Moduladores del activador del factor de crecimiento de hepatocitos.

Anticuerpo aislado que se une al activador del factor de crecimiento de hepatocitos (HGFA) humano y bloquea laactividad proteolítica de HGFA,

en el que el anticuerpo comprende una secuencia de CDR de la cadena pesada quecomprende las secuencias de H1, H2 y H3 respectivas de un grupo seleccionado de SEQ ID NOS: 3 - 5, SEQ IDNOS: 6 - 8, SEQ ID NOS: 9 - 11, SEQ ID NOS: 21 - 23, SEQ ID NOS: 30 - 32, SEQ ID NOS: 36 - 38 o SEQ ID NOS:39 - 41, y comprende una secuencia de CDR de la cadena ligera que comprende las secuencias de L1, L2 y L3 deSEQ ID NO: 54 o un dominio variable de la cadena ligera que tiene la secuencia como se muestra en SEQ ID NO:45, y en el que el anticuerpo bloquea la proteólisis por HGFA de HGF monocatenario y bloquea la proteólisis porHGFA del sustrato de molécula pequeña metanosulfonil-D-ciclohexilalanil-butil-arginina-paranitroanilida (FVIIa).

Moduladores del activador del factor de crecimiento de hepatocitos

CAMPO TÉCNICO

La presente invención se refiere generalmente a los campos de la molecular biología y la regulación de factores de crecimiento. Más específicamente, la invención se refiere a moduladores de la función del activador del factor de crecimiento de hepatocitos, y usos de dichos moduladores.

ANTECEDENTES

El factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) promueve la proliferación, migración, angiogénesis, supervivencia y morfogénesis celular activando el receptor tirosina cinasa Met (revisado en 8, 9) . Además de su importancia en la fisiología normal, la ruta HGF/Met participa en el crecimiento tumoral invasivo y metástasis tumorales (8) . El HGF tiene alta similitud con el plasminógeno de serina proteasas y está compuesto por una cadena a que contiene un dominio N y cuatro dominios Kringle y una cadena 1 con homología a proteasas similares a quimiotripsina. Se secreta en la matriz extracelular como un precursor monocatenario inactivo (pro-HGF) y requiere la escisión por activación en Arg494 - Val495 para formar el heterodímero a/1 ligado por disulfuro biológicamente competente (10 - 13) . Esta etapa está mediada por pro-HGF que convierte serina proteasas tales como activador del factor de crecimiento de hepatocitos (HGFA) (14) . El HGFA se inhibe por inhibidores de tipo Kunitz expresados sobre la superficie celular tales como las dos variantes de corte y empalme del inhibidor del activador del factor de crecimiento de hepatocitos HAI-1 (16 - 17) y HAI-1B (15) y por HAI-2 (18) . HAI-2 (también conocida como bikunina placentaria) (19) también inhibe potentemente el factor XIa y la calicreína del plasma (20) , mientras que HAI-1B tiene poca o ninguna actividad inhibidora (15) . Por tanto, la disponibilidad biológica del conjunto de pro-HGF en la matriz extracelular está regulada por las actividades de pro-HGF convertasas tales como HGFA y sus inhibidores.

Como la activación de pro-HGF requiere la escisión por una convertasa tal como HGFA, la modulación de la función de HGFA y/o su interacción con su sustrato podría demostrar ser una solución terapéutica eficaz. A este respecto, hay una clara necesidad de identificar agentes clínicamente relevantes que puedan modular la actividad de y/o interaccionar específicamente con HGFA. La invención satisface esta necesidad y proporciona otros beneficios.

El anticuerpo monoclonal P1-4 es conocido en la técnica por inhibir el procesamiento de HGF por HGFA (Kataoka y col.; CANCER RESEARCH, vol. 60, páginas 6148 - 6159, 2000; Miyazawa y col.; JBC, vol. 271, nº 7, páginas 3615 - 3618, 1996) .

DIVULGACIÓN DE LA INVENCIÓN

La invención se refiere a procedimientos, composiciones, kits y artículos de fabricación para modular la función del activador del factor de crecimiento de hepatocitos (HGFA) , modulando así efectos fisiológicos de la actividad de HGFA. La modulación de la función de HGFA puede efectuarse usando anticuerpos como se describen en el presente documento.

