Usos de anticuerpos anti-CD40.

Un anticuerpo anti-CD40 para el uso en el tratamiento de cáncer o condición premaligna que está asociado concélulas que expresan tanto CD40 como CD20 en un paciente humano refractario al tratamiento con rituximab(Rituxan ®),

en el que dicho paciente humano tiene un cáncer o enfermedad pre-maligna tratable con un anticuerpoanti-CD40 identificado mediante un método que incluye:

a) la identificación de un paciente humano con un cáncer o condición premaligna que está asociado con las célulasque expresan CD40 y que es refractario al tratamiento con rituximab (Rituxan ®); y

b) la determinación del genotipo Fc-RIIIa-158 de dicho paciente humano (V/V, V/F o F/F) utilizando una muestrabiológica obtenida del paciente humano;

en el que dicho cáncer o condición premaligna es tratable con un anticuerpo anti-CD40 si dicho paciente humano eshomocigoto o heterocigoto para Fc-RIIIa-158F (genotipo V/F o F/F).

Usos de anticuerpos anti-CD40

Esta invención se refiere a nuevos usos de los anticuerpos anti-CD40, en particular en el tratamiento de cánceres y condiciones premalignas que están asociadas con las células expresoras de CD40.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Muchos miembros de la familia de ligandos del factor de necrosis tumoral (TNF) y sus receptores correspondientes regulan el crecimiento de las células normales por la inducción de la apoptosis o por la mejora de la supervivencia celular y la proliferación. Es este equilibrio entre las señales apoptóticas y de supervivencia y las señales de proliferación la que mantiene la homeostasis celular normal. Al menos 26 receptores de la familia de TNF y 18 ligandos de la familia del TNF se han identificado hasta la fecha. Las formas biológicamente activas de receptores y ligandos son trímeros de proteína auto-ensamblados. Se han identificado formas de transmembrana y solubles tanto de los receptores como de los ligandos. Aunque los dominios intracelulares de los receptores no comparten homología de secuencia, sus dominios extracelulares comprenden 40 repeticiones de amino-ácidos, ricas en cisteína. Sus colas citoplasmáticas señalan mediante la interacción con dos grupos importantes de las proteínas intracelulares: factores asociados al receptor TNF (TRAF) y dominio de muerte (DD) que contienen proteínas. La interacción entre al menos seis TRAFs y centros de unión TRAF humanos en la cola citoplásmica de algunos de estos receptores inicia varias vías de señalización, incluyendo AKT (la serina/treonina quinasa conocida como proteína quinasa B o PKB) , factor nuclear- KB (NF -KB) , y proteínas quinasas activadas por mitógeno (MAPK) . Véase, por ejemplo, la revisión de Younes y Kadin (2003) J. Clin. Oncol. 18:3526-3534.

El miembro receptor de la familia de TNF CD40 es un antígeno 50-55 kDa de superficie celular presente en la superficie tanto de células B normales y neoplásicas humanas, células dendríticas, monocitos, macrófagos, li células T CD8+, células endoteliales, células monocíticas y epiteliales, y muchos tumores sólidos, incluyendo cáncer de pulmón, de mama, de ovario, de vejiga urinaria, y de colon. La unión del ligando CD40 (CD40L) al antígeno CD40 en la membrana de la célula B proporciona una señal coestimuladora positiva que estimula la activación y la proliferación de las células B, lo que resulta en la maduración de células B en una célula plasmática que secreta altos niveles de inmunoglobulina soluble. El CD40 activa TRAF-2, -3, -5, y -6, que sobreregula diversas vías de señalización tras la unión de CD40 con CD40L (ya sea CD40L unión de membrana o CD40L soluble) , incluyendo la quinasa extracelular regulada por señal (ERK) , quinasa amino terminal c, -jun (JNK) , p38 proteína quinasa activada por mitógeno (MAPK) , AKT, y NF-KB (véase, por ejemplo, Younes y Carbone (1999) Int. J.Biol. Markers 14:135-143; van Kooten y Banchereau (2000) J. Leukoc. Biol. 67:2-17) .

Las células B malignas de tipos de tumores de linaje de células B expresan CD40 y parecen depender de la señalización de CD40 para la supervivencia y proliferación. Las células transformadas de pacientes con bajo y alto grado de linfomas de células B, leucemia linfoblástica aguda de células B, mieloma múltiple, leucemia linfocítica crónica, macroglobulinemia de Walsdenstrom y enfermedad de Hodgkin expresan CD40. La expresión de CD40 también se detecta en la leucemia mieloblástica aguda y el 50% de los linfomas relacionados con el SIDA.

