Anticuerpos humanizados específicos para el factor von Willebrand.

Un anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo específico para vWF,

en donde el anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo comprende

(a) una secuencia de región variable de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO: 19; y

(b) una secuencia de región variable de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO: 28.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/IB2009/000124.

Solicitante: GLENMARK PHARMACEUTICALS S.A..

Nacionalidad solicitante: Suiza.

Dirección: Chemin de la Combeta, 5 2300 La Chaux-de-Fonds SUIZA.

Inventor/es: LAZARIDES,ELIAS, WOODS,CATHERINE, FAN,XIAOMIN, HOU,SAMUEL, MOTTL,HARALD, BLEIN,STANISLAS, BERTSCHINGER,MARTIN.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A61K39/395 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Anticuerpos (aglutininas A61K 38/36 ); Inmunoglobulinas; Inmunosuero, p. ej. suero antilinfocitario.
  • A61P7/02 A61 […] › A61P ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS O DE PREPARACIONES MEDICINALES.A61P 7/00 Medicamentos para el tratamiento de trastornos de la sangre o del fluido extracelular. › Agentes antitrombóticos; Anticoagulantes; Inhibidores de la agregación plaquetaria.
  • C07K16/36 QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra factores de coagulación sanguínea.
  • C12N15/13 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Inmunoglobulinas.

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Fragmento de la descripción:

Anticuerpos humanizados específicos para el factor von Willebrand

Campo La presente descripción se refiere en general a anticuerpos humanizados o fragmentos de fijación de los mismos específicos para el factor von Willebrand. Más específicamente, la descripción se refiere en general a anticuerpos humanizados o fragmentos de fijación de los mismos específicos para el factor von Willebrand, que incluyen los que comprenden CDRs correspondientes a las CDRs presentes en el anticuerpo murino NMC-4.

Antecedentes La regulación de la adhesión de las plaquetas a sitios de lesión vascular implica una interacción bien orquestada de varias proteínas y juega un papel importante a la vez en la hemostasis y la trombosis. Una proteína de este tipo que contribuye a la adhesión de las plaquetas es el Factor von Willebrand (vWF) , una glicoproteína multímera de gran tamaño presente en el plasma sanguíneo. Se supone que vWF interacciona con el receptor de las plaquetas GPIb-α a través de su dominio A1 promoviendo con ello el enrollamiento y la adhesión de las plaquetas (Moake et al. (1986)

J. Clin. Invest. 78: 1456-61) . Subsiguientemente al enrollamiento y la adhesión de las plaquetas, puede formarse un tapón plaquetas/fibrina que da como resultado la cesación de la hemorragia. Sin embargo, una respuesta excesiva de las plaquetas y/o de la coagulación puede conducir a condiciones trombóticas patológicas. Variantes de moléculas de fijación anti-vWF se describen en WO 2006/046935 que comprenden regiones variables heterómeras optimizadas por injerto de CDR.

Dado que las terapias actuales dirigidas hacia la inhibición de la activación plaquetaria (v.g., GPIIbIIIa, el receptor

ADP, antagonistas de ciclooxigenasa o fosfodiesterasa) o la coagulación (v.g., inhibidores de trombina y factor Xa) están asociadas con complicaciones hemorrágicas, existe necesidad de desarrollar agentes que sean capaces de inhibir sustancialmente la trombosis sin deteriorar significativamente la hemostasis.

Sumario La presente descripción se refiere en general a anticuerpos humanizados o fragmentos de fijación de los mismos específicos para el factor von Willebrand (vWF) humano, métodos para su preparación y uso, que incluyen métodos para tratamiento de enfermedades o trastornos mediados por vWF. Los anticuerpos humanizados o fragmentos de fijación de los mismos específicos para vWF humano pueden comprender regiones determinantes de la complementariedad (CDRs) de un anticuerpo no humano (v.g., CDRs murinas) y regiones marco humanas.

La presente descripción proporciona un anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo específico para vWF que comprende una secuencia de región variable de cadena pesada como se expone en SEQ ID NO: 19 y una secuencia de región variable de cadena ligera como se expone en SEQ ID NO: 28.

La presente descripción proporciona un anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo específico para vWF que comprende una secuencia de cadena pesada como se expone en SEQ ID NO: 237 y una secuencia de cadena ligera como se expone en SEQ ID NO: 238.

