Análisis de composiciones de copolímeros de aminoácidos.

Un método de selección de un lote de una composición que comprende un copolímero de aminoácidos,

comprendiendo el método:

proporcionar un lote de una composición que comprende un copolímero de aminoácidos; medir la cantidad depiro-glutamato (piro-Glu) en el lote; y seleccionar el lote si la cantidad de piro-Glu en el lote está dentro de unintervalo predeterminado,

seleccionando con ello un lote de una composición que comprende un copolímero de aminoácidos.

Análisis de composiciones de copolímeros de aminoácidos.

ANTECEDENTES

El acetato de glatiramer (conocido también como copolímero-1 y comercializado como el ingrediente activo en COPAXONE® por Teva Pharmaceutical Industries Ltd., Israel) se utiliza en el tratamiento de la forma recurrenteremitente de la esclerosis múltiple (RRMS) . De acuerdo con la etiqueta del producto COPAXONE®, el acetato de glatiramer (GA) está constituido por las sales acetato de polipéptidos sintéticos, que contienen cuatro aminoácidos existentes naturalmente: ácido L-glutámico, L-alanina, L-tirosina y L-lisina con una fracción molar media consignada de 0, 141, 0, 427, 0, 095, y 0, 338, respectivamente. Químicamente, el acetato de glatiramer se designa como polímero de ácido L-glutámico con L-alanina, L-lisina, L-tirosina, acetato (sal) . Su fórmula estructural es:

(Glu, Ala, Lys, Tyr) x•xCH3COOH

(C5H9NO4•C3H7NO2•C6H14N2O2•C9H11NO3) x•xC2H4O2

CAS – 147245-92-9

WO 2006/029393 da a conocer métodos de selección, preparación y análisis de glatiramer.

EP 1.408.066 da a conocer un copolímero de bloques de alta pureza que es apto para ser utilizado como portador después del transporte de una medicina y un método de determinación cuantitativa para impurezas contenidas en el copolímero de bloques.

El artículo por Hartmann et al., Origins of Life, 1984, vol. 1-4, página 213-220, da a conocer una síntesis de péptidos mediada por carbodiimida en solución acuosa.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La invención está basada, al menos en parte, en la identificación y caracterización del ácido L-piroglutámico (piro-Glu) como firma estructural del acetato de glatiramer (GA) . El análisis de este componente firma de GA es útil para evaluar la calidad del producto y el proceso en la fabricación de GA.

Se describe en esta memoria un método de selección de un lote de una composición que comprende un copolímero de aminoácidos (v.g., GA) , comprendiendo el método: proporcionar un lote de una composición que comprende un copolímero de aminoácidos; medir la cantidad de piro-glutamato (piro-Glu) en el lote; y seleccionar el lote si la cantidad de piro-Glu en el lote está dentro de un intervalo predeterminado. En este método, como en los otros métodos descritos en esta memoria, el paso de medición puede emplear cualquier método adecuado, y las unidades utilizadas para expresar la cantidad medida de piro-Glu pueden ser cualesquiera unidades adecuadas (v.g., ppm o porcentaje en moles de cadenas) . En la medida de la cantidad de piro-Glu, es posible, v.g., medir la concentración de piroGlu en una muestra o la cantidad total de piro-Glu en la muestra. Sin embargo, una cantidad de piro-Glu se mide y cualesquiera unidades se utilizan para expresar la cantidad medida, la concentración de piro-Glu en el lote seleccionado está comprendida entre 2000 y 7000 ppm (en algunos casos entre 2500 y 6500 ppm) sobre una base de peso-seco/peso-seco.

Se describe también un método de preparación de una composición farmacéutica que comprende: proporcionar un lote de una composición que comprende un copolímero de aminoácidos, medir la cantidad de piro-Glu en el lote; y preparar una composición farmacéutica que comprende al menos una porción del lote si la cantidad de piro-Glu en el lote está dentro de un intervalo predeterminado como se define en las reivindicaciones. En este caso, asimismo, el paso de medición puede emplear cualquier método adecuado y las unidades utilizadas para expresar la cantidad

medida de piro-Glu pueden ser cualesquiera unidades adecuadas (v.g., ppm o porcentaje en moles de cadenas) . Sin embargo, el piro-Glu se mide y siempre que las unidades se utilicen para expresar la cantidad medida, la concentración de piro-Glu en el lote seleccionado está comprendida entre 2000 y 7000 ppm (en algunos casos entre 2500 y 6500 ppm) ; sobre una base de peso-seco/peso-seco.

