Vacuna de ADN combinada con un inductor de la apoptosis de células tumorales.

Una composición de vacuna que comprende:

i) un compuesto retinoide que induce diferenciación y apoptosis;

y

ii) un ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica un polipéptido inmunogénico fusionado en marcocon una secuencia que codifica un fragmento C (FrC) de la toxina tetánica;

en un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Vacuna de ADN combinada con un inductor de la apoptosis de células tumorales [0001] La presente invención se refiere a la combinación de una técnica de vacunación de ADN que utiliza un ácido nucleico que codifica un polipéptido inmunogénico, en particular, un antígeno tumoral, con un inductor no inmunosupresor de la apoptosis de células tumorales, útil para el tratamiento del cáncer.

Hasta la fecha, se han identificado muchos antígenos asociados a tumores y se han desarrollado técnicas de vacunación para inducir una respuesta inmune frente a estos antígenos tumorales. Los antígenos proteicos cancerígenos naturales y recombinantes contienen antígenos inmunogénicos definidos a niveles estandarizados y su eficacia depende de encontrar el adyuvante y el sistema de administración correctos. La administración de ADN, p. ej., la inyección directa de los casetes de expresión génica dentro de un huésped vivo, es una técnica novedosa para la vacunación e inmunoterapia. La expresión de los genes administrados puede producir una activación inmune específica de las defensas inmunes del huésped frente al antígeno expresado.

La eficacia de una técnica de vacunación depende de la adquisición de una respuesta inmune que puede ser tanto humoral como citotóxica. Se ha demostrado que las vacunas de ADN cumplen estos requisitos, induciendo potentes y persistentes respuestas inmunes mediadas por células (generación de células T citotóxicas CD8+ y colaboradoras CD4+) y humorales frente al antígeno codificado por el plásmido. La aplicación de este tipo de vacunación a cánceres se realizó por primera vez sobre el LNH-B usando el idiotipo de la inmunoglobulina de superficie como el antígeno frente al que se indujo la respuesta antitumoral (Stevenson, F.K. y col., 1995; Syrengelas, A.D. y col., 1996) . También se observó inmunidad protectora en otros modelos de linfoma y mieloma en ratón. En el documento US 6156316 también se describe el uso de vacunas de ADN en el tratamiento del cáncer. En el documento WO 0178700 y en Stephensen CB y col., 2001, se describe el uso de compuestos retinoides como adyuvante amina.

La leucemia promielocítica aguda (ALP, por sus siglas en inglés) se caracteriza por una translocación t (15, 17) recíproca que fusiona el gen de la leucemia promielocítica (PML, por sus siglas en inglés) con el gen del receptor alfa del ácido retinoico (RARa) y por una parada de la diferenciación mieloide en el estadio promielocítico. En la actualidad, la base del tratamiento habitual en pacientes con APL es la terapia de diferenciación mediada por ácido todo trans retinoico (ATRA) . Sin embargo, a pesar de la prolongación de la supervivencia obtenida con los actuales ensayos clínicos en los que se combina ATRA con quimioterapia, entre el 10% y el 20% de los pacientes sigue presentando recaídas. Por tanto, son necesarias nuevas estrategias terapéuticas para erradicar la enfermedad residual.

Se ha demostrado que los péptidos de unión PML-RARa pueden ser reconocidos específicamente por linfocitos T CD4+ (Dermime, S y col., 1996) . Sin embargo, este método presentaba limitaciones ya que podían generarse una línea de células T o clon no específicos de péptido a partir de las células de pacientes con APL. Este resultado se adscribe a la alteración generalizada del sistema inmune celular ya notificado en pacientes con cáncer. Por este motivo, el mal estado inmunitario de los pacientes con APL se interpreta como un obstáculo principal para las estrategias inmunoterapéuticas frente a la APL.

Los colaboradores inventores desarrollaron previamente ratones transgénicos que expresaban un ADNc de PML-RARa humano que proporciona un modelo animal preciso para la APL humana (Brown, D. y col., 1997) . Los inventores aprovecharon este modelo animal de APL para comprobar la eficacia in vivo de una vacuna basada en el ADN de PML-RARa recientemente desarrollada unida a secuencias del fragmento C (FrC) de la toxina tetánica. Sorprendentemente, sus resultados demuestran que ATRA actúa como un adyuvante para la vacunación con el ADN de PML-RARa-FrC para prolongar la supervivencia. Esto se acompañó de un aumento en el número de células T CD4+ y CD8+; y producción de anticuerpos anti-RARa y de IFNy que sugieren la inducción de respuesta inmunes relevantes. Cuando se administran altas dosis de ATRA, también se detectan anticuerpos dirigidos frente a FrC. Por tanto, es un sujeto especial de la presente invención una composición de vacuna que comprende un ácido nucleico de PML (gen de la leucemia promielocítica) -RARa (gen del receptor alfa del ácido retinoico) - FrC (fragmento C de la toxina tetánica) y ácido todo trans retinoico (ATRA) que induce inmunidad protectora y aumenta la esperanza de vida en un modelo de leucemia promielocítica aguda en animales.

