Procedimiento de reducción del error de medición provocado por la inhibición de la catalasa por una azida.

Un procedimiento para reducir errores de medición cuando el peróxido de hidrógeno derivado de un componentediferente a un componente a medir es descompuesto por una catalasa,

seguido por la cuantificación del peróxido dehidrógeno derivado del componente a medir para cuantificar dicho componente a medir, siendo los errores demedición debidos a la inhibición de la catalasa por una azida, comprendiendo dicho procedimiento la utilización dedicha catalasa, una catalasa que tiene una subunidad que tiene una masa molecular de 75 kDa o mayor y deriva deun microorganismo

Procedimiento de reducción del error de medición provocado por la inhibición de la catalasa por una azida

Campo técnico

La presente invención se refiere a un procedimiento para reducir los errores de medición debido a la inhibición de la catalasa por una azida.

Antecedentes de la técnica En el campo de los ensayos clínicos se ha usado ampliamente un procedimiento para la medición de la concentración de un compuesto a medir en una muestra de ensayo, procedimiento que permite la generación de peróxido de hidrógeno a partir del compuesto a ser medido, peróxido de hidrógeno que se cuantifica a continuación. En un procedimiento tal, el peróxido de hidrógeno generado a partir de sustancias distintas a las del componente a medir se convierte en una fuente de error. Por lo tanto, para eliminar el peróxido de hidrógeno se utilizan generalmente un procedimiento en el que el peróxido de hidrógeno generado a partir de sustancias distintas al componente a medir se descompone en agua y oxígeno por la acción de la catalasa y un procedimiento que utiliza peroxidasa en el que un compuesto donante de hidrógeno de tipo fenol o de tipo anilina se deja reaccionar con peróxido de hidrógeno para convertir el peróxido de hidrógeno en una quinona incolora. Por ejemplo, se utilizan en un reactivo para la medición de grasa neutra, como un sistema para la eliminación de glicerol libre endógeno; en un reactivo para la medición de creatinina, como un sistema para la eliminación de creatina y sarcosina, y en un reactivo para la medición del colesterol HDL o del colesterol LDL, como un sistema para la eliminación del colesterol en lipoproteínas distintas a las del componente a medir. Convencionalmente, en un sistema de medición que utiliza una catalasa, se usa generalmente una catalasa derivada de bovino.

Entre estos, se utiliza con frecuencia un sistema de eliminación que usa catalasa, pero a veces se ve alterado por la contaminación de un compuesto que inhibe la catalasa. Especialmente, la contaminación con azida inhibe fuertemente a la catalasa incluso en los casos en que su cantidad es muy pequeña y altera el sistema de eliminación, de modo que el peróxido de hidrógeno derivado de un componente diferente al componente a medir no puede ser suficientemente eliminado, lo que conduce a errores en los valores de medición.

Dado que las azidas, tales como la azida sódica son ampliamente utilizadas en el campo de los ensayos clínicos como antisépticos, es muy probable que los sistemas de medición estén contaminados. Ejemplos de casos conocidos de contaminación con azida en un sistema de medición incluyen los casos en los que la azida está contenida en la propia muestra a medir, los casos en los que la azida se disuelve en un reactivo de medición por vaporización de la azida como azida de hidrógeno a partir de un reactivo que contiene azida existente en la proximidad de la misma, y los casos en los que azida contamina un reactivo de medición procedente de otro reactivo que contiene azida a través de una sonda colectora del reactivo de un analizador automático.

[Literatura de Patente 1] JP 10-14596 A [Literatura de Patente 2] JP 3164829 B [Literatura Patente 3] JP 3058602 B

Descripción de la invención Problemas a resolver por la invención Por consiguiente, un objetivo de la presente invención es proporcionar un procedimiento para reducir los errores de medición debido a la inhibición de la catalasa por una azida, en un procedimiento para la cuantificación de un componente a medir que comprende la etapa de descomponer el peróxido de hidrógeno derivado de un componente distinto del componente a medir.

Medios para resolver los problemas Los presentes inventores investigaron intensamente hasta descubrir que las catalasas que tienen una subunidad que tiene una masa molecular de 75 kDa o mayor y se derivan de microorganismos son menos sensibles a la inhibición por una azida que las catalasas derivadas de bovino que se han utilizado convencionalmente, e infirieron que, utilizando como catalasa una catalasa usada para un sistema de medición que tiene una subunidad que tiene una masa molecular de 75 kDa o mayor y deriva de un microorganismo, los errores de medición debido a la inhibición de la catalasa por una azida se pueden reducir, completando así la presente invención.

Es decir, la presente invención proporciona un procedimiento para reducir los errores de medición cuando el peróxido de hidrógeno derivado de un componente diferente al componente a medir se descompone por una catalasa seguido por la cuantificación de peróxido de hidrógeno derivado del componente a medir para cuantificar dicho componente a medir, siendo dichos errores de medición debidos a la inhibición de la catalasa por una azida,

comprendiendo dicho procedimiento la utilización como dicho catalasa, una catalasa que tiene una subunidad que tiene una masa molecular de 75 kDa o mayor y deriva de un microorganismo.

