Nuevos polimorfismos en ABCB1 asociados con una falta de respuesta clínica a medicamentos.

Procedimiento para determinar el pronóstico de una respuesta clínica de un paciente humano a un medicamentoactivo sobre el sistema nervioso central (SNC),

que es un sustrato de la proteína ABCB1, en el que se determina lapresencia de al menos un polimorfismo en el gen ABCB1 de ese paciente que está asociado con una respuestaclínica atrasada, parcial, subóptima o ausente a dicho medicamento, y en el que se determina al menos un primerpolimorfismo rs4148740.

Nuevos polimorfismos en ABCB1 asociados con una falta de respuesta clínica a medicamentos La presente invención se define mediante las reivindicaciones anejas. Se refiere a métodos, composiciones, kits y reactivos para determinar el pronóstico de una respuesta clínica en un paciente humano a un medicamento que actúa en el sistema nervioso central (SNC) y que es un sustrato de la proteína ABCB1. Además, la invención se refiere a una combinación de medicamentos para el tratamiento de pacientes humanos que tienen polimorfismos específicos en el gen ABCB1.

La depresión mayor constituye una de las cargas patológicas más grandes a nivel mundial, y se anticipa que será la segunda carga patológica global principal hacia el año 2020, sólo después de la enfermedad cardiovascular (Murray y López, 1996) . Los antidepresivos son el tratamiento de primera línea de la depresión mayor, pero su eficacia clínica global es insatisfactoria, puesto que la remisión, es decir, la resolución total de los síntomas depresivos, sólo se produce en alrededor de la mitad de los pacientes después de un ensayo con un único fármaco dosificado adecuadamente. Las tasas de remisión caen incluso después de fracasos sucesivos de tratamiento (Trivedi et al., 2006) .

Una de las posibles razones para la mala respuesta antidepresiva es su inadecuada penetración en el sistema nervioso central, que depende de la capacidad del fármaco para pasar la barrera hematoencefálica (BBB) . Esta barrera incluye transportadores activos que son expresados en la membrana luminal de las células endoteliales que forran los pequeños capilares sanguíneos que forman la barrera hematoencefálica. Estas moléculas transportan activamente sus sustratos, frente a un gradiente de concentración, fuera de las células, nuevamente a la circulación sanguínea, manteniendo así potencialmente bajas las concentraciones de fármaco en el cerebro. Una de las moléculas transportadoras mejor estudiadas es la glucoproteína P (P-gp) (Cordon-Cardo et al., 1989; Thiebaut et al., 1987) . P-gp es un miembro de la superfamilia altamente conservada de proteínas transportadoras con casete de unión a ATP (ABC) (Ambudkar et al., 1999) . En seres humanos, esta glucoproteína de 170 kDa es codificada en el cromosoma 7 por el gen ABCB1, también conocido como el gen multirresistente 1 (MDR1) (Callen et al., 1987; Chin et al., 1989) . P-gp actúa como una bomba de eflujo activa para un amplio intervalo de compuestos, incluyendo un número de fármacos y hormonas esteroideas (Schinkel et al., 1996; Uhr et al., 2000, 2002, 2004, 2005) . P-gp en la BBB regula así las concentraciones intracerebrales, y, por extensión, puede afectar a la respuesta clínica de fármacos dirigidos al SNC que son sustratos de este transportador.

Se teoriza que las diferencias entre individuos en la actividad del gen ABCB1 pueden dar cuenta en parte de la gran variación en la respuesta clínica a antidepresivos en pacientes psiquiátricos, incluso a niveles plasmáticos comparables (Uhr y Grauner, 2003) . Un estudio posterior mostró una mejora diferente de la penetración de los antidepresivos doxepina, venlafaxina y paroxetina en el cerebro de ratones con una mutación de supresión de ABCB1ab (Uhr, Grauer y Holsboer, 2003) .

Numerosos documentos describen polimorfismos en ABCB1 (Kioka et al., 1989; Stein et al., 1994; Mickley et al., 1998; Hoffmeyer et al., 2000; Kim et al., 2001; Ito et al., 2001; Cascorbi et al., 2001; Tanabe et al., 2001; Eichelbaum et al., 2004) , y en las bases de datos públicas de SNP se enumeran una multitud de polimorfismos de un sólo nucleótido (SNPs) .

Soranzo et al. (Genome Research, vol. 14, pp. 1333-1344, 2004) describen la identificación de variantes etiológicas candidatas responsables de la actividad alterada del gen multirresistente de ABCB1. En una lista de 53 sitios polimórficos identificados mediante secuenciación, se mencionan el polimorfismo rs10248420 y rs4148740, pero no se investiga más.

El documento WO 01/09183 describe polimorfismos en el gen ABCB1 humano para uso en ensayos de diagnóstico para mejorar la terapia de fármacos consolidados y ayudar a correlacionar genotipos con la actividad farmacéutica y efecto secundario.

