Métodos para evaluar la actividad de una composición de polisacárido.

Un método para vigilar el efecto de una preparación de polisacárido en un individuo que tiene cáncer,

comprendiendo el método determinar niveles estromales tumorales de células supresoras derivadas de mieloides (las MDSC), células progenitoras endoteliales (las EPC), expresión de metalopeptidasa 9 de la matriz plasmática (MMP-9), expresión de factor estimulador de colonias de granulocitos (G-CSF), expresión de monocina inducida por interferón gamma (MIG) o asociaciones de los mismos en una muestra obtenida del individuo después de que se haya administrado al individuo la preparación de polisacárido, para determinar de ese modo el efecto de la preparación de polisacárido en el individuo;

en el que la preparación de polisacárido presenta las siguientes características:

un peso molecular de cadena promedio ponderal entre 3.500 y 8.000 Da;

actividad anti-Xa y actividad anti-IIa cada una menor que 50 UI/mg;

entre 5% y 50% de restos de ácido urónico separados de glicol y

una distribución de peso molecular de manera que 10-50% de los oligosacáridos de la preparación presenta un peso molecular< 3.000 Da, 40-65% de los oligosacáridos presenta un peso molecular entre 3.000-8.000 Da y 5-30% de los oligosacáridos presentan un peso molecular >8.000 Da

y en el que una disminución en el nivel de las MDSC, el nivel de las EPC, nivel de expresión de plasma MMP-9, nivel de expresión de G-CSF o asociaciones de los mismos en relación a un patrón de referencia indica que la preparación de polisacárido es eficaz en el tratamiento del cáncer en el individuo y un aumento o cambio no significativo en el nivel de las MDSC, el nivel de las EPC, nivel de expresión de plasma MMP-9, nivel de expresión de G-CSF o asociaciones de los mismos en relación a un patrón de referencia indica que la preparación de polisacárido no es eficaz en el tratamiento del cáncer en el individuo.

Métodos para evaluar la actividad de una composición de polisacárido.

Antecedentes La heparina, un glucosaminoglucano de tipo heparina altamente sulfatado (HLGAG, por sus siglas en inglés) producido por mastocitos y aislado de fuentes naturales, es un anticoagulante clínico ampliamente usado. Sin embargo, los efectos de la heparina natural o no fraccionada, pueden ser difíciles de predecir y los pacientes deben ser vigilados estrechamente para evitar sobre-o infra-anticoagulación. Las heparinas de bajo peso molecular (las LMWH, por sus siglas en inglés) obtenidas por diversos métodos de fraccionamiento o despolimerización de heparina polimérica tienen acción farmacológica más previsible como anticoagulantes, efectos secundarios reducidos, actividad antitrombótica prolongada y mejor biodisponibilidad que la heparina no fraccionada (UFH, por sus siglas en inglés) . Se homologan varias LMWH para el tratamiento de pacientes externos de estados trombóticos.

Hay un creciente interés en la función principal de los agentes antitrombóticos en la gestión de pacientes de cáncer.

Sumario de la invención Según la presente invención, se proporciona un método para vigilar el efecto de una preparación de polisacárido en un individuo que tiene cáncer, comprendiendo el método determinar los niveles estromales tumorales de células supresoras derivadas de mieloides (las MDSC, por sus siglas en inglés) , células progenitoras endoteliales (las EPC, por sus siglas en inglés) , expresión de la metalopeptidasa 9 de la matriz plasmática (MMP-9) , expresión del factor estimulador de colonias de granulocitos (G-CSF, por sus siglas en inglés) , monocina inducida por la expresión de interferón gamma (MIG, por sus siglas en inglés) o asociaciones de los mismos en una muestra obtenida del individuo después de que se haya administrado al individuo la preparación de polisacárido, para determinar de ese modo el efecto de la preparación de polisacárido en el individuo;

en el que la preparación de polisacárido presenta las siguientes características:

un peso molecular de cadena promedio ponderal entre 3.500 y 8.000 Da;

actividad anti-Xa y actividad anti-IIa cada una menor que 50 UI/mg;

entre 5% y 50% de restos de ácido urónico separados de glicol y

una distribución de peso molecular de manera que el 10-50% de los oligosacáridos de la preparación presenta un peso molecular < 3.000 Da, 40-65% de los oligosacáridos presenta un peso molecular entre 3.000-8.000 Da y 5-30% de los oligosacáridos presenta un peso molecular > 8.000 Da y en el que una disminución en el nivel de las MDSC, el nivel de las EPC, nivel de expresión de plasma MMP-9, nivel de expresión de G-CSF o combinaciones de los mismos en relación a un patrón de referencia indica que la preparación de polisacárido es eficaz en el tratamiento del cáncer en el individuo y un aumento o cambio no significativo en el nivel de las MDSC, el nivel de las EPC, nivel de expresión de plasma MMP-9, nivel de expresión de G-CSF o combinaciones de los mismos en relación a un patrón de referencia indica que la preparación de polisacárido no es eficaz en el tratamiento del cáncer en el individuo.

