IL-6 y receptor de IL-6 humanizados.

Ratón modificado genéticamente que comprende un reemplazo en un locus de IL-6 de ratón endógeno de un gen de ratón que codifica para IL-6 con un gen humano que codifica para IL-6 humana,

en el que el gen humano que codifica para IL-6 humana está bajo el control de elementos reguladores de ratón endógenos en el locus de IL-6 de ratón endógeno

IL-6 y receptor de IL-6 humanizados Campo de la invención

Se proporcionan animales no humanos que tienen un reemplazo de los genes de IL-6 y/o receptor de IL-6 animales no humanos endógenos. Se reemplazan los genes de IL-6 y/o receptor de IL-6 del animal no humano, en los loci no humanos endógenos, con genes de IL-6 humano y/o de receptor de IL-6 humanizado que comprenden una secuencia humana. Los animales no humanos que tienen genes de IL-6 humano y/o de receptor de IL-6 humanizado, en los que los animales no humanos no presentan una o más patologías que son características de animales no humanos transgénicos para IL-6 humana.

Antecedentes

Se conocen en la técnica ratones transgénicos para un gen de IL-6 humano. Sin embargo, la inserción al azar de un transgén de IL-6 humano en el genoma del ratón da como resultado una expresión escasamente regulada de la proteína IL-6 humana, que se manifiesta por sí misma en una variedad de patologías en tales ratones transgénicos, incluyendo, pero sin limitarse a, plasmocitosis y glomerulonefritis. Como resultado, estos ratones tienen una utilidad limitada.

Existe la necesidad de animales no humanos, por ejemplo, ratones y ratas, que expresen IL-6 humana o humanizada y/o receptor de IL-6 humano o humanizado. Existe la necesidad de tales ratones humanizados que no presenten una o más patologías presentadas por ratones hlL-6 transgénicos.

Sumario

En un aspecto, la invención proporciona un ratón modificado genéticamente tal como se define en las reivindicaciones.

En otro aspecto, la invención proporciona un método para preparar un ratón humanizado, siendo dicho método tal como se define en las reivindicaciones.

Se describen en el presente documento animales murinos modificados genéticamente que expresan un gen de receptor de IL-6 humano (o un gen que codifica para un ectodominio humano y dominios transmembrana e intracelulares de ratón) bajo el control del promotor murino endógeno y/o elementos reguladores murinos endógenos, a partir de un locus de receptor de IL-6 murino endógeno.

También se describe en el presente documento que se proporciona un animal modificado genéticamente (por ejemplo, un animal murino, por ejemplo, un ratón o una rata) que expresa una proteína IL-6 humana, en el que el animal no humano no presenta una patología seleccionada de plasmocitosis, glomerulonefritis, glomeruloesclerosis, glomerulonefritis mesangio-proliferativa, linfoma intestinal, linfoma renal, esplenomegalia, agrandamiento de ganglios linfáticos, agrandamiento del hígado, megacariocitos en la médula ósea, células plasmáticas anómalas compactadas, infiltración de células plasmáticas en el pulmón o el hígado o el riñón, proliferación de células mesangiales en el riñón, sobreexpresión cerebral de IL-6, células microgliales ramificadas en la materia blanca, astrocitosis reactiva en el cerebro, insuficiencia renal, megacariocitos elevados en el bazo, atrofia muscular progresiva (por ejemplo, atrofia muscular progresiva de los gemelos), catepsinas musculares B y B+L elevadas (por ejemplo, alrededor de 2 veces y 6 veces), y una combinación de los mismos.

Se describe en el presente documento un animal no humano que comprende una población de células B normales, población de células B normales que puede ser aproximadamente la misma en número e inmunofenotipo que un animal de tipo natural, por ejemplo, un ratón de tipo natural.

El animal no humano descrito en el presente documento puede ser murino (por ejemplo, un ratón o una rata) y puede expresar IL-6 humana (hlL-6) en suero a un nivel por debajo de aproximadamente 8 pg/ml, por debajo de aproximadamente 7, 6, 5, 4, 3 ó 2 pg/ml. En una realización específica, el animal murino expresa hlL-6 en suero a un nivel de aproximadamente 5 a aproximadamente no más de 2 pg/ml, en otra realización aproximadamente 75-125 pg/ml, en otra realización a aproximadamente 1 pg/ml.

También se describen en el presente documento animales no humanos que expresan hlL-6 y/o hlL-6R, en los que los animales no humanos expresan hlL-6 y/o hlL-6R a partir de un locus de IL-6 no humano endógeno y/o un locus de hlL-6R no humano endógeno. El animal no humano es murino (por ejemplo, ratón o rata).