La presente descripción proporciona un anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo específico para vWF que comprende (a) regiones determinantes de la complementariedad de cadenas pesada y ligera (CDRs) correspondientes a las CDRs presentes en las regiones variables de cadena pesada y ligera del anticuerpo murino NMC-4 (SEQ ID NO: 1 y 2, respectivamente; y (b) una región marco de cadena pesada correspondiente a la región marco presente en la región variable de anticuerpos humanos derivados de VH 4-59, tales como el anticuerpo

AAC18165.1 (SEQ ID NO: 4) y/o una región marco de cadena ligera correspondiente a la región marco presente en la región variable del anticuerpo humano AAK94808 (VL 018) (SEQ ID NO: 6) .

La presente descripción proporciona un anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo específico para vWF que comprende una o más de las CDRs de cadena pesada siguientes: HCDR1: GFSLTDYGVD (SEQ ID NO: 7) , HCDR2: MIWGDGSTDYNSALKS (SEQ ID NO: 8) y/o HCDR3: DPADYGNYDYALDY (SEQ ID NO: 9) .

La presente descripción proporciona también un anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo específico para vWF que comprende HCDR1: GFSLTDYGVD (SEQ ID NO: 7) , HCDR2: MIWGDGSTDYNSALKS (SEQ ID NO: 8) y HCDR3: DPADYGNYDYALDY (SEQ ID NO: 9) . En algunas realizaciones, el anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo puede comprender además una región marco de cadena pesada de la región variable del anticuerpo humano AAC18165.1 (SEQ ID NO: 4) .

La presente descripción proporciona también un anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo específico para vWF que comprende una o más de las CDRs de cadena ligera siguientes: LCDR1: SASQDINKYLN (SEQ ID NO: 10) , LCDR2: YTSSLHS (SEQ ID NO: 11) y/o LCDR3: QQYEKLPWT (SEQ ID NO: 12) .

La presente descripción proporciona un anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo específico para vWF que comprende las CDRs de cadena ligera siguientes: LCDR1: SASQDINKYLN (SEQ ID NO: 10) , LCDR2:

YTSSLHS (SEQ ID NO: 11) y LCDR3: QQYEKLPWT (SEQ ID NO: 12) . En algunas realizaciones, el anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo puede comprender además una región marco de cadena ligera de la región variable del anticuerpo humano AAK94808 (SEQ ID NO: 6) .

La presente descripción proporciona también un anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo específico para vWF que comprende: CDRs de cadena pesada, HCDR1: GFSLTDYGVD (SEQ ID NO: 7) , HCDR2: MIWGDGSTDYNSALKS (SEQ ID NO: 8) y HCDR3: DPADYGNYDYALDY (SEQ ID NO: 9) ; y CDRs de cadena ligera, LCDR1: SASQDINKYLN (SEQ ID NO: 10) , LCDR2: YTSSLHS (SEQ ID NO: 11) y LCDR3: QQYEKLPWT (SEQ ID NO: 12) . En algunas realizaciones, el anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo puede comprender además una región marco de cadena ligera de la región variable del anticuerpo humano AAK94808

(SEQ ID NO: 6) y/o una región marco de cadena pesada de la región variable del anticuerpo humano AAC18165.1 (SEQ ID NO: 4) .

La presente descripción proporciona un anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo específico para vWF que comprende una o más de las regiones variables de cadena pesada siguientes: H2 (SEQ ID NO: 13) , H4 (SEQ ID NO: 14) , H5 (SEQ ID NO: 15) , H6 (SEQ ID NO: 16) , H7 (SEQ ID NO: 17) , H8 (SEQ ID NO: 18) , H9 (SEQ ID

NO: 19) , H12 (SEQ ID NO: 20) , H13 (SEQ ID NO: 21) , H14 (SEQ ID NO: 22) , H15 (SEQ ID NO: 145) o H16 (SEQ ID NO: 146) .

La presente descripción proporciona un anticuerpo humanizado específico para vWF que comprende una o más de las regiones variables de cadena ligera siguientes: L5 (SEQ ID NO: 23) , L4 (SEQ ID NO: 24) , L6 (SEQ ID NO: 25) , L7 (SEQ ID NO: 26) , L8 (SEQ ID NO: 27) , L9 (SEQ ID NO: 28) , L10 (SEQ ID NO: 29) o L11 (SEQ ID NO: 30) .

