Formulaciones estables de polipéptidos y usos de las mismas.

Formulación que comprende un portador acuoso que tiene un pH de 5,

5 a 8,0 y un polipéptido que comprende uno o más dominios variables individuales a una concentración de 1 mg/ml a 200 mg/ml, formulándose dicha formulación para su administración a un sujeto humano y comprendiendo dicha formulación además

un tampón a una concentración de 10 mM a 100 mM seleccionado de histidina pH 6,0-6,5,

en la que dicha formulación tiene una concentración de sal inorgánica de 150 mM o menor y en la que el polipéptido se selecciona de una de SEQ ID NO: 1 a 6.

Formulaciones estables de polipéptidos y usos de las mismas Campo de la invención

La presente Invención se refiere a formulaciones de dominios variables individuales. Más específicamente la presente invención proporciona formulaciones que contienen dominios variables individuales con una buena solubilidad y buena estabilidad en diferentes condiciones de almacenamiento y estrés. Las formulaciones de la invención son adecuadas para su administración a sujetos humanos.

La invención se refiere además a recipientes y unidades farmacéuticas que comprenden tales formulaciones y a usos profilácticos y terapéuticos de las formulaciones y unidades farmacéuticas de la invención.

Otros aspectos, realizaciones, ventajas y aplicaciones de la invención resultarán claras a partir de la descripción adicional en el presente documento.

Antecedentes de la técnica

Los nanocuerpos (tal como se describen adicionalmente en el presente documento) se caracterizan por la formación del sitio de unión a antígeno mediante un dominio variable individual, que no requiere interacción con un dominio adicional (por ejemplo en forma de interacción VHA/L) para el reconocimiento del antígeno. Se han descrito nanocuerpos contra una amplia gama de diferentes dianas (documentos WO 4/62551, WO 5/44858, WO 6/4153, WO 6/122825, WO 7/14529, WO 8/279, WO 8/74839, WO 8/71447, WO 8/7484, WO 8/74867, WO 8/77945, WO 8/11985, WO 8/142164, WO 9/68625, WO 8/142165, WO 9/68627) que podrían ser candidatos ideales para el desarrollo de fármacos. Se describen nanocuerpos contra IL-6R que pueden inhibir la interacción IL-6/IL-6R en el documento WO 8/279. Se han descrito nanocuerpos contra la subunidad p19 de IL-23 que bloquean la interacción de IL-23 con su receptor en el documento WO 9/68627. Se describen nanocuerpos contra RANKL que pueden inhibir la formación de osteoclastos en el documento WO 8/142164. Recientemente se ha descubierto el sistema OPG/RANKL/RANK como factores reguladores fundamentales en la patogénesis de enfermedades y trastornos óseos como por ejemplo osteoporosis.

A menudo proteínas tales como anticuerpos y nanocuerpos terapéuticos se transportan y/o se almacenan para un uso posterior. Por tanto, es importante que tales proteínas conserven la estabilidad y la actividad biológica de la proteína en diversas condiciones tales como diferentes regímenes de temperatura y estrés mecánico.

Determinadas preparaciones líquidas de anticuerpos anteriores han mostrado vidas útiles de almacenamiento cortas y pérdida de la actividad biológica de los anticuerpos que resultan de inestabilidades químicas y/o físicas durante el transporte y el almacenamiento. La inestabilidad química puede estar provocada por desamidación, racemización, hidrólisis, oxidación, beta-eliminación o intercambio de disulfuros, y la inestabilidad física puede estar provocada por desnaturalización, agregación, precipitación o adsorción de anticuerpos. Entre éstas, se sabe que la agregación, desamidación y oxidación son las causas más comunes de la degradación de anticuerpos (Cleland et al., 1993, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 1: 37-377). Se sabe poco sobre componentes de formulación farmacéutica que proporcionen formulaciones líquidas estables de nanocuerpos.

Existe una necesidad de formulaciones líquidas estables de nanocuerpos que muestren una buena solubilidad del nanocuerpo y que presenten estabilidad aumentada, niveles de agregación de bajos a indetectables, niveles de degradación de nanocuerpos de bajos a indetectables y muy poca o ninguna pérdida de actividad biológica del nanocuerpo, incluso en diferentes condiciones de transporte y almacenamiento.

