Un método de tratar células cancerosas para crear una célula cancerosa modificada que provoca una respuesta inmunogénica.

Una composición de vacuna que comprende:

una célula cancerosa deslipidada que tiene (i) una concentración total de lípidos de menos que un 80 % de laconcentración total de lípidos de la célula cancerosa original y (ii) por lo menos un antígeno de células cancerosas;

yun vehículo farmacéuticamente aceptable.

Un método de tratar células cancerosas para crear una célula cancerosa modificada que provoca una respuesta inmunogénica CAMPO DEL INVENTO

El presente invento proporciona un método de deslipidación que emplea un sistema de disolventes que es útil para extraer lípidos a partir de células cancerosas, creando de esta manera una partícula de célula cancerosa modificada. Después de una deslipidación de las células cancerosas, algunos de los antígenos de las células cancerosas permanecen intactos. Estos antígenos expuestos, o epítopos, alientan y promueven la producción de anticuerpos. La resultante célula cancerosa modificada con un contenido reducido de lípidos, o algunas porciones de la célula cancerosa, inician una respuesta inmunogénica positiva cuando se administran a un animal o ser humano y ayudan a tratar, prevenir o retrasar el comienzo o la progresión de un cáncer. El presente invento proporciona unas composiciones de vacunas autólogas y heterólogas que comprenden la célula cancerosa modificada con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Se describe además un método de administrar estas vacunas, con el fin de tratar, prevenir o retrasar el comienzo o la progresión de un cáncer.

ANTECEDENTES DEL INVENTO

Introducción Ciertos cánceres, de etiología variada, afectan a miles de millones de animales y seres humanos cada año e imponen una enorme carga económica sobre la sociedad. Los cánceres se pueden definir como un bulto anormal, una masa de tejido, o células cancerosas generadas a partir de una división celular excesiva, que es o bien benigna o maligna. Los cánceres incluyen todos aquellos cánceres que son conocidos para los médicos con experiencia ordinaria en las especialidades médicas, particularmente médicos con experiencia en oncología. Los cánceres incluyen, pero no se limitan a, los que proceden de células ectodérmicas, mesodérmicas y endodérmicas, e incluyen los cánceres del sistema inmunitario, del sistema endocrino, del sistema nervioso central, del sistema respiratorio, del sistema reproductor, del sistema gastrointestinal y del integumento. Dichos cánceres incluyen los generados por cánceres relacionados con el SIDA, un cáncer adrenocortical, un cáncer anal, un cáncer de vejiga, un cáncer de intestinos, unos cánceres del cerebro y del sistema nervioso central, un cáncer de mama, unos cánceres carcinoides, un cáncer cervical, un condrosarcoma, un coriocarcinoma, un cáncer colorrectal, unos cánceres endocrinos, un cáncer del endometrio, un sarcoma de Ewing, un cáncer de ojo, un cáncer gástrico, un cáncer gastrointestinal, unos cánceres genitourinarios, un glioma, un cáncer ginecológico, un cáncer de cabeza y cuello, un cáncer hepatocelular, una enfermedad de Hodgkin, un cáncer hipofaríngeo, un cáncer de células de los islotes, un sarcoma de Kaposi, un cáncer de riñón, un cáncer de laringe, una leucemia, un cáncer de hígado, un cáncer de pulmón, un linfoma, un melanoma, un carcinoma de células basales, un mesotelioma, un mieloma, un cáncer nasofaríngeo un neuroblastoma, un linfoma no de Hodgkin, un cáncer de esófago, un osteosarcoma, un cáncer de ovario, un cáncer pancreático, un cáncer de la pituitaria, un carcinoma de células renales, un cáncer de próstata, un retinoblastoma, un rabdomiosarcoma, un sarcoma, un cáncer de piel, un carcinoma de células escamosas, un cáncer de estómago, un cáncer testicular, un cáncer de timo, un cáncer de la tiroides, un cáncer de células transicionales, un cáncer trofoblástico, un cáncer uterino, un cáncer vaginal, una macroglobulinemia de Waldenstrom, un cáncer de Wilms, entre otros tumores y otras formas de cánceres.

Tal como con células normales, las células cancerosas contienen lípidos como una parte componente principal de la membrana plasmática que las rodea. Aunque no se conoce plenamente la razón por la que se forman células cancerosas, en general, los cánceres manifiestan ser causados por la regulación anormal de la división celular. Esto podría ser causado por anormalidades del sistema inmunitario, anormalidades genéticas, mutaciones causadas por radiaciones, los virus, la luz solar y agentes que provocan el cáncer tales como tabaco, benceno y otros compuestos químicos. Cuando un paciente está castigado con un cáncer, él incurre en un cierto número de síntomas, incluyendo fiebres, escalofríos, sudores nocturnos, pérdida de peso, pérdida de apetito, fatiga, indisposición, deficiencia respiratoria, dolor de pecho, diarrea, sangre en las heces o en la orina, entre otras dolencias.

