Control de composiciones de copolímeros.

Un método para preparar una composición que comprende acetato de glatiramer purificado,

que comprende:

polimerizar N-carboxianhídridos de L-alanina, L-ácido glutámico protegido con bencilo, L-lisina y L-tirosina protegidas con ácido trifluoroacético (TFA) para generar un copolímero protegido (Compuesto Intermedio-1);

tratar el Compuesto Intermedio-1 para despolimerizar parcialmente el copolímero protegido y desproteger los grupos protegidos con bencilo generando con ello un producto parcialmente despolimerizado (Compuesto Intermedio-2);

tratar el Compuesto Intermedio-2 para desproteger las lisinas protegidas con TFA generando con ello acetato de glatiramer; y

purificar el acetato de glatiramer para crear acetato de glatiramer, en donde está presente agua durante al menos una parte del paso de despolimerización, en donde el agua presente durante al menos una parte del paso de despolimerización se controla de modo que esté dentro de un intervalo predeterminado.

Control de composiciones de copolímeros.

Antecedentes

El acetato de glatiramer (conocido también como copolímero-1 y comercializado como el ingrediente activo en COPAXONE® por Teva Pharmaceutical Industries Ltd., Israel) se utiliza en el tratamiento en la forma recurrente- remitente de la esclerosis múltiple (RRMS). De acuerdo con la etiqueta del producto COPAXONE®, el acetato de glatiramer (GA) está constituido por las sales acetato de pollpéptldos sintéticos que contienen cuatro aminoácidos existentes naturalmente: L-ácido glutámlco, L-alanina, L-tirosina y L-Iislna, con una fracción molar media consignada de ,141, ,427, ,95, y ,338, respectivamente. Químicamente, el acetato de glatiramer se designa como polímero de L-ácido glutámico con L-alanina, L-llsina y L-tirosina, acetato (sal). Su fórmula estructural es

(Glü. Ala. Lys, Tyr)x*xCH3COOH (C5H9N4 C3H7N (VCeHtíNsO^QjH,, N3)x*xC2H«2 CAS -147245-92-9

WO 27/22193 A2 y WO 26/29393 A2 dan a conocer métodos de producción de acetato de glatiramer.

Sumario de la Invención

La invención está basada, al menos en parte, en la identificación de métodos para controlar el nivel de L-ácido piroglutámlco (plro-Glu) en acetato de glatiramer (GA). Plro-Glu está presente en GA, y la capacidad para controlar el nivel de plro-Glu en GA es útil para controlar a la vez la calidad del producto y el proceso en la fabricación de GA.

Se describe en esta memoria un método para preparación de una composición que comprende acetato de glatiramer, que comprende: polimerlzar N-carboxianhídridos de L-alanina, L-ácido glutámico protegido con bencilo, L-lisina y L-tirosina protegidas con ácido trifluoroacétlco (TFA) para generar un copolímero protegido (Compuesto lntermedio-1); tratar el copolímero protegido para despolimerizar parcialmente el copolímero protegido y desproteger los grupos protegidos con bencilo generando con ello un producto parcialmente despolimerizado y desprotegido de bencilo (Compuesto lntermedio-2); tratar el producto parcialmente despolimerizado para desproteger las Usinas protegidas con TFA generando con ello un producto desprotegido de TFA (Compuesto lntermedio-3) y procesar ulteriormente el Compuesto lntermedio-3 para crear acetato de glatiramer, en donde la mejora comprende: controlar el agua presente durante al menos una parte del paso de despolimerización que está dentro de un intervalo predeterminado.

En diversas realizaciones del método que antecede está presente agua, ajustada o controlada al comienzo del paso de despolimerización; se añade agua durante el paso de despolimerización; el agua presente durante el paso de despolimerización está presente dentro de un intervalo predeterminado (v.g., el intervalo predeterminado es 4-25%, 5-25%, 4-2%, 4-16%, 7-15%, 8-14%, 9-13%, 1-12%, 13-19%, 14-18% p/p frente al Compuesto lntermedio-1); la despolimerización procede durante 16-64 horas, preferiblemente al menos 25 horas (v.g., 25-55 horas, al menos 3 horas, 3-5 horas, al menos 4 horas, 43-47 horas); la reacción de despolimerización se lleva a cabo a 17-35°C, v.g., 18-3°C, 18-22°C; el paso de despolimerización comprende poner en contacto el copolímero protegido con una solución que comprende fenol, HBr y ácido acético; la concentración de piro-Glu en el acetato de glatiramer purificado es 2-7 ppm (v.g., 25-6 ppm; 25-55 ppm; 3-5 ppm; 35-45 ppm, 24-65 ppm); el PM del acetato de glatiramer purificado es 5-9 Da (v.g., 65-75 Da); en una realización está presente agua durante el paso de despolimerización en 11,2% p/p frente al Compuesto lntermedio-1, la despolimerización transcurre durante 43-47 horas a 18-22°C y el proceso produce acetato de glatiramer purificado en el cual está presente piro-Glu en ,24-,65% p/p (24-65 ppm). La mejora comprende adicionalmente: preparar una composición farmacéutica que comprende al menos una parte del acetato de glatiramer purificado; y en algunos casos el método incluye adicionalmente medir la cantidad de agua en el paso de despolimerización al menos una vez.