También se describe en el presente documento un ratón que comprende una célula que expresa un receptor de IL-6 (IL-6R) que comprende un ectodominio humano sobre la superficie de la célula. La célula puede ser un linfocito, por ejemplo una célula B.

Tal como se describe en el presente documento, pueden delecionarse aproximadamente 6,8 kb en el locus de IL-6 de ratón endógeno, incluyendo los exones 1 a 5 y una secuencia no traducida en 3, y reemplazarse con aproximadamente 4,8 kb de secuencia génica de IL-6 humana que comprende los exones 1 a 5 del gen de IL-6 humano. Un gen de IL-6 humano descrito en el presente documento comprende los exones 1 a 5 del gen de IL-6 humano de BAC CTD-2369M23 humano.

También se describe en el presente documento un ratón modificado genéticamente que expresa IL-6 a partir de un gen de IL-6 humano, en el que el ratón expresa IL-6 humana en su suero.

Se describe en el presente documento suero de ratón que presenta una concentración en suero de IL-6 humana de aproximadamente 25 a aproximadamente 3 pg/ml, de 5 a aproximadamente 25 pg/ml, de 75 a aproximadamente 2 pg/ml o de 1 a aproximadamente 15 pg/ml. También se describen niveles de IL-6 humana en el suero del ratón de aproximadamente 1 pg/ml.

También se describen en el presente documento niveles de un marcador panespecífico de células B en médula ósea del ratón a aproximadamente el mismo que el de un ratón de tipo natural. El nivel de un marcador panespecífico de células B en bazo puede ser aproximadamente el mismo que el de un ratón de tipo natural. Los marcadores panespecíficos de células B descritos en el presente documento incluyen los seleccionados de B22, CD19, CD2, CD22, CD79a, CD79b, L26 y Pax-5 (BSAP).

Se describe en el presente documento un ratón modificado genéticamente que expresa hlL-6, en el que el ratón no presenta una característica seleccionada de plasmocitosis, esplenomegalia, agrandamiento de ganglios linfáticos, células plasmáticas anómalas compactadas, y una combinación de los mismos.

El ratón descrito en el presente documento puede comprender un bazo que tiene aproximadamente el mismo peso (por peso corporal) que un ratón de tipo natural. Los ganglios linfáticos de este ratón pueden tener aproximadamente el mismo peso (por peso corporal) que un ratón de tipo natural. Las células plasmáticas de este ratón pueden no presentar plasmocitosis característica de ratones que sobreexpresan IL-6 humana.

El ratón descrito en el presente documento puede no presentar glomerulonefritis.

El ratón descrito en el presente documento puede no presentar un nivel de células mesangiales comparable a un ratón de tipo natural.

También se describe en el presente documento un ratón modificado genéticamente que expresa hlL-6 a partir de un locus de IL-6 de ratón endógeno, en el que el gen de IL-6 de ratón endógeno se ha reemplazado con un gen de hlL-6, en el que el ratón no presenta una característica seleccionada de una neuropatología detectable morfológicamente, una astrocitosis reactiva, y una combinación de las mismas. El ratón tal como se describe en el presente documento puede comprender un cerebro que es morfológicamente no distinto de un cerebro de ratón de tipo natural. El ratón tal como se describe en el presente documento puede comprender tejido cerebral que presenta un nivel de astrocitosis reactiva que no es superior al de un ratón de tipo natural.

Se describe en el presente documento un ratón que no expresa IL-6 humana en neuronas. Dicho ratón puede comprender niveles de astrocitos activados que son comparables con niveles de astrocitos activados en un ratón de tipo natural.

Se describe en el presente documento un ratón que comprende células microgliales ramificadas en su materia blanca, en el que las células microgliales ramificadas están presentes en una cantidad equivalente a una cantidad de células microgliales ramificadas en un ratón de tipo natural.

Se describe en el presente documento un ratón que no presenta una astrocitosis reactiva. La materia blanca de dicho ratón puede ser morfológicamente no distinta de la materia blanca de un ratón de tipo natural. La materia blanca de dicho ratón puede ser histológicamente no distinta de la materia blanca de un ratón de tipo natural con respecto a la tinción histoquímica de astrocitos reactivos.

Se describe en el presente documento un ratón que comprende un cerebro que es morfológicamente no distinto del... [Seguir leyendo]

1. Ratón modificado genéticamente que comprende un reemplazo en un locus de IL-6 de ratón endógeno de un gen de ratón que codifica para IL-6 con un gen humano que codifica para IL-6 humana, en el que el gen humano que codifica para IL-6 humana está bajo el control de elementos reguladores de ratón endógenos en el locus de IL-6 de ratón endógeno.