El hecho de eliminar un cáncer desde el cuerpo de un paciente constituye un desafío puesto que, aunque algunas células cancerosas proliferan de una manera incontrolada, las células no necesariamente aparecen como que son “ajenas” para el cuerpo y, por lo tanto son difíciles de establecer como dianas. Los tratamientos existentes de cánceres tienen a ser dirigidos de una manera insuficiente hacia las células cancerosas y, por lo tanto, son muy destructivos para un tejido sano de un paciente. Dichos tratamientos incluyen rayos X, una quimioterapia, una terapia con protones, una intervención quirúrgica o combinaciones de éstos. Se preferiría que el sistema inmunitario del cuerpo pudiera ser incitado a exhibir una respuesta inmunitaria positiva contra estas células cancerosas.

El sistema inmunitario humano se compone de diversos tipos de células que protegen colectivamente al cuerpo con respecto de diferentes agentes ajenos. El sistema inmunitario proporciona múltiples medios para dirigirse hacia y eliminar elementos ajenos, incluyendo respuestas inmunitarias humorales y celulares, que participan principalmente en el reconocimiento y la eliminación de antígenos. Una respuesta inmunitaria a elementos ajenos requiere la presencia de linfocitos B (células B) o de linfocitos T (células T) en combinación con unas células presentadoras de antígenos (APC acrónimo de Antigen Presenting Cells) que son usualmente macrófagos o células dendríticas. Las APC’s son unas células inmunitarias especializadas que capturan antígenos. Una vez que están dentro de una APC, los antígenos son desmenuzados para dar fragmentos más pequeños denominados epítopos - los marcadores singulares llevados por la superficie de los antígenos. Estos epítopos son subsiguientemente desplegados sobre la superficie de las APC’s y son responsables del desencadenamiento de una respuesta de anticuerpos en defensa contra agentes ajenos.

En una respuesta inmunitaria humoral, cuando se reconocen unos antígenos que despliegan APC’s (en la forma de marcadores de epítopos singulares) que son ajenos para el cuerpo, las células B son activadas, se proliferan y producen anticuerpos. Estos anticuerpos se fijan específicamente a los antígenos presentes en la APC. Después de que se ha fijado el anticuerpo, la APC traga al antígeno entero y lo aniquila. Este tipo de respuesta inmunitaria de anticuerpos está implicado principalmente en la prevención de diversas infecciones.

En una respuesta inmunitaria celular, al reconocer la APC que despliega un antígeno ajeno, las células T son activadas. Hay dos etapas en la respuesta inmunitaria celular. La primera etapa implica la activación de células T (linfocitos) citotóxicas/os (CTL acrónimo de Cytotoxic T Lymphocytes) o células T asesinas CD8+ que proliferan y aniquilan a células dianas que representan específicamente a los antígenos presentados por las APC. La segunda etapa implica a células T ayudadoras (HTL acrónimo de Helper T Lymphocytes) o células T CD4+ que regulan la producción de anticuerpos y la actividad de las células CD8+. Las células T CD4+ proporcionan factores de crecimiento a las células T CD8+ lo que permite que éstas proliferen y funcionen de una manera eficiente.

Aunque se conoce ahora que las células cancerosas expresan antígenos asociados con un cáncer, ellas son frecuentemente capaces de evadir a una respuesta inmunitaria a causa de su capacidad de ocultar antígenos de cáncer con respecto del sistema inmunitario y/o puesto que los antígenos expuestos son unas moléculas o proteínas de diferenciación no mutadas, normales, que el sistema inmunitario humano reconoce o tolera normalmente. Para usar de una manera eficaz una inmunoterapia para tratar un cáncer, un paciente debe de tener, o ser provisto de, un número suficiente de linfocitos reactivos con el cáncer, que pueden tanto llegar al sitio del cáncer como tener unos mecanismos efectores para destruir a las células cancerosas.

Hasta la fecha, las respuestas inmunitarias generadas por vacunas contra el cáncer han sido incapaces de superar los mecanismos de escape de los cánceres, incluyendo la capacidad de... [Seguir leyendo]

1. Una composición de vacuna que comprende: una célula cancerosa deslipidada que tiene (i) una concentración total de lípidos de menos que un 80 % de la concentración total de lípidos de la célula cancerosa original y (ii) por lo menos un antígeno de células cancerosas; y

un vehículo farmacéuticamente aceptable.

