Oligonucleótido y composiciones que comprenden los mismos para tratar la neoplasia de células B.

Un oligonucleótido que tiene la secuencia de sec. con núm. de ident.:1 para usar en el tratamiento de la neoplasiade células B en un sujeto mamífero.

Oligonucleotido y composiciones que comprenden los mismos para tratar la neoplasia de celulas B

CAMPO TECNICO

La presente descripcion proporciona nueve oligonucleotidos con las s ecuencias como se muestra en sec. con num. de ident.:1 a 9, o sus homologos funcionales, una composicion que comprende los mismos y un metodo para tratar la neoplasia de celulas B por medio del uso de oligonucleotidos para inducir apoptosis en celulas neoplasicas de celulas B, regular positivamente el CD40 en celulas neoplasicas de celulas B y estimular celulas neoplasicas de celulas B para producir IL-10. Los oligonucleotidos o sus homologos funcionales pueden usarse individualmente o juntos, o usarse en combinacion con quimioterapeuticos, inmunoterapeuticos y radiacion para tratar la neoplasia de celulas B.

ANTECEDENTES

Basado en el sistema de clasificacion WHO (American Journal of Surgical Pathology, 1997, 21 (1) : 114-121) , las malignidades linfoides se agrupan en tres clases fundamentales: neoplasia de celulas B, neoplasia de celulas Tl/celulas asesinas naturales (NK) y linfomas de Hodgkin. La neoplasia de celulas B se divide mas aun en dos grupos: neoplasia de celulas B precursoras y neoplasia de celulas B perifericas. La neoplasia de celulas B precursoras incluye la leucemia linfoblastica aguda de precursores B (leucemia linfoblastica aguda de celulas B, B-ALL) / linfoma linfoblastico (LBL) . La neoplasia de celulas B perifericas incluye la leucemia linfocitica cronica de celulas B (B-CLL) , linfoma de linfocitos pequenos, leucemia prolinfocitica de celulas B, linfoma linfo plasmacitico/inmunocitoma, linfoma de celulas del manto, linfoma folicular, linfoma folicular cutaneo, linfoma de celulas B de zona marginal extranodal de tipo MALT, linfoma de celulas B de zona marginal nodal (+/celulas B monocitoides) , linfoma de zona marginal esplenico (+/- linfocitos velludos) , leucemia de celulas peludas, mieloma de celulas plasmacitomalplasma, linfoma de celulas B grandes difuso, linfoma de celulas B grandes del mediastino (timico) , linfoma de celulas B grandes intravascular, linfoma primario de cavidades y linfoma de Burkitt. La leucemia linfocitica cronica de celulas B (B-CLL) y la leucemia linfoblastica/linfocitica aguda de celulas B (B-ALL) son dos tipos de leucemia de celulas B. Las celulas B-CLL expresan CD19, CD5 y CD23 (Nicholas Chiorazzi, M.D., y otros N Engl J Med 2005;352:804-15) . Las celulas B-ALL expresan los marcadores CD19 y CD10. El linfoma de linfocitos pequenos es una neoplasia de celulas B. Las celulas de linfoma de linfocitos pequenos expresan CD19, CD5 y CD23 (Catherine Thieblemont, y otros Blood. 2004;103:2727-2737) . En dependencia de la neoplasia de celulas B diagnosticada, las opciones de tratamiento actuales son la quimioterapia, la radioterapia y la inmunoterapia. El CD40, expresado en la superficie de los linfocitos B y celulas dendriticas normales, es un miembro de la familia del receptor del factor de necrosis tumoral (TNFR) . El CD40L (CD154) , expresado en los linfocitos T, es un miembro de la familia del factor de necrosis tumoral (Castle BE, y otros. J Immunol 1993; 151: 1777-1788) . La interaccion de CD40L y CD40 promueve la proliferacion, diferenciacion y presentacion de antigenos de los linfocitos B, las celulas dendriticas y los monocitos (Ranheim EA, y otros. J Exp Med 1993; 177: 925-935; Yellin MJ, y otros. J Immunol 1994; 153: 666-674; Banchereau J, y otros. Annu Rev Immunol 1994; 12: 881-922; M.von Bergwelt-Baildon MS, y otros. Blood 2002; 99: 33193325) . El CD40 ademas se expresa en las celulas neoplasicas de celulas B . Se demostro que mejorar la expresion de CD40 promueve la apoptosis de celulas neoplasicas de celulas B (Peter Chu, y otros. PNAS, Marzo 19, 2002, vol. 99, num: 6 3854-3859; Frank Dicker, y otros. BLOOD, 15 Abril 2005 volumen 105, Numero 8: 3193-3198) . Experimentos tanto in vitro como in vivo indicaron que la estimulacion y regulacion positiva de CD40 indujo la inhibicion del crecimiento de las celulas neoplasicas de celulas B (Funakoshi y otros., Blood 83: 2787-2794, 1994; Murphy y otros., Blood