Se describe también un método para preparación de una composición que comprende acetato de glatiramer, que comprende: polimerizar N-carboxianhídridos de L-alanina, L-ácido glutámico protegido con bencilo, L-lisina y L- tirosina protegidas con ácido trifluoroacético (TFA) para generar un copolímero protegido; tratar el copolímero protegido para despolimerizar parcialmente el copolímero protegido y desproteger los grupos protegidos con bencilo generando con ello un producto parcialmente despolimerizado; tratar el producto parcialmente despolimerizado para desproteger las lisinas protegidas con TFA generando con ello un producto desprotegido de TFA; y procesar el producto desprotegido de TFA para crear acetato de glatiramer, en donde está presente agua durante al menos una parte del paso de despolimerización.

Un método adicional es un método para preparar una composición que comprende acetato de glatiramer, que comprende: polimerizar N-carboxianhídridos de L-alanina, L-ácido glutámico protegido con bencilo, L-lisina y L- tirosina protegidas con ácido trifluoroacético (TFA) para generar un copolímero protegido; tratar el copolímero protegido para despolimerizar parcialmente el copolímero protegido y desproteger los grupos protegidos con bencilo

generando con ello un producto parcialmente despollmerizado; tratar el producto parcialmente despolimerizado para desproteger las Usinas protegidas con TFA generando con ello acetato de glatiramer; y purificar el acetato de glatiramer para crear acetato de glatiramer purificado, en donde está presente agua durante al menos una parte del paso de despolimerización dentro de un intervalo predeterminado.

Un método adicional descrito es un método para preparar una composición que comprende acetato de glatiramer, que comprende: polimerizar N-carboxianhídridos de L-alanina, L-ácido glutámico protegido con bencilo, L-lisina y L- tirosina protegidas con ácido trifluoroacético (TFA) para generar un copolímero protegido; tratar el copolímero protegido para despolimerizar parcialmente el copolímero protegido y desproteger los grupos protegidos con bencilo generando con ello un producto parcialmente despolimerizado; tratar el producto parcialmente despolimerizado para desproteger las lisinas protegidas con TFA generando con ello un producto desprotegido de TFA; y procesar el producto desprotegido de TFA; para crear acetato de glatiramer, en donde el agua presente durante al menos una parte del paso de despolimerización se controla de modo que esté dentro de un intervalo predeterminado.

En variaciones de los métodos que anteceden está presente agua, ajustada o controlada al comienzo del paso de despolimerización; se añade agua durante el paso de despolimerización; el agua presente durante el paso de despolimerización está presente dentro de un intervalo predeterminado (v.g., el intervalo predeterminado es 4-25%, 5-25%, 13-19%, 14-18% p/p frente al Compuesto lntermedio-1); la despolimerización transcurre durante al menos 25 horas (v.g., al menos 3 horas o al menos 4 horas); el paso de despolimerización comprende poner en contacto el copolímero protegido con una solución que comprende fenol, HBr y ácido acético; la concentración de piro-Glu en el acetato de glatiramer purificado es 2-7 ppm (v.g., 25-6 ppm; 25-55 ppm; 3-5 ppm; 35- 45 ppm, 24-65 ppm (,24%-,65% p/p); el PM del acetato de glatiramer purificado es 5-9 Da (v.g., 65-75 Da); la mejora comprende adicionalmente: preparar una composición farmacéutica que comprende al menos una parte del acetato de glatiramer purificado; el paso de tratamiento del producto parcialmente despolimerizado para desproteger las lisinas protegidas con TFA comprende tratar el producto despolimerizado con piperidina; el copolímero protegido se aísla y se seca al menos parcialmente antes de tratar el copolímero protegido para despolimerizar parcialmente el copolímero protegido y desproteger los grupos protegidos con bencilo; el producto parcialmente despolimerizado se aísla y se seca al menos parcialmente antes del paso del tratamiento del producto parcialmente despolimerizado para desproteger las lisinas protegidas con TFA; en algunos casos, el método incluye adicionalmente medir la cantidad de agua en el paso de despolimerización al menos una vez.