Sumario de la invención

La presente invención proporciona formulaciones mejoradas (también denominadas formulación/formulaciones de la invención") de polipéptidos que comprenden uno o más dominios variables individuales que muestran buena solubilidad de los dominios variables individuales y conservan una estabilidad aumentada de los dominios variables individuales en una variedad de diferentes condiciones de transporte, almacenamiento y en uso. La presente invención se basa en el hallazgo de que la presencia en la formulación de determinados tampones puede aumentar la solubilidad, la temperatura de fusión y/o la estabilidad de los dominios variables individuales presentes en la formulación.

La presente invención proporciona datos de solubilidad para formulaciones con polipéptidos que comprenden uno o más dominios variables individuales (también denominados "polipéptido(s) de la invención") hasta 15 mg/ml y mayor. La invención muestra además que tales formulaciones pueden transportarse, manipularse a través de diversos dispositivos de administración y conservar la actividad, pureza y potencia en diferentes condiciones de estrés: condiciones de estrés mecánico; almacenamiento de la formulación a diversas condiciones de estrés tales como diferentes ciclos de congelación/descongelación, a 2-8°C, a 25+5°C y a temperatura elevada.

La formulación de la presente invención comprende un portador acuoso con un pH de 5,5 a 8, y un polipéptido que comprende uno o más dominios variables individuales a una concentración de 1 mg/ml a 2 mg/ml, estando formulada dicha formulación para su administración a un sujeto humano y comprendiendo además dicha formulación:

a) un tampón a una concentración de 1 mM a 1 mM seleccionado de histidina pH 6,-6,5

en la que dicha formulación tiene una concentración de sal inorgánica de 15 mM o menor y en la que el polipéptido se selecciona de uno de SEQ ID NO: 1 a 6.

Los presentes inventores observaron que formulaciones que tienen 15 mM o menos de sal inorgánica muestran una estabilidad mucho mejor de los dominios variables individuales contenidos en la formulación. Sales inorgánicas usadas frecuentemente en formulación farmacéutica son NaCI y KCI. Los dominios variables individuales presentes en formulaciones que contienen 15 mM o menos de sal inorgánica han mostrado un aumento de la estabilidad (por ejemplo menos tendencia a formar agregados, dímeros y/o piroglutamato, o a perder potencia) a diferentes condiciones de almacenamiento con estrés (tal como por ejemplo durante almacenamiento a una temperatura de 37+5°C hasta al menos 2 semanas (preferiblemente al menos 3 semanas, al menos 5 semanas, al menos 8 semanas, al menos 1 semanas, al menos 3 meses, al menos 6 meses, al menos 1 año, 1,5 años o incluso 2 años o más)), una mejora de la temperatura de fusión y/o un aumento de la solubilidad. Preferiblemente, la formulación contiene 1 mM o menos de sal inorgánica, más preferiblemente incluso 5 mM o menos de sal inorgánica. Lo más preferiblemente la formulación no contiene ninguna sal inorgánica.

El polipéptido (también denominado polipéptido de la invención") que comprende uno o más dominios variables individuales para su uso en la formulación de la invención puede ser terapéutico o profiláctico, y puede ser útil en la prevención, el tratamiento y/o la gestión de una o más enfermedades y/o trastornos. En un aspecto específico, el polipéptido tiene al menos dos dominios variables individuales. En otro aspecto específico, el polipéptido tiene al menos tres dominios variables individuales. Los polipéptidos de la invención pueden seleccionarse de SEQ ID NO: 1 a 6.

El polipéptido de la invención está presente en la formulación de la presente invención a una concentración de 1 a 2 mg/ml, preferiblemente de aproximadamente 5 a 1 mg/ml o más, más preferiblemente de aproximadamente 5 a 5 mg/ml o más, lo más preferiblemente de aproximadamente 5 a 3 mg/ml o más, tal como alrededor de 5 mg/ml, alrededor de 1 mg/ml, alrededor de 2 mg/ml, alrededor de 3 mg/ml, alrededor de 4 mg/ml, alrededor de 5 mg/ml, alrededor de 6 mg/ml, alrededor de 7 mg/ml, alrededor de 8 mg/ml, alrededor de 9 mg/ml, alrededor de 1 mg/ml, alrededor de 15 mg/ml o incluso más.

En un aspecto de la invención, la formulación es homogénea. En otro aspecto, la formulación de la invención es estéril. Además del polipéptido de la invención, la formulación de la presente invención comprende al menos un portador acuoso (por ejemplo agua destilada, agua MilliQ o WFI) y un tampón.

