Composiciones peptídicas para el tratamiento del cáncer por la inhibición de la actividad del canal de calcio TRPV6.

Péptido aislado que comprende:

a) una secuencia de aminoácidos con una identidad de secuencia de al menos el 90% con la secuencia de aminoácidos **Fórmula**o **Fórmula**o

b) al menos 11 aminoácidos de la secuencia de aminoácidos:

en donde dicho péptido inhibe la actividad del canal de calcio sin actividad paralizante.

Composiciones peptídicas para el tratamiento del cáncer por la inhibición de la actividad del canal de calcio TRPV6

Campo de la invención La invención se refiere a péptidos para ser usados en la reducción de la proliferación celular y el tratamiento del 5 cáncer, incluido el cáncer metastásico.

Antecedentes de la invención Un péptido paralizante de 54 aminoácidos denominado soricidina (nº de acceso del NCBI P0C2C6) se descubrió y aisló de la glándula salival submaxilar de la musaraña colicorta septentrional (Blarina brevicauda) . Una patente anterior sobre el uso de la soricidina para tratar el dolor (patente de los EE. UU. nº 7.119.168 dio a conocer datos que demostraban que este péptido de 54 restos ocasionaba la parálisis e inhibía la captación de calcio en dos líneas celulares de cáncer de ovario (patente de los EE. UU. nº 7.273.850) . Se siguen necesitando antineoplásicos que no tengan actividad paralizante.

Un grupo de canales de iones de calcio implicados en el cáncer son los canales de potencial receptor transitorio (TRP, por su nombre en inglés) que se encuentran en los invertebrados y en los vertebrados. Un miembro de la 15 superfamilia de los TRP recibió su nombre después de descubrirse que se activaba en presencia de vainilloides (la capsaicina de los pimientos picantes, por ejemplo) y se denominó potencial receptor transitorio por vainilloides. Los primeros cuatro receptores que se comprobó que eran de este tipo (TRPV1, TRPV2, TRPV3 y TRPV4) respondían a la capsaicina y también eran responsables de detectar cambios de temperatura. Los otros dos de la subfamilia de los TRPV, TRPV5 y TRPV6, se encontraron predominantemente en los tejidos de tipo epitelial y eran responsables 20 de la entrada de los iones de calcio. Se identificó que TRPV5/6 era responsable de la importación del calcio en los tejidos epiteliales del intestino y, por lo tanto, de la captación del calcio de la dieta. También se demostró que estos canales están presentes en una serie de tejidos distintos en diferentes cantidades, pero en más cantidad en las células epiteliales intestinales, riñón, placenta y páncreas. Se midió la expresión de TRPV6 y resultó muy elevada en los cánceres humanos de ovario, próstata y mama, tumores de tiroides y de colon, y en algunas líneas celulares conocidas de cáncer de próstata. En el cáncer de próstata, el TRPV6 estaba muy inducido en los carcinomas que habían traspasado la pared del tejido y habían comenzado a formar metástasis (Zhuang et al., 2002) . Por lo tanto, el TRPV6 es una posible diana para el tratamiento del cáncer. En consecuencia, hay una enorme necesidad de compuestos que bloqueen la actividad de los canales de TRPV6 sobreabundantes en las células cancerosas.

Más recientemente se ha sugerido que la implicación de TRPV6 en el cáncer activa una vía prosupervivencia/antiapoptósica en dos líneas celulares cancerosas con sobreexpresión de TRPV6. En la línea celular de cáncer de próstata (LnCaP) , la concentración intracelular de calcio, incrementada por la gran cantidad de TRPV6, activa el factor nuclear de los linfocitos T activados (NFAT; Lehen'kyi et al. 2007) . Bolanz et al. (2008) también han demostrado la implicación del NFAT activado por calcio en el cambio de los genes antiapoptósicos en una línea celular del cáncer de mama humano (T 47-D) . Bolanz et al. demostraron que la reducción de la producción de TRPV6 por ARN interferentes parecía aliviar el bloqueo apoptósico. Estos resultados acentúan aún más la necesidad de inhibidores de TRPV6 para el tratamiento del cáncer.