Más en general, la presente descripción caracteriza un método para vigilar el efecto de una preparación de polisacárido descrita en la presente memoria en un individuo con un trastorno descrito en la presente memoria, por ej., cáncer, por ej., un cáncer descrito en la presente memoria, comprendiendo el método:

seleccionar un individuo al que se ha administrado una o más de las preparaciones de polisacárido descritas en la presente memoria y

determinar niveles de células supresoras derivadas de mieloides (MDSC) , niveles de células progenitoras endoteliales (EPC) , niveles de expresión de metalopeptidasa 9 de la matriz plasmática (MMP-9) , niveles de expresión del factor estimulador de colonias de granulocitos (G-CSF) , niveles de expresión de monocina inducida por interferón gamma (MIG) o combinaciones de los mismos en el individuo, para determinar de ese modo el efecto de la preparación de polisacárido en el individuo.

En algunos casos, una disminución, por ej., una disminución estadísticamente significativa, en el nivel de las MDSC, el nivel de las EPC en la sangre, nivel de expresión de plasma MMP-9, nivel de expresión de G-CSF o combinaciones de los mismos en relación a un patrón de referencia indica que la preparación de polisacárido es eficaz en el tratamiento del trastorno en el individuo. En algunos casos, un aumento o cambio no significativo, por ej., cambio no estadísticamente significativo, en el nivel de las MDSC, el nivel de las EPC en la sangre, nivel de expresión de plasma MMP-9, nivel de expresión de G-CSF o combinaciones de los mismos en relación a un patrón de referencia indica que la preparación de polisacárido no es eficaz en el tratamiento del trastorno en el individuo. En algunos casos, un aumento en el nivel de expresión de MIG en relación a un patrón de referencia indica que la preparación de polisacárido es eficaz en el tratamiento del trastorno en el individuo. En algunos casos, una

disminución o cambio no significativo, por ej., cambio no estadísticamente significativo, en el nivel de expresión de MIG en relación a un patrón de referencia indica que la preparación de polisacárido no es eficaz en el tratamiento del trastorno en el individuo. En algunos casos, el patrón de referencia es el nivel de MDSC, el nivel de EPC, nivel de expresión de plasma MMP-9, nivel de expresión de G-CSF y/o nivel de expresión de MIG en el individuo previamente a administración de la preparación de polisacárido. En algunos casos, se determina el nivel de MDSC, el nivel de EPC, nivel de expresión de plasma MMP-9, nivel de expresión de G-CSF y/o nivel de expresión de MIG de una muestra, por ej., una muestra de sangre o tejido, por ej., muestra de biopsia obtenida del individuo. En algunos casos, se determina el nivel de MDSC, el nivel de EPC, nivel de expresión de plasma MMP-9, nivel de expresión de G-CSF y/o nivel de expresión de MIG por un método seleccionado del grupo que consiste en (por sus siglas en inglés) : inmunoanálisis ligado a enzimas (ELISA) , un radioinmunoensayo (RIA) , un ensayo por el método Western o un ensayo inmunohistoquímico (IHC) . En algunos casos, al individuo no se le ha administrado previamente la preparación de polisacárido o la preparación de polisacárido se ha administrado previamente al individuo en una o más ocasiones.

También se desvela en la presente memoria un método para vigilar el efecto de una preparación de polisacárido descrita en la presente memoria en un individuo con un trastorno descrito en la presente memoria, por ej., cáncer, por ej., un cáncer descrito en la presente memoria, comprendiendo el método:

determinar niveles de células supresoras derivadas de mieloides (MDSC) , niveles de células progenitoras endoteliales (EPC) , niveles de expresión de metalopeptidasa 9 de la matriz plasmática (MMP-9) , niveles de expresión de factor estimulador de colonias de granulocitos (G-CSF) , niveles de expresión de monocina inducida por interferón gamma (MIG) o combinaciones de los mismos en el individuo,

administrar una o más preparaciones de polisacárido descritas en la presente memoria al individuo y

determinar niveles de células supresoras derivadas de mieloides (MDSC) , niveles de células progenitoras endoteliales (EPC) , niveles de expresión de metalopeptidasa 9 de la matriz plasmática (MMP-9) , niveles de expresión de factor estimulador de colonias de granulocitos (G-CSF) , niveles de expresión de monocina inducida por interferón gamma (MIG) o combinaciones de los mismos en el individuo, para determinar de ese modo el efecto de la preparación de polisacárido en el individuo.

