Kit de reactivo de ensayo y uso en un procedimiento para medir un analito en una muestra de ensayo.

Un kit de reactivo de ensayo para medir un analito, comprendiendo dicho kit al menos una Solución Aque es una solución tampón que tiene una conductividad eléctrica no inferior a 30 mS/cm;

y una Solución B quetiene una conductividad eléctrica no superior a 6,5 mS/cm, siendo dicha Solución B una suspensión de partículasque suspende partículas de vehículo insolubles que transportan una sustancia para capturar el analito.

Kit de reactivo de ensayo y uso en un procedimiento para medir un analito en una muestra de ensayo

CAMPO TECNICO [0001] La presente invencion se refiere a un reactivo de ensayo para medir el analito en una muestra de ensayo, usando el nivel de aglutinacion por suspension de particulas que suspende particulas de vehiculo insolubles que transportan una sustancia para capturar el analito como indicador, asi como al suministro de un procedimiento para medir el analito en una muestra de ensayo que usa el reactivo de ensayo anterior. TECNICA ANTERIOR [0002] El procedimiento de medida de una sustancia sujeta a medicion (antigeno o anticuerpo) en una muestra de ensayo, que usa un reactivo de ensayo con suspension de particulas que suspende particulas de vehiculo insolubles que transportan un anticuerpo o antigeno, que usa el nivel de aglutinacion por las particulas despues de reaccion con la muestra de ensayo como indicador, se conoce como inmunoaglutinacion y se usa ampliamente.

Se ha referido que el vehiculo insoluble que transporta un anticuerpo puede dispersarse en una fase liquida con una fuerza ionica baja que tiene una concentracion de NaCl no superior a una concentracion prescrita, o inversamente, en una fase liquida con una fuerza ionica elevada que tiene una concentracion de NaCl no inferior a una concentracion prescrita.

El vehiculo insoluble que transporta una proteina suspendida en un disolvente con una fuerza ionica baja que tiene una concentracion de NaCl no superior a una concentracion prescrita, es decir, suspendida en un disolvente que tiene una conductividad electrica baja, es excelente para alcanzar una buena dispensabilidad y sensibilidad. Sin embargo, puede producirse una aglutinacion no especifica debida a contaminacion de iones por impurezas de muestras biologicas.

Se sabe que en las muestras biologicas existen interferencias que influyen en la reaccion inmunologica de la sustancia diana. Para evitar la influencia de las interferencias de la reaccion inmunologica se han usado ampliamente procedimientos que emplean reactivos con diversos aditivos. Por ejemplo, se conoce un procedimiento de uso de la solucion de reaccion para detectar una sustancia diana y la solucion tampon, que es un segundo reactivo que contiene un aditivo, para evitar la influencia de las interferencias. En muchos casos, la solucion tampon tiene una conductividad electrica (aproximadamente de 15 a 20 ms/cm) cercana a la del suero salino. En sistemas de medida que usan un vehiculo insoluble de suspension de anticuerpos en una condicion de baja conductividad electrica, puede producirse aglutinacion no especifica cuando la solucion de reaccion se mezcla con la solucion tampon durante la medida.

En inmunoaglutinacion o similares, pueden usarse diversos aditivos (por ejemplo, polietilenglicol o guanidina) con el fin de aumentar la sensibilidad del reactivo. Sin embargo, si se usa un aditivo, la conductividad electrica aumentara y, por tanto, puede producirse aglutinacion no especifica cuando la solucion de reaccion se mezcla con la solucion tampon durante la medida.

Por otra parte, en los casos en que se usa un vehiculo insoluble que transporta una proteina en suspension en un disolvente que tiene una alta conductividad electrica, no se produce autoaglutinacion en un periodo de tiempo breve, no en un marco de varias horas. Sin embargo, la autoaglutinacion tiene lugar durante almacenamiento de larga duracion de varios dias o varios meses o mas, de manera que puede no conseguirse dicho 50 almacenamiento. [DOCUMENTOS DE LA TECNICA ANTERIOR] [DOCUMENTOS DE PATENTE]

[Documento de patente 1] JP-2005-351.643-A [Documento de patente 2] JP-3.095.541-B

[Documento de patente 3] JP-5º-1º2.16º-A [Documento de patente 4] JP-º.0º5. º46-A

[DOCUMENTOS DISTINTOS DE PATENTE] 5

[Documento distinto de patente 1] J. Biomater. Sci. Polymer Edn, Vol. 10, n° 11, pag. 1093-1105 (1999)

RESUMEN DE LA INVENCION

PROBLEMAS QUE SE RESOLVERAN MEDIANTE LA INVENCION

Un objeto de la presente invencion es proporcionar un kit de reactivo de ensayo para una sustancia sujeta a medicion en una muestra de ensayo, usando el nivel de aglutinacion por una suspension de particulas que suspende particulas de vehiculo insolubles que transportan una sustancia para capturar la sustancia sujeta a medicion como indicador, en el que el reactivo no experimenta autoaglutinacion durante el almacenamiento, y con el que rara vez se produce aglutinacion no especifica durante la medida, asi como proporcionar un procedimiento de medida del analito en una muestra de ensayo.