86: 1946-1953 , 1995; Eliopoulos, A. G., y otros. 1996. Oncogene 13:2243; Hirano, A., y otros 1999. Blood 93:2999; Tong, A. W., M y otros 2001.Clin. Cancer Res. 7:691) . Se informo que promover la expresion de CD40 en celulas neoplasicas de celulas B mejoro la antigenicidad de las celulas neoplasicas de celulas B y consecuentemente estimulo la generacion de linfocitos T citotoxicos (CTL) especificos por estas celulas. Los CTL pueden matar eficientemente celulas neoplasicas de celulas B (Dilloo D, y otros. Blood. 1997;90:19271933; Kato K, y otros J Clin Invest. 1998;101:1133-1141; Wierda WG, y otros Blood. 2000;96:2917-2924 ; Takahashi S, y

otros Hum Gene Ther. 2001;12:659-670; Takahashi S, y otros Cancer Gene Ther.2001;8:378-387) . En presencia de CD40L, los linfocitos T CD4 citotoxicos pueden matar las celulas de leucemia linfocitica cronica de celulas B celulas que expresan CD40 (Frank Dicker, y otros. Blood, 15 Abril 2005 Vol. 105, Num. 8: 3193-3198) . La interaccion de CD40L y CD40 en las celulas de linfoma de Burkett puede promover que las celulas presenten antigenos tumorales a CTLs especificos (Khanna,

R. y otros. 1997. J. Immunol. 159:5782) . Experimentos in vivo y ensayos clinicos ademas demostraron que la activacion de CD40 puede mejorar la inmunogenicidad de la leucemia linfocitica cronica de celulas B (B-CLL) y consecuentemente inducir la generacion de CTLs especificos por estas celulas (Kato, K., y otros. 1998.J. Clin. Invest. 101:1133; Wierda, W. G., y otros 2000. Blood 96: 2917) .

En conjunto, estos datos indican que aumentar la expresion de CD40 en celulas neoplasicas de celulas B puede estimular la inmunidad anti-tumoral contra la neoplasia de celulas B. La inmunidad anti-tumoral incluye pero no se limita a lo siguiente:

1. promover la apoptosis de celulas neoplasicas de celulas B;

2. inhibir el crecimiento de celulas neoplasicas de celulas B;

3. mejorar la inmunogenicidad de celulas neoplasicas de celulas B y por lo tanto estimular la generacion de CTLs especificas por las celulas.

