Anticuerpos anti-activina A y usos de éstos.

Un anticuerpo aislado o fragmento de unión a antígeno de éste,

que comprende:

a. un dominio variable de cadena ligera (VL) que comprende:

i. una secuencia CDR1 de cadena ligera de SEQ ID NO: 11;

ii. una secuencia CDR2 de cadena ligera de SEQ ID NO:12; y

iii. una secuencia CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NO:13; y

b. un dominio variable de cadena pesada (VH) que comprende:

i. una secuencia CDR1 de cadena pesada de SEQ ID NO:62;

ii. una secuencia CDR2 de cadena pesada de SEQ ID NO: 63; y

iii. una secuencia CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NO: 64,

en el que dicho anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de éste se une específicamente a activina A humana.

Anticuerpos anti-activina A y usos de éstos Campo técnico La presente invención se refiere generalmente a dominios de nudo de cisteína de activina A y agentes de unión a antígeno capaces de unirse a activina A o fragmentos de ésta.

Antecedentes de la invención Muchos estados patológicos graves están acompañados de una afección denominada caquexia, que se refiere a la pérdida de masa celular corporal. La masa celular corporal (BCM) consiste en masa muscular, masa visceral y masa de células inmunes. BCM es el componente corporal más activo del cuerpo humano, representando el noventa y cinco por ciento de toda la actividad metabólica. Una pérdida del cinco por ciento en BCM da lugar a morbilidad cambiada, pérdida de fuerza muscular, metabolismo alterado y riesgo incrementado de infección. Una pérdida del cuarenta por ciento puede resultar en la muerte.

Los ejemplos de afecciones en las que la caquexia juega un papel para determinar el resultado de la enfermedad subyacente abarcan un rango de los problemas sanitarios principales actuales. En la caquexia reumatoide, los pacientes con artritis reumatoide (RA) pierden de trece a quince por ciento de BCM. Dos tercios de los pacientes con RA tienen caquexia, y esto resulta en una mortalidad de dos a cinco veces mayor. Otras afecciones relacionadas incluyen obesidad caquética reumatoide y caquexia hipercitocinémica. La caquexia relacionada con el cáncer contribuye significativamente a la morbilidad y mortalidad, afectando también a la capacidad del paciente para tolerar terapias que potencialmente le salvarían la vida.

Loa anticuerpos monoclonales dirigidos a Activina A fueron generados por Rabinovici et al (Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 1992) . El anticuerpo se indujo frente al dímero de Activina A humana, para el que es específico. No se observó detección de monómeros disociados.

La subunidad beta A de inhibina de ovario se usó para inmunizar ratones. Los hibridomas aislados de los ratones inmunizados produjeron anticuerpos IgM e IgG2b. El último mostró unión y reactividad específicas para la subunidad beta A (Groome y Lawrence, Hybridoma, 1991) .

Debido al papel común de activina A en varias enfermedades extendidas, todas las cuales tienen proporciones altas de mortalidad, existe una necesidad largamente anhelada en la técnica para composiciones y métodos para prevenir

o revertir la caquexia relacionada con enfermedades. Dichas composiciones y métodos se proporcionan en la presente memoria.

Resumen breve de la invención La patente objeto se refiere al anticuerpo inventivo o fragmento de unión a antígeno de éste, según la reivindicación independiente 1, y las reivindicaciones dependientes 2 a 12. Además, la patente proporciona una molécula de ácido nucleico aislada según la reivindicación 12, un vector según la reivindicación 13 y 14, una célula aislada según las reivindicaciones 15 y 16, y a composiciones farmacéuticas según las reivindicaciones 17 a 20.