El pH de la formulación de la invención debe estar en el intervalo de 5,5 a 8,, preferiblemente el pH es de alrededor de 6, a 7,5, más preferiblemente de alrededor de 6,2 a 7,5 o de alrededor de 6,2 a 7,. Lo más preferiblemente el pH está en el intervalo de 6,5 a 7,, tal como por ejemplo pH 6,5. Estos intervalos de pH han mostrado que proporcionan un aumento de la temperatura de fusión a los polipéptidos presentes en la formulación de la invención.

lampones... [Seguir leyendo]

1. Formulación que comprende un portador acuoso que tiene un pH de 5,5 a 8, y un polipéptido que comprende uno o más dominios variables individuales a una concentración de 1 mg/ml a 2 mg/ml,

formulándose dicha formulación para su administración a un sujeto humano y comprendiendo dicha

formulación además

un tampón a una concentración de 1 mM a 1 mM seleccionado de histidina pH 6,-6,5,

en la que dicha formulación tiene una concentración de sal inorgánica de 15 mM o menor y en la que el

polipéptido se selecciona de una de SEQ ID NO: 1 a 6.

2. Formulación según la reivindicación 1, que no contiene ninguna sal inorgánica.

3. Formulación según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, en la que la concentración de polipéptido es de

a 1 mg/ml, más preferiblemente de 5 a 5 mg/ml, tal como 5 mg/ml, 1 mg/ml, 2 mg/ml, 3 mg/ml, 4 mg/ml, 5 mg/ml, 6 mg/ml, 7 mg/ml, 8 mg/ml, 9 mg/ml, 1 mg/ml o incluso más.

4. Formulación según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que

- el polipéptido tiene una solubilidad de al menos 2 mg/ml, preferiblemente de 5 mg/ml o más, más preferiblemente de 9 mg/ml, tal como se determina mediante el método de exclusión de PEG o mediante un experimento de concentración;

- menos del 1% del polipéptido forma piroglutamato en el ácido glutámico N-terminal durante

almacenamiento a una temperatura de 37+5°C hasta al menos 2 semanas (preferiblemente al menos 3 semanas, al menos 5 semanas, al menos 8 semanas, al menos 1 semanas, al menos 3 meses, al menos

6 meses, al menos 1 año, 1,5 años o incluso 2 años o más), midiéndose el % de piroglutamato mediante RP-HPLC;

- menos del 1% del polipéptido forma dímeros durante almacenamiento a una temperatura de 37+5°C hasta al menos 2 semanas (preferiblemente al menos 3 semanas, al menos 5 semanas, al menos 8 semanas, al menos 1 semanas, al menos 3 meses, al menos 6 meses, al menos 1 año, 1,5 años o incluso 2 años o más), midiéndose el % de dímeros mediante SE-HPLC;

- al menos el 8% de los polipéptidos conservan su actividad de unión a al menos una de sus dianas tras el almacenamiento a 37+5°C hasta al menos 2 semanas (preferiblemente al menos 3 semanas, al menos 5 semanas, al menos 2 meses, al menos 6 meses, al menos 1 año, 1,5 años o Incluso 2 años o más) en comparación con la actividad de unión antes del almacenamiento, midiéndose dicha actividad de unión

mediante ELISA y/o Biacore; y/o

- el polipéptido tiene una razón D32/D28 de ,5 o menor tras estrés mecánico seleccionado de:

o remover la formulación durante de 1 s a 1 min;

o empujar la formulación a través de una aguja (25G, preferiblemente 26G, más preferiblemente 27G, incluso más preferiblemente 28G, lo más preferiblemente 29G o más) con una jeringuilla (la jeringuilla usada puede ser cualquier jeringuilla disponible comercial mente, tal como por ejemplo una jeringuilla de 1 mi, 2 mi, 3 mi, 4 mi, 5 mi, 1 mi, 2 mi, 3 mi, 4 mi hasta 5 mi);

o rotar durante dos días a 1 rpm; y/o

o agitar durante 1 hora a temperatura ambiente y/o 4-48 horas a 4°C a al menos 1 rpm (tal como 5 rpm, 1 rpm o más).

5. Formulación según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que el tampón es un tampón histidina pH 6,5 o histidina pH 6,.

6. Formulación según la reivindicación 5, en la que el tampón histidina tiene una concentración de 1 a

5 mM, más preferiblemente de 1 a 2 mM, tal como 1 mM o 15 mM.

7. Formulación según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, que comprende además un excipiente a una

concentración del 1 % al 2%.

8. Formulación según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la que el excipiente es un sacárido, un

azúcar no reductor y/o poliol.

viral, inmunodeficiencia variable común.