La interleucina-10 (IL-10) es una citocina homodimerica producida por ciertas celulas T, monocitos, macrofagos y algunas de las celulas neoplasicas desarrolladas a partir de celulas B, celulas T o celulas NK (Kitabayashi y otros, 1995; Masood y otros, 1995; Sjoberg y otros, 1996; Beatty y otros, 1997; Boulland y otros, 1998; Jones y otros, 1999) . La actividad de la IL10 esta mediada por su receptor de superficie celular especifico expresadoen las celulas presentadoras de antigeno, celulas linfocitos B y celulas de leucemia linfocitica cronica (B-CLL) . Se encontro que la adicion de IL-10 exogena inhibio la proliferacion de celulas B-CLL aisladas frescas a partir de pacientes (Jesper Jurlander, Chun-Fai Lai, Jimmy Tan, y otros. Characterization of interleukin-10 receptor expression on B-cell chronic lymphocytic leukemia cells. Blood, Vol. 89, Num. 11 (Junio 1) , 1997: pags. 4146-4152) . Ademassereporto quela IL-10 inhibio la proliferacion de celulas B-CLLy mejoro la apoptosis de celulas B-CLL (Anne-Catherine Fluckiger, Isabelle Durand, y Jacques Banchereau. Interleukin 10 Induces Apoptotic C ell Death of B-Chro nic L ymphocytic Leukemia ce lulas. J. Exp. Med. Volumen 1 79 En ero 1 994 91-99) . L a estimulacion de las propiedades anticancer de la IL-10 se discutio en una revisiona partir de la cual seespeculaque la sobre-expresion de la IL -10 den tro d el microambiente tu moral puede cata lizar el re chazo inmun e al ca ncer ( Simone Mocellin, F rancesco M. Ma rincola y Howard A. Young. In terleukin-10 an d the immune respons e against ca ncer: a counterpoint. Journal of Leukocyte Biology. 2005; 78:1043-1051) .

RESUMEN DE LA INVENCION

En un aspecto, la invencion proporciona un oligonucleotido que tiene la secuencia de sec. con num. de ident.: 1 para usar en el tratamiento de la neoplasia de celulas B en un sujeto mamifero.

En un aspecto adicional, la invencion proporciona un oligonucleotido que tiene la secuencia de sec. num.: 1 para usar en el tratamiento de la neoplasia de celulas B, que esta comprendido dentro de una composicion farmaceutica.

En un aspecto adicional, la invencion proporciona un metodo para inducir apoptosis decelulas neoplasicas de celulas B in vitro, que comprende poner en contacto dichas celulas neoplasicas de celulas B con una composicion que comprende un oligonucleotido que tiene la secuencia de sec. con num. de ident.: 1.

En un aspecto adicional, la invencion proporciona un metodo para mejorar la expresion de CD40 en celulas neoplasicas de celulas B, que comprendeponer en contacto dichas celulas neoplasicas de celulas B in vitro con un a composicion que comprende un oligonucleotido que tiene la secuencia de sec. con num.... [Seguir leyendo]

1. Un oligonucleotido que tiene la secuencia de sec. con num. de ident.:1 para usar en el tratamiento de la neoplasia de celulas B en un sujeto mamifero.

2. El oligonucleotido de acuerdo con la reivindicacion 1 para usar en el tratamiento de la neoplasia de celulas B de acuerdo con la reivindicacion 1, caracterizado porque el oligonucleotido es para inducir la apoptosis de las celulas neoplasicas de celulas B.

3. El oligonucleotido de acuerdo con la reivindicacion 1 para usar en el tratamiento de la neoplasia de celulas B de acuerdo con la reivindicacion 1, caracterizado porque el oligonucleotido es para regular positivamente CD40 en las celulas neoplasicas de celulas B.

4. El oligonucleotido de acuerdo con la reivindicacion 1 para usar en el tratamiento de la neoplasia de celulas B de acuerdo con la reivindicacion 1, caracterizado porque el oligonucleotido es para estimular las celulas neoplasicas de celulas B para producir IL-10.

5. El oligonucleotido de acuerdo con cualquier reivindicacion anterior para usar en el tratamiento de la neoplasia de celulas B de acuerdo con cualquier reivindicacion anterior, en donde dicha neoplasia de celulas B es leucemia de celulas B, linfoma o mieloma de celulas B.