Además, la presente descripción proporciona una proteína de unión a antígeno aislada que comprende bien: a. una CDR3 de cadena ligera que comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en: i. una secuencia CDR3 de cadena ligera que se diferencia en no más de un total de dos adiciones, sustituciones, y/o deleciones de aminoácidos de una secuencia CDR3 seleccionada del grupo que consiste en las secuencias CDR3 de cadena ligera de L1-L14; ii. X73 Q X74 X75 X76 X77 X78 X79 X80 (SEQ ID NO:132) ; iii. L Q H N X81 Y X82 X83 T (SEQ ID NO:131) ; y iv. Q A W D X84 S T X85 X86 ; b. una CDR3 de cadena pesada que comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en: i. una secuencia CDR3 de cadena pesada que se diferencia en no más de un total de tres adiciones, sustituciones, y/o deleciones de aminoácidos de una secuencia CDR3 seleccionada del grupo que consiste en las secuencias CDR3 de cadena pesada de H1-H14; ii. X87 X88 X89 X90 X91 X92 X93 X94 F D Y (SEQ ID NO:187) ; iii. X95 X96 X97 Y X98 D X99 X100 G W X101 X102 X103 (SEQ ID NO:188) ; iv. X104 X105 X106 X107 X108 X109 Y X110 X111 X112 X113 X114X115 X116 X117 X118; o c. la secuencia CDR3 de cadena ligera de (a) y la secuencia CDR3 de cadena pesada de (b) ; en la que X73 es un residuo de metionina, un residuo de glutamina, o un residuo de arginina, X74 es un residuo de alanina, un residuo de tirosina, un residuo de glutamina , o un residuo de serina, X75 es un residuo de leucina, un residuo de tirosina, o un residuo de asparagina, X76 es un residuo de glutamina, un residuo de serina, o un residuo de treonina, X77 es un residuo de treonina, un residuo de tirosina, o un residuo de isoleucina, X78 es un residuo de prolina o un residuo de serina, X79 es un residuo de cisteína, un residuo de triptófano, un residuo de leucina, o un residuo de prolina, X80 es un residuo de serina o un residuo de treonina, X81 es un residuo de treonina o un residuo de serina, X82 es un residuo de prolina o un residuo de treonina, X83 es un residuo de fenilalanina o un residuo de triptófano, X84 es un residuo de arginina o un residuo de serina, X85 es un residuo de valina o un residuo de alanina, X86 es un residuo de valina o ningún residuo, X87 es un residuo de valina o ningún residuo, X88 es un residuo de glutamina o ningún residuo, X89 es un residuo de aspartato, un residuo de triptófano, o ningún residuo, X90 es un residuo de serina, un residuo de leucina, o ningún residuo, X91 es un residuo de isoleucina, un residuo de

glutamato, o un residuo de glutamina, X92 es un residuo de alanina, un residuo de leucina , o un residuo de glicina, X93 es un residuo de alanina o un residuo de leucina, X94 es un residuo de prolina, un residuo de tirosina, o un residuo de glicina, X95 es un residuo de aspartato o ningún residuo, X96 es un residuo de glutamina o ningún residuo, X97 es un residuo de aspartato o un residuo de alanina, X98 es un residuo de de tirosina o un residuo de glicina, X99 es un residuo de serina o un residuo de tirosina, X100 es un residuo de serina o un residuo de arginina, X101 es un residuo de fenilalanina o ningún residuo, X102 es un residuo de glicina o un residuo de aspartato, X103 es un residuo de histidina o un residuo de prolina, X104 es un residuo de glicina o ningún residuo, X105 es un residuo de serina, un residuo de glutamato, o ningún residuo, X106 es un residuo de arginina, un residuo de serina, o ningún residuo, X107 es un residuo de aspartato, un residuo de asparagina, un residuo de serina, o un residuo de glutamina, X108 es un residuo de serina, un residuo de arginina, o un residuo de triptófano, X109 es un residuo de glicina, un residuo de aspartato, un residuo de asparagina, un residuo de tirosina, o un residuo de leucina, X110 es un residuo de serina, un residuo de glicina, un residuo de aspartato, o ningún residuo, X111 es un residuo de serina, un residuo de valina, un residuo de asparagina, o un residuo de tirosina, X112 es un residuo de serina, un residuo de asparagina, un residuo de tirosina, o un residuo de histidina, X113 es un residuo de triptófano, un residuo de tirosina, o un residuo de glutamina, X114 es un residuo de histidina, un residuo de aspartato, un residuo de tirosina, o ningún residuo, X115 es un residuo de fenilalanina, un residuo de alanina, o un residuo de glicina, X116 un residuo de aspartato, un residuo de fenilalanina, un residuo de leucina, o un residuo de metionina, X117 un residuo de tirosina, o un residuo de aspartato, X118 es un residuo de isoleucina, un residuo de valina, o ningún residuo, y la proteína de unión a antígeno se une específicamente a activina A humana.