2. Ratón modificado genéticamente según la reivindicación 1, en el que el gen humano que codifica para IL-6 humana comprende los exones 1 a 5 del gen de IL-6-humano encontrado en el cromosoma artificial bacteriano CTD- 2369M23.

3. Ratón modificado genéticamente según la reivindicación 1, en el que el ratón expresa un IL-6Rade ratón.

4. Ratón modificado genéticamente según la reivindicación 1, en el que el ratón expresa un IL-6Ra humanizado en el que el gen de IL-6Ra de ratón endógeno se ha reemplazado con una secuencia humana que comprende una secuencia que codifica para un ectodominio de un IL-6R<x humano.

5. Ratón modificado genéticamente según la reivindicación 1, en el que el ratón no presenta una característica seleccionada de plasmocitosis, glomeruloesclerosis, glomerulonefritis, insuficiencia renal, hipergammaglobulinemia, megacariocitos elevados en el bazo, megacariocitos elevados en la médula ósea, esplenomegalia, agrandamiento de ganglios linfáticos, células plasmáticas anómalas compactadas, y una combinación de los mismos.

6. Ratón modificado genéticamente según la reivindicación 4, en el que el IL-6Ra humanizado comprende un ectodominio humano.

7. Ratón modificado genéticamente según la reivindicación 6, en el que el IL-6Ra humanizado comprende un dominio transmembrana de ratón y un dominio citoplasmático de ratón.

8. Ratón modificado genéticamente según la reivindicación 1, en el que el ratón comprende una célula que expresa un IL-6Raque comprende un ectodominio humano sobre la superficie de la célula.

9. Ratón modificado genéticamente, que comprende una humanización de un gen de IL-6R<xde ratón endógeno, en el que la humanización comprende un reemplazo de una secuencia que codifica para ectodominio de IL-6R<x de ratón con una secuencia que codifica para ectodominio de IL-6Ra humano en el locus de IL-6R<xde ratón endógeno, y en el que el gen de IL-6Ra humanizado está bajo el control de elementos reguladores de ratón endógenos.

1. Ratón modificado genéticamente según la reivindicación 9, en el que se reemplaza una secuencia de ratón contigua que comprende los exones de ratón 1 a 8 con un fragmento genómico contiguo de una secuencia de IL- 6Ra humana que codifica para un ectodominio de IL-6Ra humano.

11. Ratón modificado genéticamente según la reivindicación 1, en el que el fragmento genómico contiguo de la secuencia de IL-6Ra humano que codifica para el ectodominio se encuentra en el cromosoma artificial bacteriano CTD-2192J23.

12. Ratón modificado genéticamente según la reivindicación 9, que comprende además un gen de IL-6 humanizado que comprende un reemplazo en un locus de IL-6 de ratón endógeno de un gen de ratón que codifica para IL-6 con un gen humano que codifica para IL-6 humana.

13. Ratón modificado genéticamente según la reivindicación 12, en el que el gen de IL-6 humanizado está bajo el control de elementos reguladores de ratón endógenos.

14. Método para preparar un ratón humanizado, que comprende reemplazar una secuencia génica de ratón que codifica para IL-6 de ratón con un gen humano que codifica para IL-6 humana de modo que el gen de IL-6 humano está bajo el control de elementos reguladores de ratón endógenos.

15. Método para preparar un ratón humanizado, que comprende reemplazar todos los exones de ratón que codifican para secuencias de ectodominio de IL-6Ra de ratón con un fragmento genómico humano que codifica para ectodominio de IL-6Ra humano para formar un gen de IL-6Ra humanizado, en el que el gen de IL-6Ra humanizado está bajo el control de elementos reguladores de ratón endógenos.

16. Ratón modificado genéticamente que comprende un gen de IL-6Ra humanizado que comprende un reemplazo de una secuencia que codifica para ectodominio de ratón con una secuencia de ectodominio humano, en el que el gen de IL-6Rcc humanizado comprende una secuencia transmembrana de ratón y una secuencia citoplasmática de ratón; en el que el ratón comprende además un gen que codifica para una IL-6 humana, en el que los genes que codifican para IL-6 humana e IL-6Ra humanizado están bajo el control de elementos reguladores de ratón

endógenos.

17. Ratón modificado genéticamente según la reivindicación 16, en el que el ratón no expresa un IL-6Ra de ratón y no expresa una IL-6 de ratón.