6. El oligonucleotido de acuerdo con la reivindicacion 5 para usar en el tratamiento de la neoplasia de celulas B de acuerdo con la reivindicacion 5, en donde dicha leucemia de celulas B es leucemia linfocitica cronica de celulas B o leucemia linfocitica aguda de celulas B.

7. El oligonucleotido de acuerdo con la reivindicacion 5 para usar en el tratamiento de la neoplasia de celulas B de acuerdo con la reivindicacion 5, en donde dicho linfoma de celulas B es linfoma de linfocitos pequenos.

8. El oligonucleotido de acuerdo con cualquier reivindicacion anterior para usar en el tratamiento de la neoplasia de celulas B de acuerdo con cualquier reivindicacion anterior, en donde dicho sujeto mamifero es un sujeto humano.

9. El oligonucleotido de acuerdo con cualquier reivindicacion anterior para usar en el tratamiento de la neoplasia de celulas B de acuerdo con cualquier reivindicacion anterior, el cual es para la administracion enteral, parenteral o en forma topica o por inhalacion.

10. Un oligonucleotido que tiene la secuencia de sec. con num. de indent.: 1 para usar en el tratamiento de la neoplasia de celulas B, que esta comprendido dentro de una composicion farmaceutica.

11. Un metodo para inducir apoptosis de celulas neoplasicas de celulas B in vitro, que comprende poner en contacto dichas celulas neoplasicas de celulas B con una composicion que comprende un oligonucleotido que tiene la secuencia de sec. con num. de ident.: 1.

12. Un metodo para mejora r la expresion de CD40 en celulas neoplasicas de celulas B, que comprendeponer en contacto dichas celulas neoplasicas de celulas B in vitro con una composicion que comprende un oligonucleotido que tiene la secuencia de sec. con num. de ident.:1.

13. Un metodo para inducir celulas neoplasicasdecelulasB para producir IL-10, que comprendeponer en contacto dichas celulas neoplasicas de celulas B in vitro con una composicion que comprende un oligonucleotido que tiene la secuencia de sec. con num. de ident.:1.

14. El metodo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 10-13, en donde dichas celulas neoplasicas de celulas B son celulas de leucemia linfocitica cronica de celulasB (B-CLL) , o celulas de leucemia linfociticaaguda de celulas B (B-ALL) , o celulas de linfoma de linfocitos pequenos.

15. Unacomposicion farmaceutica parausar en el tratamiento de la neoplasia de celulas B que comprende: (1) un oligonucleotido que tiene la secuencia de sec. con num. de ident.:1 y (2) un agente anti-neoplasia de celulas B.

16. La comp osicion d e acuerdo co n la reivindicacion 1 5, e n donde dicho a gente anti-neop lasia de c elulas B es quimioterapeuticos, inmunoterapeuticos, o agentes usados en radioterapia.

17. La composicion de acuerdo con la reivindicacion 16, en donde dichos quimioterapeuticos se seleccionan del grupo que consiste de: fludarabina, pentosatina, vincristina, ciclofosfamida, prednisona, CVP (ciclofosfamida, vincristina y prenisona) , y CHOP (ciclofosfamida, doxorrubicina, vincristina, y prednisona) .

18. La composicionde acuerdo con la reivindicacion 16, endondedichoinmunoterapeutico es un anticuerpoanti-CD20.

19. La composicion de acu erdo con la reivindicacion 16, en donde dic ha radio tera pia es rad iacion ex terna o 10 tratamiento con un anticuerpo radiomarcado.

20. El us o d e un oligonucleotido que tie ne la secuencia de sec. con num. de ident.:1 para la fa bricacion de u n medicamento para el tratamiento de la neoplasia de celulas B.

21. El uso de acuerdo con la reivindicacion 20, en donde la neoplasia de celulas B es leucemia de celulas B, linfoma o mieloma de celulas B.