Varios carcinomas y sarcomas también exhiben altos niveles de expresión de CD40, aunque el papel de la señalización de CD40 en estas células cancerosas es menos conocida. El CD40 que expresan los carcinomas incluyen el carcinoma de vejiga urinaria (Paulie. et al. (1989) J. Immunol. 142:590-595; Braesch-Andersen et al. (1989) J. Immunol. 142:562-567) , carcinoma de mama (Hirano et al. (1999) Blood 93:2999-3007; Wingett y col. (1998) Breast Cancer Res. Treat. 50:27-36) ; cáncer de próstata (Rokhlin et al. (1997) Cáncer Res. 57:1758-1768) , Carcinoma de células renales (Kluth et al. (1997) Cancer Res. 57:891-899) , carcinoma indiferenciado nasofaríngeo (UNPC) (Agathanggelou et al. (1995) Am. J. Pathol. 147:1152-1160) , Carcinoma de células escamosas (SCC) (Amo et al. (2000) Eur.. J. Dermatol. 10:438-442; Posner et al. (1999) Clin. Cancer Res. 5:2261-2270) , carcinoma papilar de tiroides (Smith et al. (1999) 9:749-755 tiroides) , melanoma maligno cutáneo (van den Oord et al. (1996) Am. J. Pathol. 149:1953-1961) , carcinoma gástrico (Yamaguchi et al. (2003) Int. J. Oncol. 23 (6) :1697-702) , y carcinoma de hígado (ver, por ejemplo, Sugimoto et al. (1999) Hepatología 30 (4) :920-26, Discutiendo el carcinoma hepatocelular humano) . Para sarcomas que expresan CD40, véase, por ejemplo, Lollini et al. (1998) Clin. Cancer Res. 4 (8) :1843849, discutiendo el osteosarcoma humano y el sarcoma de Ewing.

La señalización de CD40 protege las células B inmaduras y los linfomas de células B de la apoptosis inducida por Fas o IgM (véase, por ejemplo, Wang et al. (1995) J. Immunol. 155:3722-3725) . Las células del linfoma de células de manto expresan un alto nivel de CD40, y la adición del ligando exógena CD40 ha demostrado mejorar su supervivencia y el rescate de la apoptosis inducida por fludarabina (Clodi et al. (1998) Brit. J. Haematol. 103:217219) . El papel de la señalización de CD40 en la supervivencia y proliferación de células B malignas hace que el antígeno CD40 sea una diana potencial para la terapia contra el cáncer. De hecho, los antagonistas de los anticuerpos anti-CD40 inhiben la proliferación y/o diferenciación de células B humanas malignas in vitro (Véase, por ejemplo, Solicitud de Publicación de Patente U.S. Nº. 20040109857) . Otros modelos murinos de linfomas humanos agresivos han demostrado la eficacia in vivo de los anticuerpos anti-CD40 en el aumento de la supervivencia animal.

Véase, por ejemplo, Funakoshi et al. (1994) Blood 83:2787-2794; Tutt et al. (1998) J. Immunol. 161:3176-3185; y Szocinski et al. (2002) Blood 100: 217-223.

El ligando CD40 (CD40L) , también conocido como CD154, es una proteína de transmembrana 32-33 kDa que también existe en dos formas solubles biológicamente activas más pequeñas, 18 kDa y 31 kDa, respectivamente (Graf et al. (1995) Eur.. J. Immunol. 25:1749-1754; Mazzei et al. (1995) J. Biol.. Chem. 270:70257028; Pietravalle et al. (1996) J. Biol.. Chem. 271:5965-5967) . CD40L se expresa en Células T CD4+ auxiliares activadas, pero no en reposo (Lane et al. (1992) Eur.. J. Immunol. 22:2573-2578; Spriggs et al. (1992) J. Exp.. Med. 176:1543-1550; y Roy et al. (1993) J. Immunol. 151:1-14) .Tanto CD40 como CD40L se han clonado y caracterizado (Stamenkovi et al. (1989) EMBO J. 8:1403-1410; Armitage et al. (1992) Nature 357:80-82; Lederman et al. (1992) J. Exp.. Med. 175:1091-1101; y Hollenbaugh et al. (1992) EMBO J. 11:4313-4321) . Véase también Patente U.S. Nº.

