra con el nivel de expresión de dicha proteína proCOL11A1 en una muestra control;

en donde dicho tratamiento se selecciona entre un tratamiento farmacológico, un tratamiento que comprende la extirpación quirúrgica de dicha lesión papilar de mama, y una combinación de los mismos,

en donde se selecciona dicho tratamiento:

- si se detecta la presencia de la proteína proCOL11A1 en dicha muestra del sujeto diagnosticado de una lesión papilar de mama; o

- si el nivel de expresión de la proteína proCOL11A1 en dicha muestra del sujeto diagnosticado de una lesión papilar de mama, es superior al nivel de expresión de dicha proteína proCOL11A1 en la muestra control.

17. Uso de la proteína proCOL11A1 como marcador para pronosticar la evolución clínica, o para predecir el riesgo de recidiva de una lesión papilar de mama, o para seleccionar un sujeto diagnosticado de una lesión papilar de mama, o para seleccionar un tratamiento para un sujeto diagnosticado de una lesión papilar de mama.

18. Uso de la proteína proCOL11A1 según la reivindicación 17, como marcador para predecir el riesgo de recidiva de una lesión papilar de mama, en donde dicha recidiva es una recidiva en un tumor o carcinoma de mama.

19. Uso de la proteína proCOLI 1A1 según la reivindicación 17 ó 18, como marcador para predecir el riesgo de recidiva de una lesión papilar de mama, en donde dicha recidiva es una recidiva en adenocarcinoma ductal, carcinoma ductal in situ, carcinoma ductal invasivo, carcinoma lobular o lobulillar, carcinoma lobular in situ, carcinoma lobular invasivo, carcinoma tubular, carcinoma medular, carcinoma mucinoso o coloidal, carcinoma papilar, carcinoma inflamatorio, carcinoma cribiforme, cáncer de Paget, cáncer de mama invasivo o cáncer de mama metastásico.

20. Uso de la proteína proCOL11A1 según cualquiera de las reivindicaciones 17 a 19, en el que dicha lesión papilar de mama es un papiloma intraductal de mama.

21. Uso de un anticuerpo específico que reconoce la proteína proCOL11A1, en el que dicho anticuerpo específico contra la proteína proCOL11A1 es un anticuerpo que reconoce un epítopo situado en el dominio VAR del extremo N-terminal de la

proteína proCOL11A1, como marcador para pronosticar la evolución clínica, o para predecir el riesgo de recidiva de una lesión papilar de mama, o para seleccionar un sujeto diagnosticado de una lesión papilar de mama, o para seleccionar un tratamiento para un sujeto diagnosticado de una lesión papilar de mama.

22. Uso de un anticuerpo específico que reconoce la proteína proCOL11A1 según la reivindicación 21, como marcador para predecir el riesgo de recidiva de una lesión papilar de mama, en donde dicha recidiva es una recidiva en un tumor o carcinoma de mama.

23. Uso de un anticuerpo específico que reconoce la proteína proCOL11A1 según la reivindicación 21 ó 22, como marcador para predecir el riesgo de recidiva de una lesión papilar de mama, en donde dicha recidiva es una recidiva en adenocarcinoma ductal, carcinoma ductal in situ, carcinoma ductal invasivo, carcinoma lobular o lobulillar, carcinoma lobular in situ, carcinoma lobular invasivo, carcinoma tubular, carcinoma medular, carcinoma mucinoso o coloidal, carcinoma papilar, carcinoma inflamatorio, carcinoma cribiforme, cáncer de Paget, cáncer de mama invasivo o cáncer de mama metastásico.

24. Uso de un anticuerpo específico que reconoce la proteína proCOL11A1 según cualquiera de las reivindicaciones 21 a 23, en el que dicha lesión papilar de mama es un papiloma intraductal de mama.

25. Uso de un anticuerpo específico que reconoce la proteína proCOL11A1 según cualquiera de las reivindicaciones 21 a 24, en el que dicho anticuerpo específico contra la proteína proCOL11A1 es el anticuerpo monoclonal 1E8.33.

26. Uso de un kit que comprende un reactivo que reconoce la proteína proCOL11A1, en donde dicho reactivo que reconoce la proteína proCOL11A1 es un anticuerpo específico contra la proteína proCOL11A1 que reconoce un epítopo situado en el dominio VAR del extremo N-terminal de la proteína proCOL11A1, o de un reactivo para la detección y/o cuantificación de la expresión del gen col11a1, en el que dicho reactivo para la detección del gen col11a1 comprende una pareja de oligonucleótidos cebadores que amplifican específicamente una región del gen col 11 a1, en donde dicha pareja de oligonucleótidos cebadores comprende los oligonucleótidos cuyas secuencias de nucleótidos se muestran en SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2, para pronosticar la evolución clínica, o para predecir el

riesgo de recidiva de una lesión papilar de mama, o para seleccionar un sujeto diagnosticado de una lesión papilar de mama, o para seleccionar un tratamiento para un sujeto diagnosticado de una lesión papilar de mama.

27. Uso de un kit según la reivindicación 26, para predecir el riesgo de recidiva de

una lesión papilar de mama, en donde dicha recidiva es una recidiva en un tumor o carcinoma de mama.

28. Uso de un kit según la reivindicación 26 ó 27, para predecir el riesgo de recidiva

de una lesión papilar de mama, en donde dicha recidiva es una recidiva en

adenocarcinoma ductal, carcinoma ductal in situ, carcinoma ductal invasivo, carcinoma lobular o lobulillar, carcinoma lobular in situ, carcinoma lobular invasivo, carcinoma tubular, carcinoma medular, carcinoma mucinoso o coloidal, carcinoma papilar, carcinoma inflamatorio, carcinoma cribiforme, cáncer de 15 Paget, cáncer de mama invasivo o cáncer de mama metastásico.

29. Uso de un kit según cualquiera de las reivindicaciones 26 a 28, en el que dicha lesión papilar de mama es un papiloma intraductal de mama.

30. Uso de un kit según cualquiera de las reivindicaciones 26 a 29, en el que dicho

anticuerpo específico contra la proteína proCOL11A1 es el anticuerpo monoclonal 1E8.33.