Anticuerpos dirigidos contra la cadena alfa del receptor de la interleucina 3.

Un anticuerpo aislado o recombinante capaz de unirse específicamente a la cadena interleucina (IL) - 3Rα

, en el que el anticuerpo está humanizado y donde el anticuerpo comprende:

(i) una región variable de la cadena ligera (VL) que comprende una secuencia de aminoácidos según la SEC ID Nº 8;

(ii) una región variable de cadena pesada (VH) que comprende una secuencia de aminoácidos según la SEC ID Nº 9; y

(iii) una región constante de cadena pesada que comprende sustituciones de aminoácidos S239D y I332E según el sistema de numeración de la UE de Kabat.

Anticuerpos dirigidos contra la cadena alfa del receptor de la interleucina 3

CAMPO

La presente descripción se refiere a anticuerpos dirigidos contra la cadena alfa del receptor de la interleucina 3 y los usos de los mismos.

ANTECEDENTES

El receptor funcional de la interleucina 3 es un heterodímero que comprende una cadena alfa específica (IL

-3Rα; CD123) y una cadena beta del receptor de la IL - 3 "común" (βc; CD131) que se comparte con los receptores del factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM - CSF) y la interleucina 5 (IL – 5) .

La IL - 3Rα es una proteína transmembrana de tipo I con un peso molecular deducido de 41kDa que contiene un dominio extracelular implicado en la unión de la IL - 3, un dominio transmembrana y una cola citoplásmica corta de 50 aminoácidos. El dominio extracelular se compone de dos regiones: una región N - Terminal de 100 aminoácidos, la secuencia de los cuales muestra similitud con regiones equivalentes del GM - CSF y la IL - 5 de los receptores de cadenas alfa; y una región próxima al dominio transmembrana que contiene cuatro residuos de cisteína conservados y un motivo WSXWS, comunes a otros miembros de esta familia de receptores de citoquinas.

El fragmento de unión a la IL - 3 comprende motivos receptores de citoquinas de 200 residuos aminoácidos (CMRs) compuestos de dos dominios similares a los dominios de plegado de tipo Ig. El dominio extracelular de la IL

-3Rα está altamente glicosilado, con N - glicosilación suficiente para la unión tanto del ligando como de la señalización del receptor.

La IL - 3Rα se expresa ampliamente en todo el sistema hematopoyético incluyendo progenitores hematopoyéticos, mastocitos, células eritroides, megacariocitos, eosinófilos, basófilos, monocitos / macrófagos, neutrófilos y linfocitos B CD5+. Las células no hematopoyéticas tales como células dendríticas plasmacitoides (PDC) , células de Leydig, células endoteliales y células del estroma también expresan la IL – 3Rα.

La IL - 3Rα también es expresada por las células implicadas en ciertos estados de enfermedad incluyendo el síndrome mielodisplásico, leucemia mieloide (por ejemplo, leucemia mieloide aguda (AML) ) , trastornos linfoproliferativos malignos tales como linfoma, las alergias y las enfermedades autoinmunes, como el lupus, el síndrome de Sjögren o la esclerodermia. Por consiguiente, los anticuerpos dirigidos contra la IL - 3Rα son deseables para aplicaciones terapéuticas.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La invención presenta un anticuerpo aislado o recombinante capaz de unirse específicamente a la cadena de interleucina (IL) - 3Rα, en la que el anticuerpo está humanizado y en la que el anticuerpo comprende:

(i) una región variable de cadena ligera (VL) que comprende una secuencia de aminoácidos según la SEC ID Nº : 8;

(ii) una región variable de cadena pesada (VH) que comprende una secuencia de aminoácidos según la SEC ID Nº : 9; y

(iii) una región variable de cadena pesada que comprende sustituciones aminoácidas S239D e I332E según el sistema de numeración de la UE de Kabat.

La invención también presenta una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo de la invención y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

La invención también presenta un ácido nucleico que codifica el anticuerpo de la invención.

La invención también presenta una construcción génica con un ácido nucleico que codifica una cadena pesada del anticuerpo de la invención unido operativamente a un promotor y un ácido nucleico que codifica una cadena ligera del anticuerpo de la invención unido operativamente a un promotor.

La invención también presenta una célula aislada que expresa el anticuerpo de la invención o una célula modificada genéticamente para expresar el anticuerpo de la invención.

La invención también presenta el anticuerpo de la invención o la composición de la invención para su uso en el tratamiento de una enfermedad o afección en un mamífero.

RESUMEN DE LA DIVULGACIÓN [0013] La presente divulgación se basa en la producción del inventor de un anticuerpo humanizado que se une específicamente a la IL - 3Rα. Después de la humanización, el inventor descubrió que la afinidad del anticuerpo para la IL - 3Rα se había reducido. Por consiguiente, el inventor llevó a cabo la maduración de afinidad para mejorar la afinidad del anticuerpo con la IL - 3Rα. Impredecible, el anticuerpo de afinidad madurada incluía mutaciones en las regiones marco (FR) de la región variable de cadena pesada (VH) y la región variable de cadena ligera (VL) , así como en CDR1 de la cadena ligera.

El inventor también produjo formas de este anticuerpo capaces de inducir niveles mejorados de la función efectora.

El inventor también descubrió que una modificación particular para inducir la función efectora mejorada dio como resultado una propiedad deseable adicional, de manera que después de la administración del anticuerpo modificado a un mamífero, el número de células NK del mamífero se redujo inicialmente, sin embargo, luego se expandió a niveles mayores a los presentes antes de la administración. El inventor también ha demostrado que existe una correlación entre el número de células NK y la lisis de las células diana, por ejemplo, las células de leucemia.