La presente descripción proporciona también un anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo específico para vWF que comprende una o más de las regiones variables de cadena pesada siguientes: H2 (SEQ ID NO: 13) , H4 (SEQ ID NO: 14) , H5 (SEQ ID NO: 15) , H6 (SEQ ID NO: 16) , H7 (SEQ ID NO: 17) , H8 (SEQ ID NO: 18) , H9 (SEQ ID NO: 19) , H12 (SEQ ID NO: 20) , H13 (SEQ ID NO: 21) , H14 (SEQ ID NO: 22) , H15 (SEQ ID NO: 145) o H16 (SEQ ID NO: 146) ; y una o más de las regiones variables de cadena ligera siguientes: L5 (SEQ ID NO: 23) , L4 (SEQ

ID NO: 24) , L6 (SEQ ID NO: 25) , L7 (SEQ ID NO: 26) , L8 (SEQ ID NO: 27) , L9 (SEQ ID NO: 28) , L10 (SEQ ID NO: 29) o L11 (SEQ ID NO: 30) .

Por ejemplo, anticuerpos humanizados o fragmentos de fijación de los mismos pueden comprender L5 (SEQ ID NO: 23) y H2 (SEQ ID NO: 13) ; L5 (SEQ ID NO: 23) y H4 (SEQ ID NO: 14) ; L5 (SEQ ID NO: 23) y H5 (SEQ ID NO: 15) ; L5 (SEQ ID NO: 23) y H6 (SEQ ID NO: 16) ; L5 (SEQ ID NO: 23) y H7 (SEQ ID NO: 17) ; L5 (SEQ ID NO: 23) y H8 30 (SEQ ID NO: 18) ; L4 (SEQ ID NO: 24) y H2 (SEQ ID NO: 13) ; L6 (SEQ ID NO: 25) y H2 (SEQ ID NO: 13) ; L11 (SEQ ID NO: 30) y H2 (SEQ ID NO: 13) ; L7 (SEQ ID NO: 26) y H2 (SEQ ID NO: 13) ; L9 (SEQ ID NO: 28) y H9 (SEQ ID NO: 19) ; L8 (SEQ ID NO: 27) y H9 (SEQ ID NO: 19) ; L7 (SEQ ID NO: 26) y H9 (SEQ ID NO: 19) ; L6 (SEQ ID NO: 25) y H9 (SEQ ID NO: 19) ; L4 (SEQ ID NO: 24) y H9 (SEQ ID NO: 19) ; L5 (SEQ ID NO: 23) y H9 (SEQ ID NO: 19) ; L10 (SEQ ID NO:29) y H9 (SEQ ID NO: 19) ; L9 (SEQ ID NO: 28) y H9 (SEQ ID NO:19) ; L9 (SEQ ID NO: 28) y H12

(SEQ ID NO: 20) ; L9 (SEQ ID NO: 28) y H13 (SEQ ID NO: 21) ; L9 (SEQ ID NO: 28) y H14 (SEQ ID NO: 22) ; L11 (SEQ 10 NO: 30) y H9 (SEQ ID NO: 19) ; o L11 (SEQ ID NO: 30) y H14 (SEQ ID NO: 22) .

La... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1.Un anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo específico para vWF, en donde el anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo comprende

(a) una secuencia de región variable de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO: 19; y

(b) una secuencia de región variable de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO: 28.

2.Un anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo específico para vWF, en donde el anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo comprende

(a) una secuencia de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO: 237; y

(b) una secuencia de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO: 238.

3.El anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde el anticuerpo humanizado se fija a vWF con una afinidad (Kd) de 10 nM o menos.

4.El anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde el anticuerpo humanizado compite para fijación a vWF con una afinidad (Ki) de 100 nM o menos.

5.El anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde el anticuerpo humanizado se fija al dominio A1 de vWF con una afinidad (Kd) de 10 nM o menos.

6.El anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde el anticuerpo humanizado compite para fijación al dominio A1 de vWF con una afinidad (Ki) de 100 nM o menos.

7.El anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde el anticuerpo humanizado tiene una temperatura de termoestabilidad del fragmento FAB mayor que 65º C.

8.El anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde el anticuerpo humanizado tiene una temperatura de termoestabilidad del fragmento FAB mayor que el anticuerpo no humanizado paterno.

9.El anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde el anticuerpo humanizado retiene la misma actividad que el anticuerpo no humanizado paterno o que un anticuerpo quimérico que comprende las regiones variables del anticuerpo no humanizado paterno y una región Fc humana.

10.El anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo de la reivindicación 9, en donde la actividad se mide como actividad de aglutinación de las plaquetas inducida por ristocetina.

11.El anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde el anticuerpo humanizado carece de función efectora.