El documento WO 2005/108605 se refiere a polimorfismos en el gen ABCB1 que están asociados con una respuesta clínica insuficiente a un medicamento activo en el SNC que es un sustrato de la proteína ABCB1. Se describen siete polimorfismos de un sólo nucleótido (SNPs) en el gen ABCB1, que están asociados con respuesta clínica a fármacos antidepresivos. Sin embargo, no existen pruebas en este documento de que, además de los polimorfismos específicos descritos, puedan estar asociados otros polimorfismos en el gen ABCB1 con una respuesta clínica a medicamentos activos en el SNC.

De este modo, todavía existe la necesidad de identificar polimorfismos en el gen ABCB1 implicados en regular las concentraciones intracerebrales de medicamentos activos en el SNC. El objeto de la presente invención fue determinar nuevos polimorfismos de un solo nucleótido en el gen ABCB1 que sirven de pronóstico para el progreso y resultado del tratamiento de medicamentos activos en el SNC, que son sustratos transportadores de ABCB1.

En los estudios en los que se basa la presente solicitud, sorprendentemente fue posible identificar varios nuevos polimorfismos en el gen ABCB1, que tienen una asociación clara y estadísticamente relevante con una respuesta clínica insuficiente a medicamentos activos en el SNC. Se tuvo éxito a la hora de identificar los SNPs rs4148740,

rs10280101, rs7787082, rs4148739, rs11983225, rs10248420 y rs12720067, como particularmente responsables de esta asociación. La presencia de estos SNPs particulares demostró ser altamente predictiva del progreso y resultado del tratamiento de medicamentos activos en el SNC.

Un primer aspecto de la invención se refiere a un método para determinar el pronóstico de una respuesta clínica en un paciente humano a un medicamento activo sobre el sistema nervioso central (SNC) que es un sustrato de la proteína ABCB1, en el que se determina la presencia de al menos un polimorfismo en el gen ABCB1 de ese paciente que está asociada con una respuesta clínica retrasada, parcial, subóptima, o inexistente a dicho medicamento, en el que se determina al menos un primer polimorfismo rs4148740.

En una realización preferida, se determina al menos un polimorfismo adicional en el gen ABCB1, en particular rs10280101, rs7787082, rs4148739, rs11983225, rs10248420, rs12720067 y/o sus combinaciones.

También se describe aquí un método para determinar el pronóstico de una respuesta clínica en un paciente humano a un medicamento activo en el sistema nervioso central (SNC) que es un sustrato de la proteína ABCB1, en el que se determina la presencia de al menos un primer polimorfismo en el gen ABCB1 de dicho paciente, en el que dicho primer polimorfismo se selecciona del grupo que consiste en rs4148740, rs10280101, rs7787082, rs4148739, rs11983225, rs10248420 y rs12720067, y sus combinaciones.

Se describe además una composición de diagnóstico o kit para el pronóstico de una respuesta clínica en un paciente humano a un medicamento activo en el sistema nervioso central que es un sustrato de la proteína ABCB1, que comprende al menos un cebador o sonda para determinar al menos un primer polimorfismo en el gen ABCB1 en dicho paciente, en el que dicho primer polimorfismo se selecciona del grupo que consiste en rs4148740, rs10280101, rs7787082, rs4148739, rs11983225, rs10248420, rs12720067 y sus combinaciones.

Un aspecto adicional de la invención se refiere al uso de una composición de diagnóstico o kit en el método según la invención, comprendiendo la composición o kit al menos un cebador o sonda para determinar al menos un polimorfismo en el gen ABCB1 en dicho paciente que está asociado con una respuesta clínica retrasada, parcial, subóptima o inexistente a dicho medicamento, en el que dicha sonda o cebador es para determinar el polimorfismo de rs4148740, en el que la composición o kit comprende además al menos un cebador o sonda adicional para determinar al menos un polimorfismo adicional en el gen ABCB1, en particular rs10280101, rs7787082, rs4148739, rs11983225, rs10248420 y/o rs12720067.

Se describe además una micromatriz para el pronóstico de una respuesta clínica en un paciente humano a un medicamento activo en el SNC que es un sustrato de la proteína ABCB1, que comprende un soporte que tiene, inmovilizada en él, al menos una sonda para determinar al menos un primer polimorfismo en el gen ABCB1 en dicho paciente, en la que dicho primer polimorfismo se selecciona del grupo que consiste en rs4148740, rs10280101, rs7787082,... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento para determinar el pronóstico de una respuesta clínica de un paciente humano a un medicamento activo sobre el sistema nervioso central (SNC) , que es un sustrato de la proteína ABCB1, en el que se determina la presencia de al menos un polimorfismo en el gen ABCB1 de ese paciente que está asociado con una respuesta clínica atrasada, parcial, subóptima o ausente a dicho medicamento, y en el que se determina al menos un primer polimorfismo rs4148740.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que se determina al menos un polimorfismo adicional en el gen ABCB1, en particular rs10280101, rs7787082, rs4148739, rs11983225, rs10248420, rs12720067 y/o combinaciones de los mismos.