Compendio de la invención Los inventores han sintetizado péptidos aislados que tienen actividad inhibidora del canal de calcio y, en particular, actividad inhibidora del canal de calcio de TRPV6. Los péptidos son útiles para tratar el cáncer, incluido el cáncer 40 metastásico. Sorprendentemente, estos compuestos tienen una identidad de secuencia con una cadena continua de aminoácidos de la soricidina, aunque tienen la actividad inhibidora del canal de calcio sin la actividad paralizante. No había constancia de que la estructura de la soricidina que tenía actividad inhibidora del canal de calcio estuviera separada de la estructura que ocasionaba la actividad paralizante. Los péptidos de la invención tienen, opcionalmente, la mitad de la longitud de la soricidina, o son más pequeños. Los péptidos de la invención también 45 tienen inesperadamente más actividad inhibidora del canal de calcio que la soricidina en algunas células. También se determinó que la actividad inhibidora se incrementaba en algunas células a medida que la longitud de los péptidos disminuía.

Los péptidos de la invención tienen otras propiedades inesperadas en comparación con la soricidina de longitud completa, tal como mayor solubilidad, mayor vida útil y menor capacidad antigénica. En un realización, la invención 50 se refiere a un péptido aislado que comprende toda o parte de la secuencia de aminoácidos (SEQ ID nº 1) , en donde el péptido inhibe la actividad del canal de

calcio y carece de actividad paralizante. El péptido es opcionalmente o . Otro aspecto se refiere a los péptidos de la invención para uso en un procedimiento de inhibición de la captación de calcio en una célula cancerosa, inducir la apoptosis celular y/o prevenir o tratar el cáncer, que comprende administrar a la 55 célula todo o parte de un péptido de la invención, en donde el péptido inhibe la captación de calcio en la célula

cancerosa. El cáncer comprende opcionalmente cáncer de mama, cáncer de ovario, neoplasia hemática, cáncer cerebral, cáncer de retina, cáncer hepático, cáncer de tiroides, cáncer de colon, cáncer de próstata o cáncer de endometrio. Los péptidos de la invención inhiben la actividad del canal de calcio sin actividad paralizante, tal como la actividad del canal de calcio de TRPV6. El cáncer comprende opcionalmente un cáncer metastásico, tal como un cáncer metastásico localizado en un ganglio linfático, tejido pulmonar, tejido renal o tejido hepático.

Otra realización de la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un péptido de la invención y un vehículo. La invención incluye péptidos de la invención para ser usados en la preparación de un medicamento para inhibir los canales de calcio en una célula, inducir la apoptosis de una célula cancerosa y/o el tratamiento del cáncer. La invención también incluye péptidos de la invención para ser usados en la inhibición de los canales de calcio de una célula, la inducción de la apoptosis de una célula cancerosa y/o el tratamiento del cáncer.

Otras características y ventajas de la presente invención serán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada. No obstante, hay que saber que la descripción detallada y los ejemplos específicos, aunque indican realizaciones preferidas de la invención, solo se ofrecen a modo de ilustración, ya que a partir de la descripción detallada resultarán evidentes a los expertos en la técnica diferentes cambios y modificaciones dentro del espíritu y

del alcance de la invención.

Breve descripción de los dibujos Las realizaciones de la invención se describirán en relación con los dibujos, en los que:

En la figura 1 se muestra el cambio promedio neto de la corriente de calcio (ISOC) a través de los canales de TRPV6

en función de la concentración de péptido (panel A) . SorC13 está representado mediante círculos huecos y una línea discontinua. SorC27 está representado mediante cuadrados huecos y una línea continua. Obsérvese que los números positivos indican la inhibición (corriente neta) del flujo de corriente de calcio al interior de la célula. En el panel B se muestra el porcentaje de inhibición máxima de la corriente de calcio (ISOC) a través de los canales de TRPV6 en función de la concentración de péptido. SorC13 está representado por círculos huecos y línea discontinua. SorC27 está representado por cuadrados huecos y una línea continua.

