Antagonistas de neurregulina y uso de los mismos en el tratamiento del cáncer.

Un antagonista de neurregulina 1 (NRG1) y un agente quimioterapéutico para su uso en un método para aumentar el tiempo hasta la recidiva del tumor en un paciente con cáncer,

comprendiendo el método administrar una cantidad eficaz del antagonista de neurregulina 1 y del agente quimioterapéutico al paciente, en donde el agente quimioterapéutico es paclitaxel, cisplatino o una combinación de paclitaxel y cisplatino, y en donde el antagonista de neurregulina 1 es un anticuerpo anti-NRG1, un ARN o una molécula receptora de NRG1 que se une a NRG1

Antagonistas de neurregulina y uso de los mismos en el tratamiento del cáncer Campo de la invención La presente invención se refiere al tratamiento del cáncer con antagonistas de neurregulina.

Antecedentes La identidad y las propiedades de las células madre cancerosas (CSC) han sido un campo de estudio intenso en los recientes años. Se están acumulando evidencias de que los tumores son una mezcla heterogénea de células con diferentes propiedades biológicas. El aislamiento de distintas poblaciones celulares con la capacidad única de iniciar el crecimiento tumoral se ha presentado para numerosas neoplasias hematológicas y tumores sólidos. Sin embargo, han surgido inconsistencias en el uso de marcadores específicos de superficie celular para identificar de forma prospectiva las CSC. Por ejemplo, se ha informado de hallazgos dispares en el fenotipo de células madre para leucemias, cánceres pancreático, colorrectal, cerebral y de mama (Revisado en Brennan y Matsui 2009) . Además, las estimaciones de frecuencia de CSC varían drásticamente entre tipos de pacientes y tumores. El papel de las CSC en el mantenimiento del crecimiento de un tumor establecido o en el reinicio de un tumor después de quimioterapia en un sitio primario o distante, sigue teniendo que determinarse.

Para la mayoría de los pacientes con cáncer, la recaída de la enfermedad después de quimioterapia es una causa principal de mortalidad. Por consiguiente, se necesita una mejor comprensión de las células que reinician el tumor (TRIC) responsables de la recaída para tratar mejor a los pacientes que han experimentado recidiva del cáncer después de responder inicialmente a tratamiento quimioterapéutico. Esto es particularmente relevante para cáncer de pulmón no microcítico (NSCLC) porque más de dos tercios de los pacientes con NSCLC no son candidatos para resección quirúrgica. La mayoría de los pacientes presentan enfermedad avanzada y se tratan con quimioterapia, radiación o una combinación de las dos (principio y práctica en cáncer de pulmón) . Sin embargo, la tasa de supervivencia de 5 años para enfermedad localmente avanzada sigue en el 23, 7 % y en el 3, 5 % para enfermedad avanzada a pesar de buenas respuestas iniciales a la terapia (Homer et al. SEER) .

Las desregulación de la señalización EGFR mediante sobre-expresión o mutaciones activadoras ha demostrado ser un evento frecuente en NSCLC (revisado en Dahabreh et al., 2010) . EGFR es el miembro prototipo de la familia HER de tirosina quinasas, que incluye EGFR (Her1) , Her2, Her3 y Her4. Her2 carece de un dominio de unión a ligando funcional (Graus-Porta 1997) y Her3 carece de actividad tirosina quinasa (Guy 1994) , de modo que estos receptores deben actuar como heterodímeros. Recientes evidencias muestran que otros miembros de la familia Her también pueden desempeñar un papel en NSCLC. Sin embargo, sus contribuciones a la enfermedad están peor caracterizadas y los estudios a menudo se han centrado en sus interacciones con la activación de EGFR (Kuyama et al. 2008, Hirsch 2009, Zhou 2006, Johnson 2006, Ding 2008) .

La neurregulina es un ligando para los receptores tirosina quinasa Her3 y Her4. Existen cuatro miembros conocidos de la familia de neurregulina, NRG1, NRG2, NRG3, y NRG4 (Falls 2003) . El transcrito NRG1 experimenta corte y ayuste alternativo extensivo que produce al menos 15 isoformas diferentes. Todas las isoformas activas comparten un dominio tipo EGF que es necesario y suficiente para la actividad (Holmes 1992, Yarden 1991) . La señalización 45 autocrina de NRG1 ha demostrado regular la proliferación de células epiteliales de pulmón (Jinbo 2002) y desempeñar un papel en el desarrollo de los pulmones humanos (Patel 2000) y se ha implicado en la insensibilidad de NSCLC a inhibidores de EGFR (Zhou 2006) .

Existe la necesidad de proporcionar agentes terapéuticos eficaces en el tratamiento de cánceres resistentes y 50 pacientes que han experimentado una recidiva del cáncer.

Tsai Miaw-Sheue et al., ONCOGENE, 2003, vol, 22, nº 5, páginas 761-768, describen el uso de agonistas de NRG1 para el tratamiento de cáncer de mama. Menendez et al., J. CLIN. ONCOL, ASCO, vol. 24, nº 23, 2006, páginas 3735-3746, describen la inhibición del crecimiento de células tumorales de una línea celular cancerosa de 55 crecimiento primario usando cisplatino y paclitaxel y el efecto de NRG1 antisentido.

Sumario La presente invención proporciona un antagonista de neurregulina 1 (NRG1) y un agente quimioterapéutico para su 60 uso en un método para aumentar el tiempo hasta la recidiva del tumor en un paciente con cáncer, comprendiendo el método administrar una cantidad eficaz del antagonista de neurregulina 1 y agente quimioterapéutico al paciente, donde el agente quimioterapéutico es paclitaxel, cisplatino, o una combinación de paclitaxel y cisplatino, y donde el antagonista de neurregulina 1 es un anticuerpo anti-NRG1, un ARN, o una molécula receptora de NRG1 que se une a NRG1.