La invención se refiere a moléculas de modulador que pueden usarse para modular la función de HGFA. La función de HGFA se modula mediante la inhibición de la actividad de HGFA (por ejemplo, actividad proteolítica) . Generalmente, las moléculas de modulador comprenden un anticuerpo como se describe en el presente documento. Las moléculas de modulador pueden efectuar la modulación tanto directamente (por ejemplo, por unión a HGFA e interfiriendo con la actividad proteolítica de HGFA) como indirectamente (por ejemplo, eligiendo como diana / dirigiendo un agente activo para HGFA en un tejido o célula, en el que el agente activo puede interferir con la actividad proteolítica de HGFA) . En un aspecto, la invención proporciona una molécula antagonista que comprende un anticuerpo que se une a HGFA, en la que la unión del antagonista a HGFA interfiere con la actividad proteolítica de HGFA como se define en las reivindicaciones. La unión del antagonista a HGFA interfiere con la activación de HGF por HGFA. En una realización, el anticuerpo se une al sitio activo de HGFA. En una realización, el anticuerpo se une a HGFA en una posición distinta del sitio activo de HGFA (por ejemplo, un exositio) . En una realización, la unión del anticuerpo a HGFA en una posición distinta del sitio activo de HGFA inhibe la interacción de HGFA con su molécula de sustrato. En una realización, la unión del anticuerpo a HGFA en una posición distinta del sitio activo de HGFA inhibe la actividad proteolítica de HGFA.

En un aspecto, la invención proporciona antagonistas que alteran la ruta de señalización HGF/c-met. Por ejemplo, la invención proporciona un anticuerpo que inhibe la escisión por HGFA de proHGF (por ejemplo, escisión en la posición R494-V495) . El anticuerpo puede ejercer su función inhibidora en cualquier número de formas que incluyen, pero no se limitan a, unión a HGFA en su sitio activo y/o en un sitio distinto del sitio activo (por ejemplo, un exositio) de forma que se inhiba la escisión por HGFA de proHGF. La molécula puede unirse a HGFA en forma complejada o sin complejar. La molécula también puede ejercer su función inhibidora interfiriendo con uno o más aspectos del proceso de activación de HGF. Por ejemplo, una molécula antagonista puede unirse al complejo HGFA-proHGF de forma que se inhiba la escisión de proHGF. La unión de la molécula a proHGF o HGFA (individualmente o en complejo) puede inhibir la liberación de HGF posterior a la escisión por HGFA. Una molécula antagonista puede no inhibir la unión de HGF a c-met. Por ejemplo, una molécula antagonista de la invención no es un anticuerpo o fragmento del mismo que tiene capacidad inhibidora y/o de unión similar como el anticuerpo producido por la línea celular de hibridoma depositada bajo el número de acceso de la Colección americana de cultivos tipo ATCC HB-11894 (hibridoma 1A3.3.13) o HB-11895 (hibridoma 5D5.11.6) . Una molécula antagonista de la invención inhibe actividades biológicas asociadas a la activación de HGF/c-met.

En un aspecto, la invención proporciona un anticuerpo según las reivindicaciones que comprende una región CDR-H1 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 3, 6, 9, 21, 30, 36 ó 39. En un aspecto, la invención proporciona un anticuerpo según las reivindicaciones que comprende una región CDR-H2 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 4, 7, 10, 22, 31, 37 ó 40. En un aspecto, la invención proporciona un anticuerpo según las reivindicaciones que comprende una región CDR-H3 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 5, 8, 11, 23, 32, 38 ó 41. En una realización, la invención proporciona un anticuerpo según las reivindicaciones que comprende una región CDR-H1 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 3, 6, 9, 21, 30, 36 ó 39, y una región CDR-H2 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 4, 7, 10, 22, 31, 37 ó 40. En una realización, la invención proporciona un anticuerpo según las reivindicaciones que comprende una región CDR-H1 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 3, 6, 9, 21, 30, 36 ó 39, y una región CDR-H3 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 5, 8, 11, 23, 32, 38 ó

41. En una realización, la invención proporciona un anticuerpo según las reivindicaciones que comprende una región CDR-H2 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 4, 7, 10, 22, 31, 37 ó 40, y una región CDR-H3 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 5, 8, 11, 23, 32, 38 ó 41. En una realización, la invención proporciona un anticuerpo según las reivindicaciones que comprende una región CDR-H1 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 3, 6, 9, 21, 30, 36 ó 39, una región CDR-H2 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 4, 7, 10, 22, 31, 37 ó 40, y una región CDR-H3 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 5, 8, 11, 23, 32, 38 ó 41.