En la figura 2 se muestra el efecto de SorC27 sobre una línea celular de cáncer de ovario (SKOV-3, panel A) y una línea celular de cáncer de mama (MCF 7, panel B) .

En la figura 3 se muestra el efecto de SorC13 sobre una línea celular de cáncer de ovario (SKOV-3, panel A) y una línea celular de cáncer de mama (T 47D, panel B) .

En la figura 4 se muestra una comparación de la inducción de la apoptosis mediante el paclitaxel (10 μM) y SorC13

(10 μM) en las T 47D (panel A) . En el panel B se muestra una comparación del paclitaxel (10 μM) y SorC27 (10 μM) en las MCF 7.

En la figura 5 se muestra una comparación de la proporción tratamiento... [Seguir leyendo]

1. Péptido aislado que comprende: a) una secuencia de aminoácidos con una identidad de secuencia de al menos el 90% con la secuencia de

b) al menos 11 aminoácidos de la secuencia de aminoácidos: en donde dicho péptido inhibe la actividad del canal de calcio sin actividad paralizante.

2. Péptido de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende:

a) la secuencia de aminoácidos b) la secuencia de aminoácidos c) la secuencia de aminoácidos 3. Péptido de acuerdo con la reivindicación 1, que consiste en:

a) la secuencia de aminoácidos b) la secuencia de aminoácidos c) la secuencia de aminoácidos 4. Péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el canal de calcio comprende un canal de calcio de potencial receptor transitorio por vainilloide-6 (TRPV6) .

5. Péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el péptido inhibe la captación de calcio en una célula cancerosa.

6. Péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el péptido induce la apoptosis en 20 una célula cancerosa.

7. Péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para ser usado en tratamientos.

8. Péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para ser usado en el tratamiento del cáncer en un animal que lo necesita.

9. Péptido para ser usado en el tratamiento del cáncer de acuerdo con la reivindicación 8, en donde el cáncer 25 comprende cáncer de mama o cáncer de ovario.

10. Péptido para ser usado en el tratamiento del cáncer de acuerdo con la reivindicación 8, en donde el cáncer comprende cáncer de mama, cáncer de ovario, neoplasia hemática, cáncer cerebral, cáncer de retina, cáncer hepático, cáncer de tiroides, cáncer de colon, cáncer colorrectal, cáncer de próstata, cáncer de endometrio o cáncer de cuello uterino.

11. Péptido para ser usado en el tratamiento del cáncer de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, en donde el cáncer comprende un cáncer metastásico.

12. Péptido para ser usado en el tratamiento del cáncer de acuerdo con la reivindicación 11, en donde el cáncer metastásico está localizado en un ganglio linfático, tejido pulmonar, tejido renal, médula ósea o tejido hepático.

13. Péptido para ser usado en el tratamiento del cáncer de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12, 35 en donde el animal es un humano.

14. Composición farmacéutica, que comprende el péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y un vehículo.

15. Composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 14, que además comprende un segundo agente contra el cáncer.

16. Composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 15, en donde el segundo agente contra el cáncer es un taxol.

17. Composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 15, en donde el segundo agente contra el cáncer es tamoxifeno.

18. Procedimiento para inhibir la captación de calcio en una célula cancerosa in vitro, que comprende administrar

a la célula el péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde el péptido inhibe la captación 5 de calcio en la célula cancerosa.

19. Procedimiento para inducir la apoptosis de una célula cancerosa in vitro, que comprende administrar a la célula el péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde el péptido induce la apoptosis en la célula cancerosa.