5.945.513. Describiendo el CD40L humano. Las células transfectadas con el gen CD40L y expresando la proteína CD40L en su superficie pueden activar la proliferación de células B y, junto con señales estimuladoras, pueden inducir la producción de anticuerpos (Armitage et al. (1992) supra; y Patente U.S. Nº 5.945.513) . Los pacientes con cáncer linfoides, enfermedades autoinmunes, enfermedades cardiovasculares, y trombocitemia esencial presentan elevados niveles séricos de CD40L soluble (sCD40L) que no se ven en los pacientes sanos. La expresión constitutiva de CD40L se ha observado en un subgrupo de pacientes con varios cánceres linfoides de células B, incluyendo el linfoma de células del manto, linfoma folicular, linfoma de la zona marginal, la leucemia linfocítica crónica (LLC) , el linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) , linfoma folicular (FL) , y el linfoma de células B infectadas por VIH. Véase, por ejemplo, Clodi et al. (1998) Br.. J. Haematol. 103:270-275; Schattner et al. (1998) Blood 91:2689-2697; Moses et al. (1997) Nat. Med. 3:1242-1249; Trentin et al. (1997) Cancer Res. 57:4940-4947; Y Pham et al. (2002) Inmunidad 16:37-50) . CD40L puede jugar un papel importante en la interacción dependiente del contacto de células B expresoras de tumor CD40 dentro de los folículos neoplásicos o células de Reed-Sternberg expresoras de CD40 las en áreas de la enfermedad de Hodgkin (Carbone et al. (1995) Am. J. Pathol. 147:912-922) . Sin embargo, el mecanismo de señalización CD40 mediado por CD40L que conduce a la supervivencia en comparación con las respuestas de muerte celular de las células B malignas no se conoce completamente. Por ejemplo, en células de linfoma folicular, la baja regulación de la molécula de TRAIL que induce la apoptosis (Apo-2L)... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo anti-CD40 para el uso en el tratamiento de cáncer o condición premaligna que está asociado con células que expresan tanto CD40 como CD20 en un paciente humano refractario al tratamiento con rituximab (Rituxan ®) , en el que dicho paciente humano tiene un cáncer o enfermedad pre-maligna tratable con un anticuerpo anti-CD40 identificado mediante un método que incluye:

a) la identificación de un paciente humano con un cáncer o condición premaligna que está asociado con las células que expresan CD40 y que es refractario al tratamiento con rituximab (Rituxan ®) ; y b) la determinación del genotipo FcyRIIIa-158 de dicho paciente humano (V/V, V/F o F/F) utilizando una muestra biológica obtenida del paciente humano;

en el que dicho cáncer o condición premaligna es tratable con un anticuerpo anti-CD40 si dicho paciente humano es homocigoto o heterocigoto para FcyRIIIa-158F (genotipo V/F o F/F) .

2. El anticuerpo de la reivindicación 1 para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho cáncer o condición premaligna es un cáncer de linaje de células B.

3. El anticuerpo de la reivindicación 2, en el que dicho cáncer de linaje de células B se selecciona del grupo que consiste en leucemia linfoblástica aguda (ALL) , leucemia linfocítica crónica (CLL) , leucemia prolinfocítica (PLL) , leucemia linfocítica pequeña (SLL) , leucemia de células pilosas, enfermedad de Hodgkin, mieloma múltiple, macroglobulinemia de Waldenstrom, enfermedad de cadena pesada, y linfomas, tales como linfoma difuso linfocítico pequeño, folicular, DLBCL, linfoma de tejido linfoide asociado a mucosas, linfoma monocitoides de células B, linfoma esplénico, granulomatosis linfomatoide, linfomatosis intravascular, linfoma inmunoblástico, y linfoma relacionado con el SIDA.

4. El anticuerpo de la reivindicación 1 para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho cáncer o enfermedad premaligna es una enfermedad hematológica maligna de células no-B.

5. El anticuerpo de la reivindicación 4, en el que dicha malignidad hematológica de células no-B es leucemia mielocítica aguda.

6. El anticuerpo de la reivindicación 1 para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho cáncer o enfermedad premaligna es un tumor sólido.

7. El anticuerpo de la reivindicación 6, en el que el tumor sólido se selecciona del grupo en el que se incluyen el cáncer de ovario, de pulmón, por ejemplo, el cáncer no microcítico de pulmón del carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma, y tipos de carcinoma de células grandes, y cáncer de pulmón de células pequeñas, de mama, de colon, de riñón, incluyendo, por ejemplo, carcinomas de células renales, de vejiga, de hígado, incluyendo, por ejemplo, carcinomas hepatocelulares gástricos, cervicales, de próstata, nasofaríngeo, y cánceres de tiroides, por ejemplo, cánceres de tiroides papilar, carcinoma de piel tales como melanoma, y sarcomas, incluyendo, por ejemplo, osteosarcomas y sarcomas de Ewing.

8. El anticuerpo de cualquier reivindicación precedente, en el que dicho anticuerpo anti-CD40 incluye:

(I) la región determinante de complementariedad (CDR) de residuos de SEQ ID NO: 2; y (Ii) la región determinante de la complementariedad (CDR) de residuos de SEQ ID NO: 4.