12.El anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde el anticuerpo humanizado comprende una región Fc derivada de IgG4.

13.El anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde el anticuerpo humanizado es específico para el dominio A1 de vWF humano.

14.El anticuerpo humanizado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde el anticuerpo humanizado es un anticuerpo de longitud total.

15.El fragmento de fijación de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde el fragmento de fijación es un fragmento de anticuerpo seleccionado del grupo constituido por Fab, Fab', Fab'-SH, Fv, scFv, F (ab') 2, y un diacuerpo.

16.Un ácido nucleico aislado que codifica el anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo de la reivindicación 2, que comprende la secuencia de ácido nucleico codificante de la cadena ligera del vector GS264 como se ha depositado en un microorganismo con DSMZ que tiene el No. de acceso DSM 21059 y la secuencia de ácido nucleico codificante de la cadena pesada del vector GS265 como se ha depositado en un microorganismo con DSMZ que tiene el No. de acceso DSM 21060.

17.Un ácido nucleico aislado que codifica un anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo específico para vWF que comprende una secuencia de la región variable de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO: 19 y una secuencia de la región variable de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO: 28.

18.Un ácido nucleico aislado que codifica un anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo específico para vWF que comprende una secuencia de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO: 237 y una secuencia de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO: 238.

19.Un vector que comprende el ácido nucleico aislado de una cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18.

20.Una célula hospedadora que comprende el ácido nucleico aislado de una cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18 o el vector de la reivindicación 19.

21.Un método de producción de un anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo que comprende cultivar la célula hospedadora de la reivindicación 20 de tal modo que el ácido nucleico se expresa y se produce el anticuerpo.

22.Una composición que comprende el anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y un portador farmacéuticamente aceptable.

23.Una composición que comprende un primer anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y un segundo anticuerpo que se fija al dominio A1 de vWF.

24.La composición de la reivindicación 23, en donde el segundo anticuerpo es AJW-200.

25.El anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para uso como un medicamento que comprende administrar el anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo en una cantidad terapéuticamente eficaz.

26.El anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para uso en un método para tratar una enfermedad o trastorno mediado por vWF que comprende administrar el anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo en una cantidad terapéuticamente eficaz.

27.El anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo para el uso de la reivindicación 25, en donde el medicamento se utiliza para tratar una enfermedad o trastorno mediado por vWF.

28.El anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo para el uso de la reivindicación 26 ó 27, en donde el trastorno mediado por vWF es una enfermedad o trastorno trombótico.

29.El anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo para el uso de la reivindicación 28, en donde el trastorno trombótico es una enfermedad cardiovascular o enfermedad cerebrovascular tal como ataque isquémico.

30.El anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo para el uso de la reivindicación 29, en donde la enfermedad cardiovascular es ateroesclerosis, restenosis, angina, infarto agudo de miocardio, síndrome coronario agudo o trastornos cardiovasculares asociados con diabetes.

31.El anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo para el uso de la reivindicación 28, en donde la enfermedad trombótica comprende inflamación vascular, trombosis venosa, enfermedad de células falciformes, rechazo de xenoinjerto, trastorno vascular periférico, púrpura trombocitopénica trombótica, fibrosis quística, demencia vascular, enfermedad de Raynaud, artritis reumatoide o diabetes.

32.El anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo para el uso de la reivindicación 29, en donde la enfermedad cerebrovascular es demencia vascular, ataque isquémico, o predicción de ataques recurrentes.

33.El anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 25 a 32, en donde la cantidad terapéuticamente eficaz es suficiente para inhibir la agregación plaquetaria, pero insuficiente para causar signos clínicos significativos de hemorragia.

34.El anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 25 a 32, en donde el anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo se administra en una cantidad terapéuticamente eficaz que oscila desde aproximadamente 1 a aproximadamente 250 veces la DE100 sin causar signos clínicos de hemorragia.

35.El anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 25 a 32, en donde el anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo se administra por vía subcutánea.

36.El anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 25 a 32, en donde el anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo se administra por vía intravenosa.

37.El anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 25 a 32, en donde el anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo se administra por vía intravenosa en combinación con tratamientos radiológicos.

38.Un artículo de fabricación que comprende el anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para uso en un método para el tratamiento de una enfermedad o trastorno mediado por vWF.

39.Un kit que comprende el anticuerpo humanizado o fragmento de fijación del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para uso en un método para el tratamiento de una enfermedad o trastorno mediado por vWF.

Figura 3


 

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