Conglutina gamma como medicamento y suplemento dietético.

Un extracto enriquecido de proteína conglutina γ de semillas de altramuz que tiene un % en peso de conglutina γ

de entre el 10 y el 30 % o una proteína conglutina γ para su uso en el tratamiento de la distrofia muscular

Conglutina ï?§ como medicamento y suplemento dietético Campo de la invención La presente invención se refiere a los efectos de la conglutina ï?§ en la vía IRS/AKT/P70S6k, así como en la activación de las MAP quinasas, CbI, caveolina 3 y GSK3. Se muestra que la conglutina ï?§ regula el metabolismo de la energía muscular, la síntesis de proteínas y la transcripción de genes de la MHC a través de la modulación de los mismos componentes de la señalización de la insulina. Por lo tanto, la conglutina ï?§ se puede usar por vía oral para mejorar la diferenciación de las células musculares o el crecimiento muscular.

Estado de la técnica La semilla del altramuz, una leguminosa comestible de la región mediterránea, es conocida como producto antidiabético en la medicina tradicional. Se encontró que la conglutina ï?§ (Nº de acceso: CAC16394) , una abundante glucoproteína de la semilla del altramuz, era capaz de unirse a la insulina de mamífero con una Kd de aproximadamente 7 x 10-5 M, causando una reducción significativa de la glucosa en plasma cuando se administraba por vía oral tras ensayos de sobrecarga de glucosa en ratas. Por estas razones, la conglutina ï?§ se identificó como la molécula candidata responsable de la actividad biológica reivindicada, y la presente invención examina su mecanismo de acción celular mimético de la insulina. La insulina es la principal hormona responsable del control de la proteosíntesis, a través de la modulación de la vía IRS/AKT/P70S6k/PHAS1, la homeostasis de la glucosa, el transporte de la glucosa estimulante alcanzado, la captación de la glucosa y la síntesis de glucógeno a través de la activación de PKC, flotilina 2, caveolina 3 y CbI, y la hipertrofia muscular a través del control de la transcripción de los genes de la MHC (cadena pesada de la miosina) específica del músculo a través de la vía de las ERK mediada por la insulina.

La conglutina ï?§ de altramuz es una proteína monoglucosilada que consiste en dos subunidades unidas por disulfuro de 30 y 17 kDa. Esta unidad monomérica se somete a la asociación al tetrámero reversible dependiente del pH a valores de pH neutro a ligeramente alcalino (1, 2) . La conglutina ï?§ en su configuración nativa normalmente no es resistente a la proteólisis por tripsina (3) , y otros autores han demostrado recientemente que la conglutina ï?§ se une a la insulina in vitro con una Kd de aproximadamente 7 x 10-5 M y reduce significativamente la glucosa en plasma en los roedores a dosis que varían de 30 a 120 mg/kg de peso corporal (4) . Una vez que la insulina se ha unido a su propio receptor, causa una serie de reacciones de fosforilación/desfosforilación que llevan la señal de la insulina del receptor a las vías metabólicas y mitogénicas finales (Fig. 1) . La solicitud de patente WO2004071521 describe el uso de la conglutina de altramuz para el tratamiento de la diabetes de tipo II. En particular, se desvela que el tratamiento previo de las ratas con conglutina ï?§ de altramuz reduce significativamente el aumento de los niveles de glucosa en plasma inducidos por una administración oral de glucosa de 2 g/kg.

La solicitud de patente WO2005/077400 desvela una mezcla de péptidos ricos en cisteína para la mejora de la homeostasis del tiol. En particular, los péptidos comprenden al menos el 6, 5 % en peso de cisteína, y se pueden producir escindiendo las proteínas de conglutina ï?§ de altramuz en péptidos que después se digieren en péptidos que tienen una cisteína terminal.

En la presente invención, se evaluó el efecto de la conglutina ï?§ en un modelo in vitro de mioblastos murinos, valorando la fosforilación/activación de quinasas intracelulares comunes a la cascada de señalización de la insulina. Los resultados de la presente invención indican que, sorprendentemente, la conglutina ï?§ comparte con la insulina efectos comunes sobre las quinasas intracelulares ensayadas en el presente documento, siendo así un agente mimético de la insulina.

De hecho, en la presente invención se demuestra que, sorprendentemente, la estimulación tanto con insulina como con conglutina ï?§ produjo la activación persistente de quinasas de la vía sintética de proteínas, así como el aumento del transporte de glucosa, la translocación de GLUT4 y la regulación de la transcripción génica específica del músculo dependiente de las ERK. Estos resultados indican que la conglutina ï?§ regula el metabolismo de la energía muscular, la síntesis de proteínas y la transcripción de los genes de la MHC a través de la modulación de los mismos componentes de la señalización de la insulina. En particular, la conglutina ï?§ modula la diferenciación y el crecimiento de las células musculares.

Además, la presente invención muestra cómo la conglutina ï?§ promueve el anabolismo muscular evaluando la modulación de las quinasas intracelulares de la proteína de la semilla de altramuz que participan en la cascada de señalización de la insulina y en el efecto anabólico de la insulina, en un modelo murino in vivo. Por lo tanto, dicha proteína de leguminosa se puede usar como agente terapéutico en muchas patologías como la diabetes y otras afecciones resistentes a la insulina.