9. El anticuerpo de cualquier reivindicación precedente, en el que dicho anticuerpo anti-CD40 se selecciona de:

i) un anticuerpo monoclonal que incluye las secuencias de región variables y constantes que se muestran en SEQ ID NO: 2; ii) un anticuerpo monoclonal que incluye las secuencias de región variables y constantes que se muestran en SEQ ID NO: 4; iii) un anticuerpo monoclonal que incluye las secuencias de región variables y constantes que se muestran en SEQ ID NO: 5; iv) un anticuerpo monoclonal que incluye las secuencias de región variables y constantes que se muestran en SEQ ID NO: 2 y las secuencias de la región variable y constante mostradas en SEQ ID NO: 4, o v) un anticuerpo monoclonal que incluye las secuencias de región variables y constantes que se muestran en SEQ ID NO: 2 y las secuencias de la región variable y constante mostradas en SEQ ID NO: 5.

10. El anticuerpo de cualquier reivindicación precedente, en el que dicho anticuerpo anti-CD40 es un anticuerpo monoclonal que incluye una secuencia de aminoácidos seleccionada entre:

(I) SEQ ID NO: 2; (Ii) SEQ ID NO: 4;

(Iii) SEQ ID NO: 5; (Iv) SEQ ID NO: 2 y SEQ ID NO: 4; y

(V) SEQ ID NO: 2 y SEQ ID NO: 5.

11. El anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en el que dicho anticuerpo anti-CD40 es un anticuerpo monoclonal humano.

12. El anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 11, en el que dicho anticuerpo monoclonal anti-CD40 incluye una región constante de cadena pesada IgG1 humana.

13. El anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 12, donde dicho anticuerpo monoclonal comprende la secuencia de aminoácidos indicada en SEQ ID NO: 4 o SEQ ID NO: 5.

14. El anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-13, en el que dicho anticuerpo anti-CD40 es el anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 producido por la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente N º PTA-5543.

15. El anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-13, en el que dicho anticuerpo anti-CD40 se produce en una línea celular CHO.

16. El anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-15, en el que dicho uso resulta en la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) de células que expresan CD40 por las células asesinas naturales (NK) de un paciente humano que expresan FcyRIIIa.

17. El anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-15, en el que dicho anticuerpo anti-CD40 es más potente que rituximab (Rituxan®) En un ensayo de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) , en el que el ensayo incluye la incubación de células que expresan CD40 y las células que expresan CD20 con células asesinas naturales (NK) humanas aisladas en presencia del anticuerpo correspondiente.

18. El anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-15, en el que dicho anticuerpo anti-CD40 es más potente que rituximab (Rituxan®) en un modelo de tumor de xenoinjerto de ratón desnudo.

19. El anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-15, en el que dicho anticuerpo anti-CD40 se une a CD40 humano con una afinidad (KD) de al menos aproximadamente 10-6M a al menos aproximadamente 1012M.

20. El anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-15, en el que dicho anticuerpo anti-CD40 humano se une a FcyRIIIa-158V con una afinidad (KD) de al menos aproximadamente 0, 5 mm y o se une a FcyRIIIa158F humano con una afinidad (KD) de al menos aproximadamente 12 μM.

21. Un método para identificar un paciente humano con un cáncer o condición premaligna tratable con un anticuerpo anti-CD40 y que es refractario al tratamiento con rituximab (Rituxan ®) , que incluye:

a) la identificación de un paciente humano con un cáncer o condición premaligna que está asociado con las células que expresan CD40 y que es refractario al tratamiento con rituximab (Rituxan ®) ; y b) la determinación del genotipo FcyRIIIa-158 de dicho paciente humano (V/N, V/F o F/F) utilizando una muestra biológica obtenida del paciente humano;

en el que dicho cáncer o enfermedad pre-maligna es tratable con un anticuerpo anti-CD40 si dicho paciente humano es homocigoto o heterocigoto para FcyRIIIa-158F (genotipo V/F o F/F) .

22. Un método para seleccionar una terapia de anticuerpos para el tratamiento de un paciente humano que tiene un cáncer o enfermedad pre-maligna que es refractario al tratamiento con rituximab (Rituxan ®) , que incluye:

a) identificar un paciente humano que tiene cáncer o condición premaligna asociado con las células que expresan CD40 y que es refractario al tratamiento con rituximab (Rituxan ®) ; y b) la determinación del genotipo de dicho paciente humano FcyRIIIa-158 (V/V, V/F o F/F) utilizando una muestra biológica obtenida del paciente humano;

donde, si dicho paciente humano es homocigoto o heterocigoto para FcyRIIIa-158F (genotipo V/F o F/F) , un anticuerpo anti-CD40 se selecciona para el tratamiento de dicho cáncer o enfermedad premaligna.