La presente divulgación está ampliamente dirigida a una inmunoglobulina basada en un anticuerpo murino capaz de unirse específicamente a una cadena de IL – 3Rα.

En un ejemplo, la presente descripción proporciona una inmunoglobulina aislada o recombinante que se une específicamente a una cadena de IL - 3Rα y que comprende regiones determinantes de complementariedad (CDRs) de una VL que comprende una secuencia descrita en la SEC ID Nº : 8 y CDRs de una VH descrita en la SEC ID Nº : 9.

La presente divulgación presenta, adicional o alternativamente, un anticuerpo aislado o recombinante o un fragmento de unión al antígeno del mismo, el anticuerpo o el fragmento de unión al antígeno capaz de unirse específicamente a la cadena de IL - 3Rα y que comprende CDRs de una VL que comprende una secuencia descrita en la SEC ID Nº : 8 y CDRs de una VH descrita en la SEC ID Nº : 9.

La presente divulgación presenta, adicional o alternativamente, un anticuerpo aislado o recombinante humanizado o un fragmento de unión al antígeno del mismo, el anticuerpo o el fragmento de unión al antígeno capaz de unirse específicamente a la cadena de IL - 3Rα y que comprende CDRs de una VL que comprende una secuencia descrita en la SEC ID Nº : 8 y CDRs de una VH descrita en la SEC ID Nº : 9.

En un ejemplo, la presente divulgación proporciona una inmunoglobulina aislada o recombinante que se une específicamente a una cadena de IL -3Rα y comprende secuencias de aminoácidos según las SECs ID Nº : 2 7, respectivamente.

La presente divulgación proporciona, adicional o alternativamente, un anticuerpo aislado o recombinante o un fragmento de unión al antígeno del mismo, el anticuerpo o el fragmento de unión al antígeno capaz de unirse específicamente a la cadena de IL - 3Rα y que comprende secuencias de aminoácidos según las SECs ID Nº : 2 – 7.

La presente divulgación proporciona, adicional o alternativamente, un anticuerpo aislado o recombinante humanizado o un fragmento de unión al antígeno del mismo, el anticuerpo o el fragmento de unión al antígeno capaz de unirse específicamente a la cadena de IL - 3Rα y que comprende secuencias de aminoácidos según las SECs ID Nº : 2 – 7.

Por ejemplo, la inmunoglobulina o el anticuerpo comprenden:

(i) una región variable de cadena ligera (VL) que comprende las CDRs 1, 2 y 3 como se establece en las SECs ID Nº : 2, 3 y 4, respectivamente; y

(ii) una región variable de cadena pesada (VH) que comprende las CDRs 1, 2 y 3 como se establece en las SECs ID Nº : 5, 6 y 7, respectivamente.

Por ejemplo, la inmunoglobulina o el anticuerpo comprenden:

(i) una VL que comprende:

a) una CDR1 que comprende una secuencia descrita en la SEC ID Nº : 2 (o codificada por una secuencia descrita en la SEC ID Nº : 14) ; b) una CDR2 que comprende una secuencia descrita en la SEC ID Nº : 3 (o codificada por una secuencia descrita en la SEC ID Nº : 15) ; y c) una CDR3 que comprende una secuencia descrita en la SEC ID Nº : 4 (o codificada por una secuencia descrita en la SEC ID Nº : 16) ; y

(ii) una Vh que comprende:... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo aislado o recombinante capaz de unirse específicamente a la cadena interleucina (IL) - 3Rα, en el que el anticuerpo está humanizado y donde el anticuerpo comprende:

(i) una región variable de la cadena ligera (VL) que comprende una secuencia de aminoácidos según la SEC ID Nº 8;

(ii) una región variable de cadena pesada (VH) que comprende una secuencia de aminoácidos según la SEC ID Nº 9; y

(iii) una región constante de cadena pesada que comprende sustituciones de aminoácidos S239D y I332E según el sistema de numeración de la UE de Kabat.

2. El anticuerpo de la reivindicación 1, en el que la región constante de cadena pesada comprende una secuencia descrita en los residuos 121 - 450 de la SEC ID Nº 11.

3. El anticuerpo de la reivindicación 1, en el que el anticuerpo comprende una cadena ligera que comprende una secuencia descrita en la SEC ID Nº 13 y una cadena pesada que comprende una secuencia descrita en la SEC ID Nº 11.

4. El anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que es un anticuerpo desnudo.

5. Una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

6. Un ácido nucleico que codifica el anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

7. Una construcción génica que comprende un ácido nucleico que codifica una cadena pesada del anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 unida operativamente a un promotor y un ácido nucleico que codifica una cadena ligera del anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 unida operativamente a un promotor.

8. Una célula aislada que expresa el anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o una célula genéticamente modificada para expresar el anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

9. 9. La célula de la reivindicación 8 que comprende el ácido nucleico de la reivindicación 6 o la construcción génica de la reivindicación 7.

10. El anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o la composición de la reivindicación 5 para su uso en el tratamiento de una enfermedad o afección en un mamífero.

11. El anticuerpo o composición para su uso según la reivindicación 10, en el que la enfermedad o afección es una enfermedad o afección mediada por IL – 3Rα.

12. El anticuerpo o composición para su uso según la reivindicación 11, en el que la enfermedad o afección es cáncer o una enfermedad autoinmune o inflamatoria.