Más en general, estos resultados proporcionan una nueva estrategia dirigida al tratamiento de la APL que puede mejorar el desenlace clínico en la APL humana, combinando una vacunación con ADN con el tratamiento convencional con ATRA.

Además, los inventores encuentran la capacidad del ADN que contiene un gen PML-RARa-FrC para inducir la protección frente a la estimulación alentadora y les llevó a contemplar otras fusiones oncogénicas. Los inventores han mostrado de hecho, por primera vez, que la propiedad adyuvante de la combinación de ATRA y una secuencia de ADN fuertemente inmunogénica pueden ayudar a mantener remisiones clínicas estimulando las respuestas inmunes frente a antígenos tumorales generadas por los pacientes.

Los inventores han mostrado además la capacidad de un ADN que contiene una secuencia inmunogénica no específica unida a una secuencia que codifica un polipéptido que potencia la respuesta inmune, como una secuencia PML-RARaAS-FrC o una secuencia ScFvBCL1-FrC combinada con ATRA, para inducir la protección frente a la estimulación.

Por tanto, la presente invención proporciona una composición de vacuna que comprende i) un compuesto retinoide que induce diferenciación y ii) un ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica un polipéptido inmunogénico, en particular un antígeno tumoral, fusionado en marco con una secuencia que codifica un fragmento C (FrC) de la toxina tetánica en un vehículo farmacéuticamente aceptable. Dicho ácido nucleico comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido inmunogénico se presenta en una cantidad eficaz para suprimir o atenuar el crecimiento tumoral tras la administración a un mamífero, en especial a un ser humano.

La invención se define en las reivindicaciones.

Definiciones [0012] En el contexto de la presente invención, la expresión «ácido nucleico» se refiere a la forma polimérica de éster fosfato de ribonucleósidos («moléculas de ARN») o desoxirribonucleósidos («moléculas de ADN») o cualquier análogo fosfoéster de los mismos, como fosforotioatos y tioésteres, en su forma de cadena sencilla o hélice de doble cadena. El término «ácido nucleico» incluye ADN de cadena doble circular, entre otros, moléculas de ADN en forma lineal o circular (p. ej., fragmentos de restricción) .

La presente invención utiliza ácidos nucleicos (o polinucleótidos) que codifican polipéptidos que confieren inmunidad (en otras palabras, polipéptidos inmunogénicos) , como los antígenos asociados a tumores. A continuación, estos polipéptidos pueden actuar como inmunógenos para inducir una respuesta humoral o celular, o ambas. En el contexto de la invención, el polipéptido inmunogénico puede ser «específico» de una afección, como un antígeno asociado a tumor, o «no específico», como un polipéptido codificado por una secuencia complementaria, por ejemplo, complementaria de un antígeno tumoral, o un polipéptido inmunogénico sin importancia con respecto a la enfermedad. Entre estos polipéptidos inmunogénicos irrelevantes se incluyen, por ejemplo, una proteína ScFv exclusiva de un paciente con linfoma (pScFvBcl1 FrC, King y col., 1998) cuando la enfermedad es leucemia.

Las secuencias polinucleotídicas inmunogénicas y, en particular, las secuencias polinucleotídicas de antígenos tumorales pueden usarse en asociación con otras secuencias polinucleotídicas que codifican proteínas reguladoras que controlan la expresión de la secuencia inmunogénica (antígeno tumoral) . El ácido nucleico según la invención puede contener adicionalmente las secuencias de reconocimiento y promotora. De forma ventajosa, el ácido nucleico es un vector, como un plásmido.

Los ácidos nucleicos utilizados en las composiciones de la invención puede ser materiales «desnudos». Un material de ácido nucleico «desnudo» significa que no contiene ningún vehículo de administración... [Seguir leyendo]

1. Una composición de vacuna que comprende: i) un compuesto retinoide que induce diferenciación y apoptosis; y ii) un ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica un polipéptido inmunogénico fusionado en marco

con una secuencia que codifica un fragmento C (FrC) de la toxina tetánica; en un vehículo farmacéuticamente aceptable.

2. La composición de vacuna según la reivindicación 1, en la que dicho compuesto retinoide que induce diferenciación y apoptosis tiene actividad adyuvante de la repuesta biológica inducida por el ácido nucleico que codifica el polipéptido inmunogénico.

3. La composición de vacuna según la reivindicación 2, en la que dicho compuesto retinoide que induce diferenciación y apoptosis se selecciona entre el grupo compuesto por ácido todo trans retinoico (ATRA) , ácido 9-cis retinoico (AR 9-cis) , N- (4-hidroxifenil) retinamida (4 HPR) y ácido 13-cis retinoico (AR 13 cis) .