MEDIOS PARA RESOLVER LOS PROBLEMAS

Los autores de la invencion realizaron estudios intensos para descubrir que no se produce autoaglutinacion durante la condicion de almacenamiento y que la aglutinacion no especifica puede inhibirse durante 25 la medida formando el reactivo de ensayo en un sistema de solucion binario que incluye una suspension de particulas y una solucion tampon, haciendo tambien la suspension de particulas con conductividad electrica inferior a un valor especifico, y haciendo la solucion tampon con conductividad electrica superior a un valor especifico que es mayor que el de la solucion tampon empleado normalmente en reactivos de ensayo, y mezclando la solucion tampon y la suspension de particulas inmediatamente antes del inicio de la operacion de medida, completando con ello la presente invencion.

Es decir, la presente invencion proporciona un kit de reactivo de ensayo para medir un analito, comprendiendo el reactivo al menos una Solucion A que es una solucion tampon que tiene una conductividad electrica no inferior a 30 ms/cm; y una Solucion B que tiene una conductividad electrica no superior a 6, 5 ms/cm, 35 siendo la Solucion B una suspension de particulas que suspende particulas de vehiculo insolubles que transportan una sustancia para capturar la sustancia sujeta a medicion. La presente invencion tambien proporciona un procedimiento de medida del analito en una muestra de ensayo usando el reactivo de ensayo anterior segun la presente invencion, comprendiendo el procedimiento las etapas de mezclado de la Solucion A, la Solucion B y la muestra de ensayo; y de medida del nivel de aglutinacion de las particulas en la mezcla obtenida, en el que al

menos la Solucion A y la Solucion B se mezclan inmediatamente antes del inicio de una operacion de medida, en el que dicha Solucion A se mezcla con dicha Solucion B en una cantidad tal que no se produce aglutinacion no especifica.

EFECTOS DE LA INVENCION

Mediante la presente invencion, dado que no se produce autoaglutinacion durante el almacenamiento, y la aglutinacion no especifica rara vez ocurre durante la medida, la sustancia sujeta a medicion en una muestra de ensayo puede medirse con precision.

BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS

La Fig. 1 muestra un modo del procedimiento de mezcla para mezclar la Solucion A, la Solucion B y

una muestra de ensayo cuando el procedimiento de la presente invencion se lleva a cabo usando un aparato de medida automatico. La Fig. 2 muestra otro modo del procedimiento de mezcla para mezclar la Solucion A, la Solucion B y una muestra de ensayo cuando el procedimiento de la presente invencion se lleva a cabo mediante un aparato de medida automatico usando un tubo en forma de Y.

La Fig. 3 muestra otro modo del procedimiento de mezcla para mezclar la Solucion A, la Solucion B y una muestra de ensayo cuando el procedimiento de la presente invencion se lleva a cabo usando un filtro de filtrado. La Fig. 4 muestra una curva de calibracion preparada en un Ejemplo de la presente invencion.

MODO DE REALIZAR LA INVENCION

Tal como se describe anteriormente, el kit de reactivo de la presente invencion comprende una Solucion A, que es una solucion tampon, y una Solucion B, que es una suspension de particulas. La Solucion A y la Solucion B son dos liquidos separados contenidos en diferentes recipientes. Estas soluciones se mezclan inmediatamente antes de la operacion de medida. El modo de mezclado se describira mas adelante.

Solucion A (solucion tampon)

El agente tampon contenido en la Solucion A, que es una solucion tampon, puede ser un agente tampon bien conocido usado normalmente en reactivos de ensayo. Entre los ejemplos preferidos del agente tampon se incluyen aminoacidos como alanina, arginina, asparagina, acido aspartico, cisteina, glutamina, acido glutamico, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptofano, tirosina y valina; sales de acidos carboxilicos como acido citrico, acido maleico y acido glutarico; sales de acido fosforico como fosfato de sodio e hidrogenofosfato de sodio; sales de acido carbonico como... [Seguir leyendo]

1. Un kit de reactivo de ensayo para medir un analito, comprendiendo dicho kit al menos una Solucion A que es una solucion tampon que tiene una conductividad electrica no inferior a 30 mS/cm; y una Solucion B que tiene una conductividad electrica no superior a 6, 5 mS/cm, siendo dicha Solucion B una suspension de particulas que suspende particulas de vehiculo insolubles que transportan una sustancia para capturar el analito.

2. El kit de reactivo de ensayo segun la reivindicacion 1, en el que dicha Solucion A tiene una conductividad electrica no superior a 200 mS/cm. 10

3. El kit de reactivo de ensayo segun la reivindicacion 1 o 2, en el que dicha sustancia para capturar la sustancia sujeta a medicion es un anticuerpo o un fragmento de union de antigeno del mismo, o un antigeno.

4. El kit de reactivo de ensayo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dichas 15 particulas de vehiculo insolubles son particulas de latex.

5. El kit de reactivo de ensayo segun la reivindicacion 4, en el que dichas particulas de latex son particulas de latex de poliestireno.

6. Un procedimiento de medida de una sustancia sujeta a medicion en una muestra de ensayo que usa el kit de reactivo de ensayo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de mezclado de dicha Solucion A, dicha Solucion B y dicha muestra de ensayo; y de medida del nivel de aglutinacion de las particulas en la mezcla obtenida; en el que al menos dicha Solucion A y dicha Solucion B se mezclan inmediatamente antes del inicio de la operacion de medida, en el que dicha Solucion A se mezcla con dicha Solucion B en una cantidad tal que no se produce una aglutinacion no especifica.

º. El procedimiento de medida segun la reivindicacion 6, en el que dicha muestra de ensayo es orina, liquido cefalorraquideo o heces.

º. El procedimiento de medida segun la reivindicacion 6, en el que dicha muestra de ensayo es sangre, suero o plasma sanguineo.