Un lote de una composición que comprende un copolímero de aminoácidos puede ser la totalidad o parte del

producto de un proceso de fabricación de copolímeros (v.g., la totalidad o una parte de una sola operación de fabricación) . En algunos casos, se analiza un solo lote. En algunos casos, se analizan dos o más lotes. En algunos casos, se analizan muestras múltiples tomadas de un solo lote. La composición que contiene un copolímero puede ser una sustancia fármaco (DS) (conocida también como un ingrediente farmacéutico activo (API) ) , un producto fármaco (DP) , o un compuesto intermedio de proceso. El copolímero puede ser acetato de glatiramer.

Se describe también un método para preparación de una composición farmacéutica que comprende acetato de glatiramer, que comprende: polimerizar N-carboxianhidrídos de L-alanina, ácido L-glutámico protegido con bencilo, ácido trifluoroacético (TFA) protegido con L-lisina y L-tirosina para generar un copolímero protegido; tratar el copolímero protegido hasta despolimerizar parcialmente el copolímero protegido, desproteger los grupos protegidos con bencilo y desproteger las lisinas protegidas con TFA para generar acetato de glatiramer, y purificar el acetato de glatiramer, que comprende medir la cantidad de piro-glutamato (piro-Glu) en el acetato de glatiramer purificado, comprendiendo adicionalmente: seleccionar el acetato de glatiramer purificado para uso en la preparación de una composición farmacéutica si la cantidad de piro-Glu en el acetato de glatiramer purificado está dentro de un intervalo predeterminado como se define en las reivindicaciones. En algunas realizaciones, la concentración de piro-Glu en el acetato de glatiramer purificado seleccionado es 2000-7000 ppm o 2500-6500 ppm.

Se describe también un método para preparación de una composición farmacéutica que comprende acetato de glatiramer, comprendiendo el método: polimerizar N-carboxi-anhídridos de L-alanina, ácido L-glutámico protegido con bencilo, L-lisina y L-tirosina protegidas con ácido trifluoroacético (TFA) para generar un copolímero protegido; tratar el copolímero protegido para despolimerizar parcialmente el copolímero protegido y desproteger los grupos protegidos con bencilo , desprotegiendo asimismo las lisinas protegidas con TFA para generar acetato de glatiramer; y purificar el acetato de glatiramer, que comprende medir la cantidad de piro-glutamato (piro-Glu) durante o después del paso de polimerización.

Se describe en esta memoria un método para preparar una composición farmacéutica que comprende acetato de glatiramer, comprendiendo el método: polimerizar N-carboxi-anhídridos de L-alanina, ácido L-glutámico protegido con bencilo, L-lisina y L-tirosina protegidas con ácido trifluoroacético (TFA) , para generar un copolímero protegido; tratar el copolímero protegido para despolimerizar parcialmente el copolímero protegido y desproteger los grupos protegidos con bencilo, desprotegiendo además las lisinas protegidas con TFA para generar acetato de glatiramer; y purificar el acetato de glatiramer, que comprende: medir la cantidad de piro-glutamato (piro-Glu) durante o después del paso de despolimerización parcial.

Los métodos mencionados anteriormente para la preparación de una composición farmacéutica comprenden adicionalmente: medir la cantidad de piro-glutamato (piro-Glu) en el acetato de glatiramer purificado; seleccionar el acetato de glatiramer purificado para uso en la preparación de una composición farmacéutica si la cantidad de piro-Glu en el acetato de glatiramer purificado está dentro de un intervalo predeterminado como se define en las reivindicaciones; y preparar una composición farmacéutica que comprende al menos una porción del acetato de glatiramer purificado seleccionado. En diversas realizaciones, la concentración de piro-Glu en el acetato de glatiramer purificado seleccionado es, por ejemplo, 2000-7000 ppm o 2500-6500 ppm.

