Procedimiento para la predicción de un riesgo de reacciones adversas a medicamentos mediante la determinación de HLA-B 1502.

Un procedimiento para evaluar, en un paciente humano, el riesgo a desarrollar una reacción adversa a unmedicamento en respuesta a un fármaco,

que comprende

detectar la presencia de HLA-B*1502 en una muestra obtenida del paciente y

correlacionar la presencia de HLA-B*1502 en la muestra con un riesgo aumentado de desarrollo de una reacciónadversa a un medicamento en el paciente en respuesta al fármaco, en el que la reacción adversa a un medicamentoes el síndrome de Stevens-Johnson o necrólisis epidérmica tóxica y el fármaco es oxcarbazepina o licarbazepina.

Procedimiento para la predicción de un riesgo de reacciones adversas a medicamentos mediante la determinación de HLA-B 1502

Antecedentes Una reacción adversa a un medicamento (RAM) es un efecto no deseado y no intencionado de un fármaco. En particular, una reacción adversa a un medicamento se produce a dosis utilizadas para profilaxis, diagnóstico o tratamiento. De acuerdo con un meta-análisis ampliamente citado, las RAM se clasificaron entre la cuarta y la sexta causa de muerte más frecuente (Lazarou et al, JAMA, 279 (15) : 1200-1205, 1998) . Las RAM cutáneas representan aproximadamente el 2-3 % de todos los ingresos hospitalarios (Bigby et al. JAMA, 256 (24) :3358-3363, 1986) . Van desde exantema maculopapular (EMP) leve, con intensidad creciente, hasta RAM potencialmente mortales, tales como el síndrome de hipersensibilidad (SHS) , el síndrome de Stevens-Johnson (SSJ) y la necrólisis epidérmica tóxica (NET, síndrome de Lyell) . La tasa de mortalidad de esta última puede ser de hasta del 40 %.

El SHS se caracteriza por afectación multiorgánica (por ejemplo, hepatitis o nefritis) acompañado de manifestaciones sistémicas (por ejemplo, fiebre, artralgia, eosinofilia y adenopatías) además de la erupción cutánea (Roujeau et al. N. Eng.) . J. Med., 331: 1272-1285, 1994) . El SSJ y la NET son trastornos de hipersensibilidad mediados por complejos inmunitarios que se caracterizan por un rápido desarrollo de exantema vesicular de máculas púrpuras y lesiones tipo diana acompañado de afectación muscular y desprendimiento de la piel (Roujeau et al. J Invest Dermatol, 1994,

102:218 S-30S) . Estos están causados principalmente por fármacos, tales como sulfonamidas, anticonvulsionantes, alopurinol, antiinflamatorios no esteroideos y antipalúdicos (Roujeau et al., N. Engl. J. Med., 333 (24) :1600-1607, 1995) . En Taiwán, los anticonvulsionantes (por ejemplo, CBZ, fenitoína y fenobarbital) y alopurinol son los medicamentos que con más frecuencia causan SSJ/NET.

La evolución reciente de la farmacogenómica ha implicado que la susceptibilidad a las RAM está asociada con determinados alelos génicos. Por ejemplo, se ha descubierto que los polimorfismos genómicos del gen de la tiopurina metiltransferasa están estrechamente relacionados con las RAM inducidas por azatioprina, un fármaco para enfermedades reumatológicas o cancerosas (Yates et al., Ann. Intern. Med., 126 (8) :608-614, 1997) . También se ha sugerido que la susceptibilidad al SSJ/NET/SHS inducida por ciertos fármacos está determinada genéticamente (Gennis MA. Am. J. Med., 91 (6) :631-634, 1991: Edwards SG, Postgrad. Med. J., 75 (889) :680-681, 1999) . Sin embargo, aún no se han identificado los factores genéticos responsables exactos.

Chung WH et al, Nature, vol. 428 (6982) , p. 486, (2004) y el documento US-A-2005/100926 divulgan ambos que HLA-B1502 se asocia significativamente con SSJ/NET inducido por carbamazepina.

Estos estudios de farmacogenómica sugieren que la detección de alelos asociados a RAM en un paciente es un enfoque útil para evaluar si ese paciente está en riesgo de desarrollar RAM. Este tipo de diagnóstico molecular certificado por Clinical Laborator y Improvement Amendments se ofrece ahora por los laboratorios de referencia en los EE.UU. y Europa.

Para determinar la presencia de un alelo genético particular, es necesario detectar uno de los nucleótidos más específicos de alelos. En muchos casos, hay que dirigirse a múltiples regiones dentro del alelo para lograr una determinación exacta. Por ejemplo, los procedimientos actualmente disponibles para la determinación de un alelo HLA-B (por ejemplo, HLA-B*1502 o HLA-B*5801) requiere la detección de al menos 6 regiones dentro de ese alelo.

Sumario de la invención La presente invención proporciona un procedimiento de predecir el riesgo de un paciente de desarrollar reacciones adversas a los medicamentos, particularmente SSJ, NET o SHS. Se descubrió que el HLA-B*1502 está asociado al SSJ/NET inducido por diversos fármacos, por ejemplo, carbamazepina (CBZ) . Además, HLA-B*5801 se asocia particularmente con SSJ/NET inducido por alopurinol. HLA-B*5801 se asocia también con SHS inducido por alopurinol. Reacciones cutáneas más leves inducidas por CBZ, tales como exantema maculopapular, eritema multiforme, urticaria y exantema fijo medicamentoso, están particularmente asociados con HLA-B*4601.

En consecuencia, la presente solicitud proporciona un procedimiento para evaluar el riesgo de un paciente de acuerdo con las reivindicaciones.