2. La composición de vacuna de la reivindicación 1, que comprende además una célula dendrítica.

3. La composición de vacuna de la reivindicación 1 ó 2, que comprende además un agente estimulante de la inmunidad.

4. Uso de una célula cancerosa deslipidada que tiene (i) una concentración total de lípidos de menos que un 80 %

de la concentración total de lípidos de la célula cancerosa original y (ii) por lo menos un antígeno de células cancerosas, en la preparación de un medicamento útil para inducir una respuesta inmunogénica en un animal o ser humano.

5. El uso de la reivindicación 4, en el que la respuesta inmunogénica trata un cáncer, alivia un cáncer o detiene el

crecimiento de un cáncer, las condiciones o los síntomas clínicos asociados con dicho cáncer en el animal o ser 15 humano.

6. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 4 ó 5, en el que el medicamento comprende además una célula dendrítica.

7. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 4, 5 ó 6, en el que el medicamento comprende además un agente estimulante de la inmunidad.

8. Un método in vito para preparar una composición de vacuna, que comprende: poner en contacto una célula cancerosa en un fluido con un primer disolvente de extracción; mezclar el fluido y el primer disolvente de extracción durante un período de tiempo suficiente para extraer lípidos desde la célula cancerosa, produciendo de esta manera una célula cancerosa deslipidada que tiene (i) una concentración total de lípidos de menos que un 80 % de la concentración total de lípidos de la célula cancerosa original y (ii) por lo menos un antígeno de célula cancerosa; extraer la capa de disolvente desde el fluido; recoger el fluido que contiene la célula cancerosa deslipidada; y añadir un vehículo farmacéuticamente aceptable y opcionalmente un agente estimulante de la inmunidad.

9. El método de la reivindicación 8, en el que el primer disolvente de extracción es un éter, un alcohol o una 30 combinación de éstos.

10. Un método in vitro para la deslipidación de células cancerosas, que comprende: exponer una célula cancerosa a un procedimiento de deslipidación, que comprende tratar la célula cancerosa con uno o más disolventes de extracción de manera tal que se produce una célula cancerosa deslipidada que tiene una concentración total de lípidos de menos que un 80 % de la concentración total de lípidos de la célula cancerosa original, en el que la célula cancerosa deslipidada retiene por lo menos a un antígeno de células cancerosas.

11. El método de la reivindicación 10, que comprende: poner en contacto la célula cancerosa en un fluido con uno o más disolventes de extracción; mezclar el fluido y el uno o los más disolventes de extracción durante un período de tiempo suficiente para extraer

lípidos desde la célula cancerosa; extraer la capa de disolvente desde el fluido; y recoger el fluido que contiene la célula cancerosa deslipidada.

12. El método de la reivindicación 10 u 11, en el que el uno o los más disolventes de extracción es/son un éter, un alcohol o una combinación de éstos.

13. El método de las reivindicaciones 9 ó 12, en el que el éter es éter diisopropílico y el alcohol es butanol.

14. Uso de la composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 hasta 3 para la producción de un agente destinado a la promoción de la producción de anticuerpos.

15. El uso de la reivindicación 14 en el que la respuesta a anticuerpos es dirigida hacia el por lo menos un antígeno de célula cancerosa en la célula cancerosa deslipidada.

16. Un método in vitro para la producción de una composición de vacuna, que comprende: pulsar la célula cancerosa deslipidada preparada de acuerdo con el método de la reivindicación 10 con una célula dendrítica para formar un híbrido de célula cancerosa; y añadir un vehículo farmacéuticamente aceptable y opcionalmente un agente estimulante de la inmunidad.

17. Una composición de vacuna preparada de acuerdo con el método de una cualquiera de las reivindicaciones 8 hasta 13 y 16.

Figura 1 Recogida en DC inmaduras de células B16-F10 (marcadas con PE)

A = células dendríticas B = células dendríticas + células cancerosas B16-F10 deslipidadas C = células cancerosas B16-F10 deslipidadas Figura 2 Recogida en DC inmaduras de células B16-F10 (marcadas con PE)

A = células dendríticas B = células dendríticas + células cancerosas B16-F10 deslipidadas C = células cancerosas4 B16-F10 deslipidadas Figura 3 La vacunación terapéutica de un tumor deslipidado conduce a un crecimiento reducido del tumor

Figura 4 La vacunación terapéutica de un tumor deslipidado + células dendríticas conduce a una reducción en el crecimiento del tumor

Figura 5 Vacunación preventiva con tumores deslipidados

Figura 6 Vacunación preventiva con un tumor deslipidado + células dendríticas

Figura 7 La vacunación terapéutica con un tumor deslipidado conduce a una respuesta de antígeno específico TRP2 en B-16

Figura 8 La vacunación terapéutica con un tumor deslipidado conduce a una respuesta de antígeno específico GP100 en B-16

Figura 9

La vacunación terapéutica con un tumor deslipidado + células dendríticas conduce a una respuesta de antígeno específico TRP2 en B-16 Figura 11

Figura 12