Se describe también un método para preparación de una composición farmacéutica que comprende acetato de glatiramer, que comprende: polimerizar N-carboxi-anhídridos de L-alanina, ácido L-glutámico protegido con bencilo, L-lisina y L-tirosina protegidas con ácido trifluoroacético (TFA) para generar un copolímero protegido; tratar el copolímero protegido para despolimerizar parcialmente el copolímero protegido y desproteger los grupos protegidos con bencilo y desproteger las lisinas protegidas con TFA para generar acetato de glatiramer; y purificar el acetato de glatiramer, comprendiendo: medir la cantidad de alcohol bencílico durante o después del paso de polimerización, en donde la cantidad de alcohol bencílico está correlacionada con la cantidad de piro-Glu.

Se describe en esta memoria un método... [Seguir leyendo]

1. Un método de selección de un lote de una composición que comprende un copolímero de aminoácidos, comprendiendo el método:

proporcionar un lote de una composición que comprende un copolímero de aminoácidos; medir la cantidad de 5 piro-glutamato (piro-Glu) en el lote; y seleccionar el lote si la cantidad de piro-Glu en el lote está dentro de un intervalo predeterminado,

seleccionando con ello un lote de una composición que comprende un copolímero de aminoácidos.

2. Un método de preparación de una composición farmacéutica que comprende un copolímero de aminoácidos, comprendiendo el método: 10 proporcionar un lote de una composición que comprende un copolímero de aminoácidos; medir la cantidad de piro-Glu en el lote; seleccionar el lote para uso en la preparación de una composición farmacéutica si la cantidad de piro-Glu en el lote está dentro de un intervalo predeterminado; y

preparar una composición farmacéutica que comprende al menos una porción del lote seleccionado, 15 en donde la concentración de piro-Glu en el lote seleccionado es 2000-7000 ppm.

3. Un método de análisis de una composición que comprende acetato de glatiramer respecto a la presencia o cantidad de piro-Glu, comprendiendo el método:

digerir una muestra de la composición con una peptidasa o proteasa para generar productos de digestión,

evaluar la cantidad de piro-Glu en la muestra con relación al estándar de referencia por comparación de los 20 productos de digestión con un estándar de referencia de piro-Glu, y

analizar de este modo una composición que comprende acetato de glatiramer respecto a la presencia o cantidad de piro-Glu.

4. El método de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde el copolímero de aminoácidos es acetato de glatiramer.

5. El método de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, que comprende la medición de piro-Glu en al menos una primera y una segunda muestra del lote.

6. El método de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde el paso de medición de piro-Glu en el lote comprende: digerir una muestra con una peptidasa o una proteasa para generar una muestra digerida;

aislar el piro-Glu presente en la muestra digerida; y determinar la cantidad de piro-Glu aislada.

7. El método de la reivindicación 6, en donde el paso de aislamiento comprende un método cromatográfico.

8. Un método para preparar una composición farmacéutica que comprende acetato de glatiramer, que comprende:

polimerizar N-carboxi-anhídridos de L-alanina, ácido L-glutámico protegido con bencilo, L-lisina y L-tirosina protegidas con ácido trifluoroacético (TFA) para generar un copolímero protegido;

tratar el copolímero protegido para despolimerizar parcialmente el copolímero protegido y desproteger los grupos protegidos con bencilo y desproteger las lisinas protegidas con TFA a fin de generar acetato de glatiramer;

purificar el acetato de glatiramer;

medir la cantidad de piro-glutamato (piro-Glu) en el acetato de glatiramer purificado, y

seleccionar el acetato de glatiramer purificado para uso en la preparación de una composición farmacéutica si la cantidad de piro-Glu en el acetato de glatiramer purificado es 2000-7000 ppm.