Un alelo genético puede ser detectado por detección directa de regiones/nucleótidos dentro del alelo utilizando los ADN genómicos preparados a partir de muestras biológicas, por ejemplo, sangre, saliva, orina o cabello. El alelo también se puede detectar mediante, por ejemplo, procedimientos serológicos o de microcitotoxicidad. También se puede determinar mediante la detección de un marcador genético equivalente del alelo, que puede ser, por ejemplo, un SNP (polimorfismo de un solo nucleótido) , un marcador microsatélite u otros tipos de polimorfismos genéticos. En otras palabras, la presencia del haplotipo HLA-B*1502, el lugar del alelo per se, es indicativo de un riesgo de reacciones adversas a los medicamentos. Ejemplos de marcadores genéticos equivalentes al haplotipo HLA-B*1502 incluyen DRB1*1202, Cw*080, 1, Cw*0806, A*1101 y MICA*019.

Se divulga un procedimiento para la determinación del perfil farmacogenómico. Este procedimiento incluye la determinación de la presencia de al menos un alelo HLA-B seleccionado del grupo que consiste en HLA-B*1502, HLA-B*5801 y HLA-B*4601. Se puede determinar la presencia de al menos dos alelos seleccionados del grupo, tales como HLA-B*1502 y HLA-B*5801 o la presencia de los tres alelos. El procedimiento puede comprender, opcionalmente, la determinación de otros factores genéticos. Esos otros factores genéticos pueden estar asociados con la predisposición a cualquier enfermedad o trastorno médico, incluyendo las RAM. Por ejemplo, estos otros factores genéticos se pueden seleccionar del grupo que consiste en tiopurina metiltransferasa y los genes del síndrome de QT largo.

Se divulga un procedimiento para determinar si un paciente es portador de HLA-B*1502 o HLA-B*5801. Este procedimiento incluye las etapas de: (1) detectar una primera región seleccionada de cualquiera de las Regiones 1-6 de HLA-B*1502 o las Regiones 1-6 de HLA-B*5801, (2) detectar una segunda región seleccionada de cualquiera de las Regiones 1-6 de HLA-B*1502 o las Regiones 1-6 de HLA-B*5801, siendo la segunda región diferente de la primera región y (3) determinar si el paciente es portador del alelo de interés, indicando la presencia de la primera y segunda regiones que el paciente es portador de HLA-B*1502 o HLA-B*5801. Estas regiones pueden ser detectadas por PCR en tiempo real o ensayo de hibridación competitiva de oligonucleótido específico de secuencia junto con ELISA (CSSO-ELISA) . En un ejemplo, la detección de dos regiones seleccionadas de las Regiones 1-6 de HLAB*1502 o de las regiones 1-6 de HLA-B*5801 es suficiente para determinar la presencia o ausencia de los alelos HLA-B*1502 o HLA-B*5801. Alternativamente, se detectan tres o más regiones dentro de HLA-B*1502 o HLA-B*580.

La detección de la Región 1, la Región 2, la Región 3 y de HLA-B*1502 se puede lograr, respectivamente, mediante la identificación de los nucleótidos en las posiciones 1 y 3 de la Región 1, en las posiciones 1 y 6 de la Región 2 y en las posiciones 1 y 3 de la Región 3 (incluyendo los nucleótidos en la cadena sentido o en la cadena antisentido en estas posiciones) .

La detección de las Regiones 1-6 de HLA-B*5801 se puede lograr, respectivamente, mediante la identificación de los nucleótidos en las posiciones 1, 2 y 5 en la Región 1, en las posiciones 1, 4, 6, 7, 8, 15, 16, y 20 en la Región 2, en las posiciones 2, 4, 5, 8, y 9 en la Región 3, en las posiciones 3 y 5 en la Región 4, en las posiciones 1 y 9 en la Región 5 y en las posiciones 3 y 10 en la Región 6.

Se divulga un kit para detectar un alelo genético, por ejemplo, HLA-B*1502 o HLA-B*5801. Este kit puede contener una primera sonda y una segunda sonda, cada una dirigida a una región seleccionada de las Regiones 1-6 de HLAB*1502 o las Regiones 1-6 de HLA-B*5801. Las dos sondas se dirigen a diferentes regiones. El kit puede incluir además una tercera sonda que se dirige a un alelo de control interno. También puede incluir una o más sondas adicionales para la detección de una o más regiones adicionales dentro de HLA-B*1502 o HLA-B*5801.

También se divulga un procedimiento para determinar si un compuesto es un candidato que induce una RAM (por ejemplo, SSJ/NET, SHS o una RAM cutánea más... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para evaluar, en un paciente humano, el riesgo a desarrollar una reacción adversa a un medicamento en respuesta a un fármaco, que comprende detectar la presencia de HLA-B*1502 en una muestra obtenida del paciente y

correlacionar la presencia de HLA-B*1502 en la muestra con un riesgo aumentado de desarrollo de una reacción adversa a un medicamento en el paciente en respuesta al fármaco, en el que la reacción adversa a un medicamento es el síndrome de Stevens-Johnson o necrólisis epidérmica tóxica y el fármaco es oxcarbazepina o licarbazepina.

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el fármaco es oxcarbazepina.

3. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el fármaco es licarbazepina.

4. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 - 3, en el que la muestra obtenida del paciente es una muestra de ADN.

5. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que la presencia del alelo de HLA se determina mediante hibridación con un oligonucleótido que se hibrida específicamente con el alelo.

6. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que la muestra obtenida del paciente es una 15 muestra de ARN o una muestra de proteína.

7. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que la muestra se obtiene de sangre periférica, saliva, orina o de cabello del paciente.

8. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que la reacción adversa a un medicamento es el síndrome de Stevens-Johnson.

9. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en el que la reacción adversa a un medicamento es necrólisis epidérmica tóxica.