3. Procedimiento según la reivindicación 2, en el que al menos un polimorfismo adicional, en particular al menos un polimorfismo adicional seleccionado del grupo que consiste en rs2235067, rs2032583, rs2235040, rs2235015 y combinaciones de los mismos, está en desequilibrio de ligamiento con dicho primer polimorfismo rs4148740.

4. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el polimorfismo se determina mediante genotipado.

5. Procedimiento según la reivindicación 4, en el que el genotipado comprende un análisis de micromatriz o un análisis por espectrometría de masas o el uso de cebadores y/o de sondas específicas del polimorfismo, en particular una reacción de extensión de cebador.

6. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que, además de la determinación del al menos un polimorfismo, se determina un cambio en la función del gen ABCB1, en el que dicho procedimiento comprende en particular determinar el transporte de sustancias específicas a nivel de la barrera hetamoencefálica.

7. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que el medicamento se selecciona del grupo que consiste en antidepresivos, ansiolíticos, hipnóticos, nootrópicos, antisicóticos, agentes neuroprotectores, antieméticos, antiepilépticos, antibióticos, agentes anticancerígenos, antimicóticos, agentes antiparkinsonianos, agentes antivirales, glucocorticoides, inmunosupresores, estatinas, neurolépticos y opioides.

8. Procedimiento según la reivindicación 7, en el que el medicamento es un antidepresivo, en particular citalopram, venlafaxina, amitriptilina y/o paroxetina.

9. Medicamento activo sobre el SNC que es un sustrato de la proteína ABCB1 destinado a ser usado para tratar un trastorno del SNC en un paciente que tiene al menos un polimorfismo en el gen ABCB1, en el que dicho polimorfismo es rs4148740, eventualmente combinado con al menos un polimorfismo adicional en el gen ABCB1 seleccionado entre rs10280101, rs7787082, rs4148739, rs11983225, rs10248420, rs12720067, rs2235067, rs2032583, rs2235040, rs2235015 y rs4148740, y combinaciones de los mismos, comprendiendo dicho medicamento una dosis más elevada que la dosis estándar, o una combinación con otro medicamento inhibidor de la proteína ABCB1.

10. Medicamento activo sobre el SNC según la reivindicación 9, destinado a ser usado para tratar un estado clínico según la reivindicación 9, en el que el medicamento se selecciona del grupo que consiste en antidepresivos, ansiolíticos, hipnóticos, nootrópicos, antisicóticos, agentes neuroprotectores, antieméticos, antiepilépticos, antibióticos, agentes anticancerígenos, antimicóticos, agentes antiparkinsonianos, agentes antivirales, glucocorticoides, inmunosupresores, estatinas, neurolépticos y opioides.

11. Uso de una composición o de un kit de diagnóstico en el procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, comprendiendo la composición o el kit al menos un cebador o una sonda para determinar al menos un polimorfismo en el gen ABCB1 en dicho paciente que está asociado con una respuesta clínica atrasada, parcial, subóptima o ausente a dicho medicamento, estando dicho cebador o sonda destinado a determinar el polimorfismo rs4148740, y comprendiendo la composición o el kit además al menos un cebador o sonda adicional para determinar al menos un polimorfismo adicional en el gen ABCB1, en particular rs10280101, rs7787082, rs4148739, rs11983225, rs10248420 y/o rs12720067.

12. Uso según la reivindicación 11, comprendiendo la composición o el kit un cebador o una sonda que se hibrida al gen ABCB1 humano y que permite una determinación específica de dicho polimorfismo, o que comprende al menos un cebador y/o una sonda adicional para determinar al menos un polimorfismo adicional en desequilibrio de ligamiento con rs4148740, en particular al menos un cebador o una sonda adicional para determinar al menos un polimorfismo seleccionado del grupo que consiste en rs2235067, rs2032583, rs2235040, y rs2235015.

13. Uso de una micromatriz en el procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, comprendiendo la micromatriz un soporte sobre el cual se inmoviliza al menos una sonda para determinar al menos un polimorfismo en el gen ABCB1 en dicho paciente que está asociado con una respuesta clínica atrasada, parcial, subóptima o ausente de dicho medicamento, estando dicha sonda destinada a determinar el polimorfismo rs4148740, y estando al menos una sonda adicional inmovilizada sobre dicho soporte a fin de determinar al menos un polimorfismo

adicional en el gen ABCB1, en particular rs10280101, rs7787082, rs4148739, rs11983225, rs10248420 y/o rs12720067.

14. Uso según la reivindicación 13, en el que al menos un polimorfismo adicional, en particular al menos un polimorfismo adicional seleccionado del grupo que consiste en rs2235067, rs2032583, rs2235040, y rs2235015 está en desequilibrio de ligamiento con al menos uno de dichos primeros polimorfismos.