También se desvela en la presente memoria un método para medir carga tumoral en un individuo que tiene cáncer, por ej., cáncer de mama (por ej., cáncer de mama localmente avanzado o metastásico) , melanoma (por ej., melanoma metastásico) , cáncer colorrectal (por ej., cáncer colorrectal localmente avanzado o metastásico) , cáncer pancreático (por ej., cáncer pancreático localmente avanzado o metastásico) , comprendiendo el método:

determinar niveles de células supresoras derivadas de mieloides (MDSC) , niveles de células progenitoras endoteliales (EPC) , niveles de expresión de metalopeptidasa 9 de la matriz plasmática (MMP-9) , niveles de expresión de factor estimulador de colonias de granulocitos (G-CSF) o combinaciones de los mismos en el individuo, en el que una disminución, por ej., una disminución estadísticamente significativa, en los niveles de MDSC,... [Seguir leyendo]

1. Un método para vigilar el efecto de una preparación de polisacárido en un individuo que tiene cáncer, comprendiendo el método determinar niveles estromales tumorales de células supresoras derivadas de mieloides (las MDSC) , células progenitoras endoteliales (las EPC) , expresión de metalopeptidasa 9 de la matriz plasmática (MMP-9) , expresión de factor estimulador de colonias de granulocitos (G-CSF) , expresión de monocina inducida por interferón gamma (MIG) o asociaciones de los mismos en una muestra obtenida del individuo después de que se haya administrado al individuo la preparación de polisacárido, para determinar de ese modo el efecto de la preparación de polisacárido en el individuo;

en el que la preparación de polisacárido presenta las siguientes características:

un peso molecular de cadena promedio ponderal entre 3.500 y 8.000 Da;

actividad anti-Xa y actividad anti-IIa cada una menor que 50 UI/mg;

entre 5% y 50% de restos de ácido urónico separados de glicol y

una distribución de peso molecular de manera que 10-50% de los oligosacáridos de la preparación presenta un peso molecular < 3.000 Da.

4. 65% de los oligosacáridos presenta un peso molecular entre 3.000-8.000 Da y 5-30% de los oligosacáridos presentan un peso molecular > 8.000 Da y en el que una disminución en el nivel de las MDSC, el nivel de las EPC, nivel de expresión de plasma MMP-9, nivel de expresión de G-CSF o asociaciones de los mismos en relación a un patrón de referencia indica que la preparación de polisacárido es eficaz en el tratamiento del cáncer en el individuo y un aumento o cambio no significativo en el nivel de las MDSC, el nivel de las EPC, nivel de expresión de plasma MMP-9, nivel de expresión de G-CSF o asociaciones de los mismos en relación a un patrón de referencia indica que la preparación de polisacárido no es eficaz en el tratamiento del cáncer en el individuo.

2. El método según la reivindicación 1, en el que un aumento en el nivel de expresión de MIG en relación a un patrón de referencia indica que la preparación de polisacárido es eficaz en el tratamiento del cáncer en el individuo.

3. El método según la reivindicación 1, en el que una disminución o cambio no significativo en el nivel de expresión de MIG en relación a un patrón de referencia indica que la preparación de polisacárido no es eficaz en el tratamiento del cáncer en el individuo.

4. El método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el patrón de referencia es niveles de MDSC, niveles de EPC, niveles de expresión en plasma de MMP-9, niveles de expresión de G-CSF y/o niveles de expresión de MIG en el individuo previamente a administración de la preparación de polisacárido.

5. El método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la muestra es una muestra de sangre

o tejido.

6. El método según la reivindicación 5, en el que la muestra es una muestra de biopsia.

7. El método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que los niveles de MDSC, niveles de EPC, niveles de expresión en plasma de MMP-9, niveles de expresión de G-CSF y/o niveles de expresión de MIG se determinan por un método seleccionado del grupo que consiste en: inmunoanálisis ligado a enzimas (ELISA) , un radioinmunoensayo (RIA) , un ensayo por el método Western y un ensayo inmunohistoquímico (IHC) .

8. El método según la reivindicación 1, en el que la preparación de polisacárido se ha administrado previamente al individuo en una o más ocasiones.

9. El método según la reivindicación 1, en el que la preparación de polisacárido presenta entre 5% y 30% de restos de ácido urónico separados de glicol.

10. El método según la reivindicación 1, en el que la preparación de polisacárido presenta entre 10% y 30% de restos de ácido urónico separados de glicol.

11. El método según la reivindicación 1, en el que las cadenas de polisacárido de la preparación de polisacárido presentan no más de 3 restos de ácido urónico separados de glicol (UG) por cadena de polisacárido.

12. El método según la reivindicación 11, en el que cada cadena de polisacárido no presenta más de 2 o no más de 1 resto de ácido urónico separado de glicol (UG) por cadena de polisacárido.