En otro aspecto, la proteína de unión a antígeno aislada comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en: a. una secuencia CDR1 de cadena ligera que se diferencia en no más de un total de seis adiciones, sustituciones y/o deleciones de aminoácidos de una secuencia CDR1 de L1-L14; b. una secuencia CDR2 de cadena ligera que se diferencia en no más de un total de dos adiciones, sustituciones y/o deleciones de aminoácidos de una secuencia CDR2 de L1-L14; c. una secuencia CDR3 de cadena ligera que se diferencia en no más de un total de tres adiciones, sustituciones y/o deleciones de aminoácidos de una secuencia CDR3 de L1-L14;

d. una secuencia CDR1 de cadena pesada que se diferencia en no más de un total de dos adiciones, sustituciones y/o deleciones de aminoácidos de una secuencia CDR1 de H1-H14; e. una secuencia CDR2 de cadena pesada que se diferencia en no más de un total de cinco adiciones, sustituciones y/o deleciones de aminoácidos de una secuencia CDR2 de H1-H14; y f. una secuencia CDR3 de cadena pesada que se diferencia en no más de un total de cuatro adiciones, sustituciones y/o deleciones de aminoácidos de una secuencia... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo aislado o fragmento de unión a antígeno de éste, que comprende:

a. un dominio variable de cadena ligera (VL) que comprende:

i. una secuencia CDR1 de cadena ligera de SEQ ID NO: 11; 5 ii. una secuencia CDR2 de cadena ligera de SEQ ID NO:12; y

iii. una secuencia CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NO:13; y

b. un dominio variable de cadena pesada (VH) que comprende:

i. una secuencia CDR1 de cadena pesada de SEQ ID NO:62;

ii. una secuencia CDR2 de cadena pesada de SEQ ID NO: 63; y

iii. una secuencia CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NO: 64, en el que dicho anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de éste se une específicamente a activina A humana.

2. El anticuerpo aislado o fragmento de unión a antígeno de éste de la reivindicación 1 que comprende bien:

a. una secuencia de dominio variable de cadena ligera de SEQ ID NO: 9;

b. una secuencia de dominio variable de cadena pesada de SEQ ID NO: 10; o 15 c. el dominio variable de cadena ligera de (a) y el dominio variable de cadena pesada de (b) .

3. El anticuerpo aislado o fragmento de unión a antígeno de éste de la reivindicación 1 que, cuando se une a activina

A:

a. inhibe la activina A;

b. compite de manera cruzada con un anticuerpo de referencia para la unión a activina A; 20 c. se une al mismo epítopo de la activina A que dicho anticuerpo de referencia;

d. se une a la activina A con sustancialmente la misma Kd que dicho anticuerpo de referencia; o

e. se une a la activina A con sustancialmente la misma velocidad de disociación que dicho anticuerpo de referencia;

en el que dicho anticuerpo de referencia comprende una combinación de secuencias de dominio variable de cadena ligera y cadena pesada seleccionada del grupo de combinaciones que consiste en: SEQ ID NOS: 9 y 10.

4. El anticuerpo aislado o fragmento de unión a antígeno de éste de la reivindicación 1 ó 2 que, cuando se une a activina A humana, inhibe la unión de activina A al receptor de activina A humano.

5. El anticuerpo aislado o fragmento de unión a antígeno de éste de la reivindicación 1 ó 2, en el que dicho anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de éste posee al menos una actividad biológica in-vivo seleccionada del grupo que consiste en: atenuación de la caquexia en ratones que portan tumor de colon; mejora la pérdida de peso corporal en ratones que portan tumor de colon; mejora la pérdida de peso corporal en un modelo animal de artritis reumatoide inducida por colágeno; mejora la pérdida de masa muscular en un modelo animal de artritis reumatoide inducida por colágeno; mejora la pérdida de masa grasa en un modelo animal de artritis reumatoide inducida por colágeno; y mejora la pérdida de peso corporal en un modelo animal con transfección de AAV-activina A.