4. La composición de vacuna según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que el ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica un polipéptido inmunogénico comprende la secuencia SEQ ID Nº 10 o la SEQ ID Nº 11.

5. La composición de vacuna según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que el polipéptido inmunogénico comprende un antígeno tumoral.

6. La composición de vacuna según la reivindicación 5, en la que la secuencia que codifica el antígeno tumoral es la SEQ ID Nº 1.

7. La composición de vacuna según las reivindicaciones 5 o 6, que comprende un ácido nucleico compuesto por una secuencia SEQ ID Nº 2 o SEQ ID Nº 7.

8. Una composición de vacuna según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para su uso en un método para el tratamiento del cáncer.

9. La composición de vacuna para el uso de la reivindicación 8, en el que el cáncer es leucemia promielocítica aguda.

10. Un kit que comprende:

i) una primera composición farmacéutica que comprende un compuesto retinoide que induce diferenciación y apoptosis; y

ii) una segunda composición farmacéutica que comprende un ácido nucleico compuesto por una secuencia que codifica un polipéptido inmunogénico fusionado en marco con una secuencia que codifica un fragmento C (FrC) de la toxina tetánica.

11. El kit según la reivindicación 10, en el que el polipéptido inmunogénico comprende un antígeno tumoral.

12. El kit según la reivindicación 11, en el que dicho ácido nucleico comprende a) una secuencia que codifica un antígeno PML-RARa y además comprende b) una secuencia del fragmento C (FrC) de la toxina tetánica.

13. El kit según la reivindicación 12, en el que la secuencia a) que codifica el antígeno PML-RARa es la SEQ ID Nº 1.

14. El kit según la reivindicación 12 o 13, que comprende la secuencia SEQ ID Nº 2 o la SEQ ID Nº 7.

15. El kit según la reivindicación 10, en el que el ácido nucleico comprende la secuencia SEQ ID Nº 10 o

SEQ ID Nº 11.

16. El kit según una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 15, en el que dicho compuesto no retinoide que induce diferenciación y apoptosis tiene actividad adyuvante de la repuesta biológica inducida por el ácido nucleico que codifica el antígeno inmunogénico.

17. La composición de vacuna según una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 16, en la que el compuesto retinoide que induce diferenciación y apoptosis se selecciona entre el grupo compuesto por acido todo trans retinoico (ATRA) , ácido 9-cis retinoico (AR 9-cis) , N- (4-hidroxifenil) retinamida (4 HPR) y ácido 13-cis retinoico (AR 13 cis) .

18. El kit según una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 17, en el que se pretende administrar dicho compuesto retinoide que induce diferenciación y apoptosis y dicho ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica un polipéptido inmunogénicos secuencialmente.

19. Una combinación de:

- una composición i) que comprende un compuesto retinoide que induce diferenciación y apoptosis; y

- una composición ii) que comprende un ácido nucleico compuesto por una secuencia que codifica un polipéptido inmunogénico fusionado en marco con una secuencia que codifica un fragmento C (FrC) de la toxina tetánica;

para su uso simultáneo o secuencial en un procedimiento para el tratamiento del cáncer.

20. La combinación para su uso según la reivindicación 19, en la que dicha composición ii) comprende un ácido nucleico que codifica un antígeno tumoral.

21. La combinación para su uso según la reivindicación 20, en la que dicho ácido nucleico que codifica un antígeno tumoral comprende a) una secuencia que codifica un antígeno PML-RARa y además comprende b) una secuencia del fragmento C (FrC) de la toxina tetánica.

22. La combinación para su uso según la reivindicación 21, en la que la secuencia a) que codifica el antígeno PML-RARa es la SEQ ID Nº 1.

23. La combinación para su uso según la reivindicación 21 o 22, que comprende la secuencia SEQ ID Nº 2 o la SEQ ID Nº 7.

24. La combinación para su uso según la reivindicación 19, en la que dicha composición (ii) comprende una secuencia SED ID Nº 10 o SEQ ID Nº 11.

25. La combinación para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 19 a 24, en el que el compuesto retinoide tiene actividad adyuvante en la respuesta biológica inducida por el ácido nucleico que codifica el polipéptido inmunogénico.

26. La combinación para su uso según la reivindicación 25, en la que el compuesto retinoide que induce diferenciación y apoptosis se selecciona entre el grupo compuesto por ácido todo trans retinoico (ATRA) , AR 9-cis, 4 HPPR y AR 13-cis.

27. La combinación para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 19 a 26, en la que el cáncer es leucemia promielocítica aguda.

28. La combinación para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 19 a 27, en la que dicho uso es un uso secuencial de dichas composiciones i) y ii) en el tratamiento del cáncer.

29. La combinación para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 19 a 27, en la que dicho uso es un uso simultáneo de dichas composiciones i) y ii) en un procedimiento para el tratamiento del cáncer.