9. Un método para preparación de una composición farmacéutica que comprende acetato de glatiramer, que comprende: polimerizar N-carboxi-anhídridos de L-alanina, ácido L-glutámico protegido con bencilo, L-lisina y L-tirosina protegidas con ácido trifluoroacético (TFA) para generar un copolímero protegido;

tratar el copolímero protegido para despolimerizar parcialmente el copolímero protegido y desproteger los grupos protegidos con bencilo y desproteger las lisinas protegidas con TFA a fin de generar acetato de glatiramer;

purificar el acetato de glatiramer; medir la cantidad de piro-glutamato (piro-Glu) durante o después del paso de polimerización; 10 medir la cantidad de piro-glutamato (piro-Glu) en el acetato de glatiramer purificado;

seleccionar el acetato de glatiramer purificado para uso en la preparación de una composición farmacéutica si la cantidad de piro-Glu en el acetato de glatiramer purificado es 2000-7000 ppm; y preparar una composición farmacéutica que comprende al menos una porción del acetato de glatiramer

purificado seleccionado. 15 10. Un método para preparación de una composición farmacéutica que comprende acetato de glatiramer, que comprende:

polimerizar N-carboxi-anhídridos de L-alanina, ácido L-glutámico protegido con bencilo, L-lisina y L-tirosina protegidas con ácido trifluoroacético (TFA) para generar un copolímero protegido; tratar el copolímero protegido para despolimerizar parcialmente el copolímero protegido y desproteger los grupos protegidos con bencilo y desproteger las lisinas protegidas con TFA a fin de generar acetato de glatiramer; purificar el acetato de glatiramer; medir la cantidad de piro-glutamato (piro-Glu) durante o después del paso de despolimerización parcial; medir la cantidad de piro-glutamato (piro-Glu) en el acetato de glatiramer purificado; 25 seleccionar el acetato de glatiramer purificado para uso en la preparación de una composición farmacéutica si la cantidad de piro-Glu en el acetato de glatiramer purificado es 2000-7000 ppm; y preparar una composición farmacéutica que comprende al menos una porción del acetato de glatiramer purificado seleccionado.

11. Un método para preparación de una composición farmacéutica que comprende acetato de glatiramer, que 30 comprende:

polimerizar N-carboxi-anhídridos de L-alanina, ácido L-glutámico protegido con bencilo, L-lisina y L-tirosina protegidas con ácido trifluoroacético (TFA) para generar un copolímero protegido;

tratar el copolímero protegido para despolimerizar parcialmente el copolímero protegido y desproteger los grupos protegidos con bencilo y desproteger las lisinas protegidas con TFA a fin de generar acetato de 35 glatiramer;

purificar el acetato de glatiramer;

medir la cantidad de alcohol bencílico durante o después del paso de polimerización, en donde la cantidad de alcohol bencílico está correlacionada con la cantidad de piro-Glu;

medir la cantidad de piro-glutamato (piro-Glu) en el acetato de glatiramer purificado;

seleccionar el acetato de glatiramer purificado para uso en la preparación de una composición farmacéutica si la cantidad de piro-Glu en el acetato de glatiramer purificado es 2000-7000 ppm; y

preparar una composición farmacéutica que comprende al menos una porción del acetato de glatiramer purificado seleccionado.

12. Un método para preparación de una composición farmacéutica que comprende acetato de glatiramer, que 45 comprende: polimerizar N-carboxi-anhídridos de L-alanina, ácido L-glutámico protegido con bencilo, L-lisina y L-tirosina protegidas con ácido trifluoroacético (TFA) para generar un copolímero protegido;

tratar el copolímero protegido para despolimerizar parcialmente el copolímero protegido y desproteger los grupos protegidos con bencilo y desprotección las lisinas protegidas con TFA a fin de generar acetato de 5 glatiramer;

purificar el acetato de glatiramer;

medir la cantidad de alcohol bencílico durante o después del paso de despolimerización parcial, en donde la cantidad de alcohol bencílico está correlacionada con la cantidad de piro-Glu;

medir la cantidad de piro-glutamato (piro-Glu) en el acetato de glatiramer purificado;

seleccionar el acetato de glatiramer purificado para uso en la preparación de una composición farmacéutica si la cantidad de piro-Glu en el acetato de glatiramer purificado es 2000-7000 ppm; y

preparar una composición farmacéutica que comprende al menos una porción del acetato de glatiramer purificado seleccionado.

FIGURA 3