13. El método según la reivindicación 11, en el que las cadenas de polisacárido de la preparación de polisacárido presentan de promedio no más de 3 restos de ácido urónico separados de glicol (UG) por cadena de polisacárido.

14. El método según la reivindicación 13, en el que las cadenas de polisacárido de la preparación de polisacárido presentan de promedio no más de 2 o no más de 1 restos de ácido urónico separados de glicol (UG) por cadena de polisacárido.

15. El método según la reivindicación 1, en el que la preparación de polisacárido presenta cadenas de polisacárido que tienen más de 40% de restos disacárido U2SHNS, 6S.

16. El método según la reivindicación 15, en el que la preparación de polisacárido tiene más de 70% de restos disacárido U2SHNS, 6S.

17. El método según la reivindicación 16, en el que la preparación de polisacárido presenta un grado de desulfatación menor que 40%.

18. El método según la reivindicación 17, en el que la preparación de polisacárido presenta un grado de desulfatación menor que 30%.

19. El método según la reivindicación 18, en el que la preparación de polisacárido presenta un grado de desulfatación menor que 10%.

20. El método según la reivindicación 1, en el que la preparación de polisacárido comprende polisacáridos que incluyen la Fórmula I:

[Uw-Hx, y, z]m~[UG-Hx, y, z]n en la que cada caso de U indica un resto de ácido urónico y cada caso de H indica un resto hexosamina;

en la que m y n son números enteros de manera que m = 4-16 y

n= 1-4;

cada una de w, x, y y z puede ser independientemente igual o diferente para cada caso de [Uw-Hx, y, z] y cada una de x, y y z puede ser independientemente igual o diferente para cada caso de [UG-Hx, y, z], en la que w = -2OS o -2OH;

x = -NS o -NAc;

y = -3OS o -3OH;

z = -6OS o -6OH;

yUG =

en la que el símbolo ~ indica que las unidades marcadas m y n se distribuyen a lo largo de la cadena de polisacárido y no están necesariamente en secuencia.

21. El método según la reivindicación 20, en el que n es 1-3.

22. El método según la reivindicación 1, en el que el cáncer se selecciona de: cáncer de ovario, cáncer de próstata, cáncer de pulmón, cáncer de hígado, cáncer de mama, glioma, cáncer gástrico, cáncer pancreático, cáncer de cabeza y cuello, cáncer colorrectal, linfoma, mieloma múltiple, melanoma, cáncer del intestino delgado y carcinoma de tiroides.

23. El método según la reivindicación 1, en el que el cáncer es cáncer pancreático.

24. El método según la reivindicación 1, en el que el cáncer es cáncer colorrectal.

25. El método según la reivindicación 1, en el que el cáncer es un cáncer metastásico.

26. El método según la reivindicación 25, en el que el cáncer metastásico es cáncer pancreático metastásico.

27. El método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, comprendiendo el método:

determinar niveles estromales tumorales de las MDSC, las EPC, expresión de MMP-9 en plasma, expresión de G

CSF, expresión de MIG o asociaciones de los mismos en una muestra obtenida del individuo previamente a la administración de la preparación de polisacárido y

con posterioridad determinar niveles estromales tumorales de las MDSC, las EPC, expresión de MMP-9 en plasma, expresión de G-CSF, expresión de MIG o asociaciones de los mismos en una muestra adicional obtenida del individuo después de que se haya administrado al individuo la preparación de polisacárido, para determinar de ese modo el efecto de la preparación de polisacárido en el individuo.

28. El método según la reivindicación 1, en el que menos de 30% de los restos de ácido urónico de la preparación de polisacárido son restos de ácido urónico separados de glicol.

29. El método según la reivindicación 1, en el que la preparación de polisacárido presenta una actividad anti-Xa menor que 20 UI/mg, por ej., menor que 10 UI/mg.

30. El método según la reivindicación 1, en el que la preparación de polisacárido presenta una actividad anti-IIa menor que 20 UI/mg, por ej., menor que 1 UI/mg.

31. El método según la reivindicación 1, en el que al menos 50% de las cadenas en la preparación de polisacárido presenta un extremo de reducción que comprende un resto de 2, 5-anhidromanosa que se ha reducido para formar un alcohol.

32. El método según la reivindicación 1, en el que al individuo se ha administrado la preparación de polisacárido junto con un tratamiento adicional.

33. El método según la reivindicación 32, en el que el tratamiento adicional es un agente quimioterapéutico.

34. El método según la reivindicación 33, en el que el agente quimioterapéutico es un agente citotóxico seleccionado de gemcitabina, taxanos y combinaciones de los mismos.

35. El método según la reivindicación 34, en el que el agente quimioterapéutico es gemcitabina.