Como se utiliza en esta memoria, un "copolímero", "copolímero de aminoácidos" o "preparación de copolímero de aminoácidos" es una mezcla heterogénea de polipéptidos que comprende una pluralidad definida de diferentes aminoácidos (típicamente entre 2-1, v.g. entre 3-6, aminoácidos diferentes). Un copolímero puede prepararse a partir de la polimerización de aminoácidos individuales. El término "aminoácido" no se limita a los aminoácidos existentes... [Seguir leyendo]

1. Un método para preparar una composición que comprende acetato de glatiramer purificado, que comprende: polimerizar N-carboxianhídridos de L-alanina, L-ácido glutámico protegido con bencilo, L-lisina y L-tirosina protegidas con ácido trifluoroacético (TFA) para generar un copolímero protegido (Compuesto lntermedio-1);

tratar el Compuesto lntermedio-1 para despolimerizar parcialmente el copolímero protegido y desproteger los grupos protegidos con bencilo generando con ello un producto parcialmente despolimerizado (Compuesto lntermedio-2); tratar el Compuesto lntermedlo-2 para desproteger las lisinas protegidas con TFA generando con ello acetato de glatiramer; y

purificar el acetato de glatiramer para crear acetato de glatiramer, en donde está presente agua durante al menos una parte del paso de despolimerización, en donde el agua presente durante al menos una parte del paso de despollmerización se controla de modo que esté dentro de un intervalo predeterminado.

2. El método de la reivindicación 1 en el que está presente agua al comienzo del paso de despolimerización.

3. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 en el que se añade agua durante el paso de

despolimerización.

4. El método de la reivindicación 1, en el que el Intervalo predeterminado es 4-25% p/p frente al Compuesto lntermedio-1.

5. El método de la reivindicación 1, en el que el Intervalo predeterminado es 13-19% p/p frente al Compuesto lntermedio-1.

6. El método de la reivindicación 1, en el que el intervalo predeterminado es 14-18% p/p frente al Compuesto lntermedio-1.

7. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-6 en el que la despollmerización transcurre durante al menos 25 horas.

8. El método de la reivindicación 7, en el que la despolimerización transcurre durante al menos 3 horas.

9. El método de la reivindicación 8, en el que la despollmerización transcurre durante al menos 4 horas.

1. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que el paso de despollmerización comprende poner en contacto el copolímero protegido con una solución que comprende fenol, HBry ácido acético.

11. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que la concentración de piroglutamato en el acetato de glatiramer purificado es 2-7 ppm.

12. El método de la reivindicación 11, en el que la concentración de piroglutamato en el acetato de glatiramer purificado es 25-55 ppm.

13. El método de la reivindicación 11, en el que la concentración de piroglutamato en el acetato de glatiramer purificado es 3-5 ppm.

14. El método de la reivindicación 11, en el que la concentración de piroglutamato en el acetato de glatiramer purificado es 35-45 ppm.

15. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-14, en el que el PM del acetato de glatiramer purificado es 5 a 9 Da.

16. El método de la reivindicación 15, en el que el PM del acetato de glatiramer purificado es 65-75 Da.

17. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-16, en el que el Compuesto lntermedlo-1 se aísla y se seca al menos parcialmente antes de tratar el Compuesto lntermedlo-1 para despolimerizar parcialmente el copolímero protegido y desproteger los grupos protegidos con bencilo.

18. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-16, en el que el Compuesto lntermedlo-2 se aísla y se seca al menos parcialmente antes del paso de tratamiento del producto parcialmente despolimerizado para desproteger las Usinas protegidas con TFA.

19. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-16, en el que el paso de tratamiento del producto Compuesto lntermedio-2 para desproteger las Usinas protegidas con TFA comprende tratar el Compuesto lntermedio-2 con piperidina.

2. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-16, que comprende adicionalmente medir la cantidad de agua en el paso de despolimerización al menos una vez.

21. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-2, que comprende adicionalmente: preparar una composición farmacéutica que comprende al menos una porción del acetato de glatiramer purificado.

22. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-21, en el que está presente agua durante el paso de despolimerización en 11,2% p/p frente al Compuesto lntermedio-1.

23. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-22, que comprende despolimerizar el Compuesto

lntermedio-1 durante 43-47 horas a 18-22°C.

24. El método de la reivindicación 1, en el que está presente agua durante la reacción de despolimerización en un nivel que produce acetato de glatiramer purificado con una concentración de piroglutamato de 2-7 ppm y un PM de 5-9 Da.

25. El método de la reivindicación 1, en el que está presente agua durante la reacción de despolimerización

dentro de un intervalo predeterminado que proporciona acetato de glatiramer purificado con una concentración de piroglutamato de 2-7 ppm y un PM de 5-9 Da.

26. El método de la reivindicación 1, en el que el agua presente durante al menos una parte del paso de despolimerización se controla de modo que esté comprendida dentro de un intervalo predeterminado que 15 proporciona acetato de glatiramer purificado con una concentración de piroglutamato de 2-7 ppm y un PM de 5-9 Da.