6. El anticuerpo aislado o fragmento de unión a antígeno de éste de la reivindicación 1 ó 2, que comprende un anticuerpo completamente humano aislado que se une específicamente a la región de nudo de cisteína (aminoácidos C11-S33 y/o aminoácidos C81-E111) de activina A, en el que dicho anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de éste posee al menos una actividad biológica in-vivo seleccionada del grupo que consiste en: atenuación de la caquexia en ratones que portan tumor de colon; mejora la pérdida de peso corporal en ratones que portan tumor de colon; mejora la pérdida de peso corporal en un modelo animal de artritis reumatoide inducida por

colágeno; mejora la pérdida de masa muscular en un modelo animal de artritis reumatoide inducida por colágeno; mejora la pérdida de masa grasa en un modelo animal de artritis reumatoide inducida por colágeno; y mejora la pérdida de peso corporal en un modelo animal con transfección de AAV-activina A.

7. El anticuerpo aislado o fragmento de unión a antígeno de éste de la reivindicación 1 ó 2, que comprende un anticuerpo completamente humano aislado que a) se une específicamente a la región de nudo de cisteína (aminoácidos C11-S33 y/o aminoácidos C81-E111) de activina A, en el que dicha proteína de unión a antígeno inhibe la unión de activina A al receptor de activina A in vitro, o b) se une específicamente a la región de nudo de cisteína (aminoácidos C11-S33 y/o aminoácidos C81-E111) de activina A, en el que dicha proteína de unión a antígeno inhibe la unión de activina A al receptor de activina A in vivo, o c) se une específicamente a los aminoácidos K13—Y39 de activina A, en el que dicha proteína de unión a antígeno inhibe la unión de activina A al receptor de activina A in vitro, o d) se une específicamente a los aminoácidos V82—N107 de activina A, en el que dicha proteína de unión a antígeno inhibe la unión de activina A al receptor de activina A in vitro, o e) se une específicamente a los aminoácidos K13-Y39 de activina A, en el que dicha proteína de unión a antígeno inhibe la unión de activina A al receptor de activina A in vivo, o f) se une específicamente a los aminoácidos V82-N107 de activina A, en el que dicha proteína de unión a antígeno inhibe la unión de activina A al receptor de activina A in vivo.

8. El anticuerpo aislado o fragmento de unión a antígeno de éste según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, que comprende además la secuencia constante de cadena ligera kappa de SEQ ID NO: 84, 100 ó 108, y/o la secuencia constante de cadena pesada de SEQ ID NO: 214, 215 ó 221.

9. El anticuerpo aislado o fragmento de unión a antígeno de éste según la reivindicación 8, que comprende la secuencia constante de cadena ligera kappa de SEQ ID NO: 84 y la secuencia constante de cadena pesada de SEQ ID NO: 214.

10. El anticuerpo aislado o fragmento de unión a antígeno de éste según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, que tiene una afinidad de unión (KD) para activina A humana de menos de o igual a 1 x 10-11 M.

11. Un polinucleótido aislado que comprende una secuencia que codifica la cadena ligera, cadena pesada o ambas de un anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno de éste, de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10.

12. Un vector que comprende el polinucleótido según la reivindicación 11.

13. El vector según la reivindicación 12, que se selecciona del grupo que consiste en un plásmido, un vector viral, vectores de mamífero no episomales, vectores de expresión y un vector de expresión recombinante.

14. Una célula aislada que comprende un polinucleótido según la reivindicación 11, o en la que se ha introducido un vector de expresión recombinante según la reivindicación 13.

15. La célula aislada según la reivindicación 14, que es una célula de hibridoma o una célula de Ovario de Hámster Chino (CHO) .

16. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno de éste, de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10.

17. La composición farmacéutica según la reivindicación 16 que comprende además una o más sustancias seleccionadas del grupo que consiste en un tampón, un antioxidante, un polipéptido de bajo peso molecular, una proteína, un aminoácido, un carbohidrato, un agente quelante, un estabilizador, y un excipiente.

18. La composición farmacéutica según la reivindicación 16 ó 17 para uso en medicina.

19. La composición farmacéutica según la reivindicación 18, para uso en el tratamiento de una afección cancerosa.