En un aspecto, la invención proporciona un anticuerpo según las reivindicaciones que comprende las tres siguientes:

(i) una secuencia de CDR-H1 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 3;

(ii) una secuencia de CDR-H2 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 4;

(iii) una secuencia de CDR-H3 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 5.

En un aspecto, la invención proporciona un anticuerpo según las reivindicaciones que comprende las tres siguientes:

(i) una secuencia de CDR-H1 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 6;

(ii) una secuencia de CDR-H2 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 7;

(iii) una secuencia de CDR-H3 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 8.

En un aspecto, la invención proporciona un anticuerpo según las reivindicaciones que comprende las tres siguientes:

(i) una secuencia de CDR-H1 que comprende la secuencia de SEQ ID... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo aislado que se une al activador del factor de crecimiento de hepatocitos (HGFA) humano y bloquea la actividad proteolítica de HGFA, en el que el anticuerpo comprende una secuencia de CDR de la cadena pesada que comprende las secuencias de H1, H2 y H3 respectivas de un grupo seleccionado de SEQ ID NOS.

3. 5, SEQ ID NOS.

6. 8, SEQ ID NOS.

9. 11, SEQ ID NOS.

21. 23, SEQ ID NOS.

30. 32, SEQ ID NOS.

36. 38 o SEQ ID NOS.

39. 41, y comprende una secuencia de CDR de la cadena ligera que comprende las secuencias de L1, L2 y L3 de SEQ ID NO: 54 o un dominio variable de la cadena ligera que tiene la secuencia como se muestra en SEQ ID NO: 45, y en el que el anticuerpo bloquea la proteólisis por HGFA de HGF monocatenario y bloquea la proteólisis por HGFA del sustrato de molécula pequeña metanosulfonil-D-ciclohexilalanil-butil-arginina-paranitroanilida (FVIIa) .

2. Anticuerpo de la reivindicación 1, que inhibe la señalización HGF/c-met.

3. Anticuerpo de la reivindicación 2, que inhibe la proliferación celular.

4. Anticuerpo de la reivindicación 2, que inhibe la angiogénesis.

5. Anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 4, en el que las secuencias de H1, H2 y H3 son como se representan en SEQ ID NOS: 71, 85 y 99, SEQ ID NOS: 72, 86 y 100, SEQ ID NOS: 73, 87 y 101, SEQ ID NOS: 77, 91 y 105, SEQ ID NOS: 80, 94 y 108, SEQ ID NOS: 82, 96 y 110 o SEQ ID NOS: 83, 97 y 111.

6. Anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 4, en el que el anticuerpo comprende una secuencia de CDR de la cadena pesada que comprende las secuencias de H1, H2 y H3 respectivas de un grupo seleccionado de SEQ ID NOS.

21. 23 o SEQ ID NOS.

30. 32.

7. Anticuerpo de la reivindicación 5, en el que las secuencias de H1, H2 y H3 son como se representan en SEQ ID NOS: 77, 91 y 105 o SEQ ID NOS: 80, 94 y 108.

8. Anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que el anticuerpo comprende un dominio variable de la cadena ligera que tiene la secuencia como se muestra en SEQ ID NO: 54.

9. Anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes para su uso en un procedimiento para tratar una enfermedad asociada a la desregulación de la señalización HGF/c-met en un sujeto, en el que la enfermedad es cáncer, tumor, un trastorno proliferativo celular, un trastorno inmunitario y/o un trastorno relacionado con angiogénesis.

10. Uso de un anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes en la fabricación de un medicamento para tratar una enfermedad asociada a desregulación de la señalización HGF/c-met en un sujeto, en el que la enfermedad es cáncer, tumor, un trastorno de células proliferativas, un trastorno inmunitario y/o un trastorno relacionado con angiogénesis.

11. Anticuerpo para su uso según la reivindicación 9 o uso según la reivindicación 10, en el que la enfermedad es cáncer.

12. Anticuerpo para su uso según la reivindicación 9 o uso según la reivindicación 10, en el que la enfermedad es un trastorno relacionado con angiogénesis.

13. Anticuerpo para su uso según la reivindicación 9 o uso según la reivindicación 10, en el que la enfermedad es un trastorno inmunitario.