Sumario de la invención Por lo tanto, un objeto de la presente invención es un extracto de enriquecido proteína conglutina ï?§ de semillas de altramuz que tiene un % en peso de conglutina ï?§ de entre el 10 y el 30 % o una proteína conglutina ï?§ para su uso en el tratamiento de una distrofia muscular.

Otro objetivo es el uso de un extracto enriquecido de proteína conglutina ï?§ de semillas de altramuz que tiene un % en peso de conglutina ï?§ de entre el 10 y el 30 % o una proteína conglutina ï?§ para la preparación de un medicamento en forma de suplemento dietético para mejorar el rendimiento de resistencia.

Otro objeto es una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un extracto enriquecido de proteína conglutina ï?§ de semillas de altramuz que tiene un % en peso de conglutina ï?§ de entre el 10 y el 30% o una proteína conglutina ï?§, y aditivos y/o diluyentes apropiados para su uso en el tratamiento de una distrofia muscular.

Otro objeto es el uso de una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un extracto enriquecido de proteína conglutina ï?§ de semillas de altramuz que tiene un % en peso de conglutina ï?§ de entre el 10 y el 30 % o una proteína conglutina ï?§, y aditivos y/o diluyentes apropiados como suplemento dietético para mejorar el rendimiento de resistencia. La composición puede ser para la administración oral o cualquier otra forma adecuada.

Otro objeto es una composición de suplemento dietético que comprende una cantidad eficaz de un extracto enriquecido de proteína conglutina ï?§ de semillas de altramuz que tiene un % en peso de conglutina ï?§ de entre el 10 y el 30 % o una proteína conglutina ï?§, y aditivos y/o diluyentes apropiados para su uso en el tratamiento de una distrofia muscular. La composición puede ser para la administración oral o cualquier otra forma adecuada.

El extracto enriquecido de proteína conglutina ï?§ de la semilla de altramuz (en general, del 10 al 30 % en peso de proteínas totales) se prepara de acuerdo con cualquier método conocido por el experto en la materia, tal como de acuerdo con al referencia 25.

Descripción detallada de la invención Leyendas de las figuras La invención se describirá ahora mediante ejemplos no limitantes en referencia a las siguientes figuras:

Figura 1: vías intracelulares de señalización de la insulina. Figura 2: Panel A: patrón de SDS-PAGE en condiciones reductoras de la conglutina ï?§ purificada (línea: 1) en comparación con el extracto total de proteína de altramuz (línea: 2) . Se hicieron visibles dos bandas principales de Mr de aproximadamente 30 y 16-17 kDa. Los tamaños de estas bandas se ajustaron a los de las subunidades de conglutina ï?§ grande y pequeña. Previamente, se encontró una banda menor de 48 kDa correspondiente al precursor de conglutina ï?§ sin escindir [resultados no publicados]. Esta preparación de proteína se consideró suficientemente homogénea para ser adecuada para los ensayos celulares (M = marcadores) . Panel B: la transferencia de proteína con anticuerpos específicos confirmó la identidad de las proteínas y la falta de diferencias aparentes entre la conglutina ï?§ purificada (línea: 1) y la del extracto de proteína total (línea: 2) , lo que sugiere que no se produjo modificación alguna durante el procedimiento de purificación. (M = marcadores) . Figura 3: transferencia representativa del contenido de proteína del sustrato del receptor de insulina 1... [Seguir leyendo]

1. Un extracto enriquecido de proteína conglutina ï?§ de semillas de altramuz que tiene un % en peso de conglutina ï?§

de entre el 10 y el 30 % o una proteína conglutina ï?§ para su uso en el tratamiento de la distrofia muscular. 5

2. Uso de un extracto enriquecido de proteína conglutina ï?§ de semillas de altramuz que tiene un % en peso de conglutina ï?§ de entre el 10 y el 30 % o una proteína conglutina ï?§ en forma de un suplemento dietético para mejorar el rendimiento de resistencia.

3. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz del extracto enriquecido de proteína conglutina ï?§ de semillas de altramuz que tiene un % en peso de conglutina ï?§ de entre el 10 y el 30 % o la proteína conglutina ï?§ de acuerdo con la reivindicación 1, y aditivos y/o diluyentes apropiados para su uso en el tratamiento de una distrofia muscular.

4. El uso de acuerdo con la reivindicación 2, en el que el extracto enriquecido de proteína conglutina ï?§ o la proteína conglutina ï?§ está comprendido en una composición que comprende una cantidad eficaz de dicho extracto enriquecido de proteína conglutina ï?§ o de dicha proteína conglutina ï?§, y aditivos y/o diluyentes apropiados en forma de un suplemento dietético.

5. Una composición de suplemento dietético que comprende una cantidad eficaz del extracto enriquecido de proteína conglutina ï?§ de semillas de altramuz que tiene un % en peso de conglutina ï?§ de entre el 10 y el 30 % o la proteína conglutina ï?§ de acuerdo con la reivindicación 1, y aditivos y/o diluyentes apropiados para su uso en el tratamiento de una distrofia muscular.