El cáncer puede ser cáncer de pulmón no microcítico, cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de cabeza y cuello, cáncer cervical, cáncer de vejiga, cáncer esofágico, cáncer de próstata, o cáncer colorrectal.

La molécula receptora puede ser una inmunoadhesina.

El ARN puede ser ARN antisentido, ARNi, ARNip, ARNhp o un aptámero de ARN

Breve descripción de los dibujos Figura 1. Representación esquemática de un modelo in vivo para estudiar células reiniciadoras de tumor (TRIC) .

Figura 2A. Modelo de xenoinjerto de NSCLC humano Calu3 en ratones desnudos atímicos donde la quimioterapia consistía en paclitaxel y cisplatino. Datos presentados como volumen medio del tumor ± ETM, n=12 ratones/grupo.

Figura 2B. Modelo de xenoinjerto de NSCLC humano H441 en ratones desnudos atímicos don de la quimioterapia consistía en paclitaxel y cisplatino. Datos presentados como volumen medio del tumor ± ETM, n=12 ratones/grupo.

Figura 2C. Modelo de mama humana KPL4 con trasplante ortotópico de células tumorales a la almohadilla de grasa mamaria de ratones SCID/beiz donde la quimioterapia consistía en paclitaxel. Datos presentados como volumen medio del tumor ± ETM, n=12 ratones/grupo.

Figura 2D. Tratamiento de modelo de NSCLC en ratones modificados por ingeniería genética K-rasLSLG12D, CAG-LSL-GFP con cisplatino. Datos presentados como la cantidad promedio de células GFP positivas por pulmón ± ETM, n=6 ratones/grupo.

Figura 3A. Se demostró el enriquecimiento de ARNm de NRG1 en TRIC en el modelo de xenoinjerto Calu3 por dos sondas independientes en un análisis de microserie. El enriquecimiento se validó por PCR cuantitativa a tiempo real (qPCR) para NRG1a y NRG1b usando ARN aislado de muestras de tumor independientes.

Figura 3B. Enriquecimiento de ARNm de NRG1 en TRIC en el modelo de xenoinjerto H441 mostrado por dos diferentes sondas de microserie. Esto se validó por qPCR para NRG1a y NRG1b usando ARN de las mismas muestras tumorales usadas para el análisis de microserie.

Figura 3C. Enriquecimiento de ARNm de NRG1 en TRIC en el modelo de xenoinjerto de cáncer de mama KPL4 mostrado por dos diferentes sondas de microserie.

Figura 3D. Enriquecimiento de ARNm de NRG1 en TRIC en el modelo de NSCLC de ratón K-rasLSLG12D mostrado por una sonda de microserie y validado por qPCR.

Figura 4. El enriquecimiento de NRG1 es específico para células residuales como se evidencia por análisis qPCR de los niveles de ARNm de NRG1 de células tumorales en tumores de diversos tamaños y momentos después de quimioterapia.

Figura 5A. Gráfico que muestra las curvas de crecimiento tumoral para ratones con tumores de xenoinjerto Calu3-shNRG1 establecidos a los que se ha administrado vehículo (sacarosa) o dox (2 gm/l) en su agua para beber ad libitum. El volumen del tumor se midió dos veces a la semana mientras duró el estudio. Datos presentados como ajuste generado por el modelo de efectos mixtos lineales (LME) del volumen del tumor en el gráfico como splines cúbicos con nudos auto-determinados.

Figura 5B. Gráfico que muestra las curvas de crecimiento tumoral para ratones con tumores de xenoinjerto Calu3-shNRG1 establecidos tratados con quimio+sacarosa o quimio+dox. Datos presentados como ajuste generado por el modelo LME del volumen del tumor en el gráfico como splines cúbicos con nudos autodeterminados.

Figura 6A. Gráfico que muestra las curvas de crecimiento tumoral para ratones con tumores de xenoinjerto H441shNRG1 establecidos tratados con sacarosa o dox (n=12 /grupo) . Datos presentados como análisis de ajuste LME del volumen del tumor en el gráfico como splines cúbicos con nudos auto-determinados.

Figura 6B. Gráfico que muestra las curvas... [Seguir leyendo]

1. Un antagonista de neurregulina 1 (NRG1) y un agente quimioterapéutico para su uso en un método para aumentar el tiempo hasta la recidiva del tumor en un paciente con cáncer, comprendiendo el método administrar una cantidad eficaz del antagonista de neurregulina 1 y del agente quimioterapéutico al paciente, en donde el agente quimioterapéutico es paclitaxel, cisplatino o una combinación de paclitaxel y cisplatino, y en donde el antagonista de neurregulina 1 es un anticuerpo anti-NRG1, un ARN o una molécula receptora de NRG1 que se une a NRG1.

2. El antagonista de NRG1 y el agente quimioterapéutico para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el cáncer se selecciona entre el grupo que consiste en cáncer de pulmón no microcítico, cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de cabeza y cuello, cáncer cervical, cáncer de vejiga, cáncer esofágico, cáncer de próstata y cáncer colorrectal.

3. El antagonista de NRG1 y el agente quimioterapéutico para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde 15 la molécula receptora es una inmunoadhesina.

4. El antagonista de NRG1 y el agente quimioterapéutico para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, donde el ARN es ARN antisentido, ARNi, ARNip, ARNhp o un aptámero de ARN.