Efectos de la invención Por la presente invención, se proporciona en primer lugar un procedimiento para reducir los errores de medición debido a la inhibición de catalasa por azida. Por la presente invención, los componentes a medir, tales como grasa neutra, colesterol LDL, colesterol HDL y creatinina se pueden cuantificar con mayor precisión que con los procedimientos convencionales.

Mejor modo de llevar a cabo la invención Como se describió anteriormente, los presentes inventores descubrieron sorprendentemente que las catalasas que tienen una subunidad que tiene una masa molecular de 75 kDa o mayor y se derivan de microorganismos son menos sensibles a la inhibición por azida que las catalasas derivadas de bovino que se han utilizado convencionalmente. La presente invención se basa en este descubrimiento.

Las catalasas monofuncionales que son catalasas que contienen hemo se pueden agrupar en catalasas que tienen una subunidad pequeña (55 a 69 kDa) y catalasas que tienen una subunidad grande (no inferior a 75 kDa) . Las catalasas utilizadas en la presente invención son las catalasas descritas anteriormente que tienen una subunidad grande (no menos de 75 kDa) .

Ejemplos de microorganismos de los que derivan las catalasas descritas anteriormente usadas en la presente invención incluyen las de hongos, bacterias y una parte de las arqueobacterias, más particularmente, Podospora anserina, Neurospora crossa, Cladosporium fulvum, Emericella nidulans, Pleurotus ostreatus, Deinococcus radiodurans, Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Pseudomonas putida, Bacillus subtilis, Bacillus firmus, Mycobacterium avium, Botr y otinia fuckeliana, Claviceps purpurea, Aspergillus fumigatus, Ajellomyces caplasutus, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger, Agrobacterium tumefaciens, Sinorhizobium meliloti, Mesorhizobium loti, Nosema locustae, Xanthomonas or y zae y Xanthomonas campestris. Aunque las bacterias y similares son conocidos por producir una pluralidad de tipos de catalasas, las que tienen una subunidad grande (no menos de 75 kDa) son las catalasas utilizadas en el procedimiento de la presente invención. Incluso en aquellos casos donde las catalasas descritas anteriormente tienen una subunidad pequeña y están contenidas en las catalasas descritas anteriormente que tienen una subunidad grande, la presente invención puede llevarse a cabo sin ningún problema.

Ejemplos de catalasas que se sabe que son producidas por los microorganismos descritos anteriormente y que tienen una subunidad grande (no menos de 75 kDa) incluyen CatA de Podospora anserina, Cat A de Aspergillus fumigatus, CatA de Emericella nidulans, CatA de Ajellomyces capsulatus, KatE de Escherichia coli, K12 de Escherichia coli, CatC de Pseudomonas putida, catalasa 2 de Bacillus subtilis, KatE de Bacillus subtilis, KatA de Bacillus firmus, KatE de Mycobacterium avium, CatB de Aspergillus fumigatus, CatB de Ajellomyces capsulatus, CatA de Aspergillus nidulans, CatR de Aspergillus niger, CatC de Agrobacterium tumefaciens, CatC de Sinorhizobium meliloti, Nosema locustae, KatX de Xanthomonas or y zae y KatE de Xanthomonas campestris. Se describe en "Bacterial Catalase in the Microsporidian Nosema locustae: Implications for Microsporidian Metabolism and Genome Evolution” Naomi M. Fast et al., EUKARYOTIC CELL, Oct. 2003, p. 1069-1075 que estas catalasas están genéticamente relacionadas entre sí, y estos catalasas se sabe que tienen hemo d. Es bien sabido que las enzimas relacionadas genéticamente tienen características similares. Por lo tanto, las catalasas utilizadas en la presente invención no se limitan a las enumeradas anteriormente y se puede utilizar cualquier catalasa en el procedimiento de la presente invención siempre que se trate de una catalasa relacionada genéticamente que tenga hemo D y una subunidad... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para reducir errores de medición cuando el peróxido de hidrógeno derivado de un componente diferente a un componente a medir es descompuesto por una catalasa, seguido por la cuantificación del peróxido de hidrógeno derivado del componente a medir para cuantificar dicho componente a medir, siendo los errores de medición debidos a la inhibición de la catalasa por una azida, comprendiendo dicho procedimiento la utilización de dicha catalasa, una catalasa que tiene una subunidad que tiene una masa molecular de 75 kDa o mayor y deriva de un microorganismo.

2. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicha catalasa es una catalasa que tiene hemo d.

3. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en el que dicho microorganismo es un organismo de por lo menos una especie seleccionada de entre el grupo que consiste en microorganismos que pertenecen a los géneros Podospora, Neurospora, Cladosporium, Emericelia, Pleurotus, Deinococcus, Escherichia, Salmonella,

Pseudomonas, Bacillus, Mycobacterium, Botr y otinia, Claviceps, Aspergillus, Ajellomyces, Agrobacterium, Sinorhizobium, Mesorhizobium, Nosema y Xanthomonas.

4. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 3, en el que dicho microorganismo pertenece a Aspergillus.

5. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que dicho componente a medir es grasa neutra, colesterol HDL, colesterol LDL o creatinina.