Inhibición del factor B, de la vía alternativa del complemento y métodos relacionados.

Un anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que se une a antígeno que se une selectivamente al factor B dentro del tercer dominio de la repetición corta de consenso (SCR) y que se une selectivamente al factor B procedente de al menos ser humano y ratón,

en donde el anticuerpo o un fragmento del mismo que se une a antígeno evita la formación de un complejo C3bBb.

Inhibición del factor B, de la via alternativa del complemento y metodos relacionados

Campo de la invención Esta invención se refiere en general a nuevos inhibidores de la via alternativa del complemento y, en particular, a nuevos anticuerpos anti-factor B. La invención tambien se refiere en general al uso de tales inhibidores para reducir

o prevenir la hiperreactividad de las vias respiratorias y la inflamación de las vias respiratorias y tratar de ese modo enfermedades en las que tales afecciones tienen una función.

Antecedentes de la Invención La activación del complemento se produce principalmente a traves de tres vias: la denominada via clasica, la via de las lectinas y la via alternativa. Las principales proteinas implicadas en la activación de la via alternativa son el factor B (fB) y el factor D (fD) . Estas proteinas actuan conjuntamente para iniciar y/o para amplificar la activación de C3, lo que conduce entonces a la iniciación de una serie de eventos inflamatorios. Una tercera proteina, properdina, estabiliza el complejo de C3 y el factor B, pero no es absolutamente necesaria para que funcione la via alternativa. El factor B tambien ayuda a solubilizar complejos inmunes, se ha notificado que actua como un factor de crecimiento de los linfocitos B y puede activar los monocitos (Takahashi, 1980; Hall, 1982; Peters, 1988) . Se han generado ratones carentes del factor B (ratones fB-/-) y la respuesta del anticuerpo IgG1 frente a antigenos dependientes de linfocitos T y la sensibilidad al choque endot6xico parecen normales en estos ratones (Matsumoto, 1997) .

La via alternativa del complemento se inicia generalmente a traves de bacterias, parasitos, virus u hongos, aunque los Acs IgA y ciertas cadenas L de la Ig tambien se ha descrito que activan esta via. La activación de la via alternativa se inicia cuando el factor B circulante se une a C3 activado (ya sea C3b o C3H20) . Este complejo se escinde a continuación, a traves de factor D circulante, para proporcionar un fragmento enzimaticamente activo, C3Bb. C3Bb escinde C3 que genera C3b, el cual dirige la inflamación y tambien amplifica adicionalmente el proceso de activación, generando un bucle de retroalimentación positiva. Se requieren ambos componentes (el factor B y el factor D) para permitir la activación de la via alternativa.

Estudios recientes han mostrado que la via alternativa del complemento desempefa un papel importante en la patogenesis de varios modelos animales de enfermedad. La activación del complemento dentro del rif6n despues de I/R esta mediada casi exclusivamente por la via alternativa (Thurman) y la via alternativa tiene un papel decisivo en el desarrollo de la artritis. Tal vez lo mas sorprendente es que se ha mostrado que ratones carentes de la via alternativa estan protegidos contra la nefritis en el modelo MRL/lpr de nefritis lupica (Watanabe) y contra la perdida fetal mediada por antifosfolipidos (Girardi) , modelos en los que se habia asumido tradicionalmente que estaban mediados por la via clasica del complemento.

Ya se han desarrollado varios inhibidores para inhibir el sistema del complemento en diversas fases de activación (Holers) , aunque no se han descrito ampliamente inhibidores especificos de la via alternativa antes de la presente invención. El documento de publicación PCT W0 01/47963, publicado el 4 de julio de 2001, describe polipeptidos procedentes de sanguijuelas ectoparasitas que inhiben la via alternativa de activación del complemento in vitro y que no tienen sustancialmente ningun efecto sobre la activación del complemento por la ruta clasica. Se mostró que estos peptidos se unen al factor D; sin embargo, no se mostró ninguna aplicación in vivo de estos polipeptidos. Un reactivo con la capacidad de inhibir especificamente la via alternativa in vivo tendria te6ricamente varias ventajas, en comparación con los inhibidores existentes de la cascada del complemento. En primer lugar, para modelos tales como la I/R renal y la perdida fetal mediada y antifosfolipidos, que estan mediadas principalmente por la via alternativa, un inhibidor de este tipo deberia ser igualmente eficaz como inhibidor universal del complemento, sin embargo, deberia tener menos efectos secundarios inmunosupresores. Aunque solo se ha descrito un paciente humano con carencia congenita del factor B (Densen) , estudios de genes dirigidos a ratones carentes del factor B (fB-/-) aun no han demostrado un efecto inmunomodulador de este factor (Densen; Matsumoto) . Los pacientes con carencias congenitas de los componentes de la via clasica, por el contrario, parecen tener un mayor riesgo de infección (mas comunmente estafilococos y estreptococos) . La inhibición de los componentes de la via clasica o C3 (comun a todas las vias del complemento) tambien podria estar asociada con la autoinmunidad (Figueroa) , quizas explicando por que la carencia de factor B protege a los ratones MRL/lpr de desarrollar glomerulonefritis, pero la carencia de C3 no lo hace (Watanabe) . Por lo tanto, la inhibición de la via alternativa se puede tolerar mejor y en algunos casos de forma mas eficaz que la inhibición de la via clasica del complemento.

El asma alergica es un sindrome comun asociado con la inflamación y la hiperreactividad de las vias respiratorias (AHR) (Busse) . En los pacientes con asma alergica, la exposición a un alergeno inhalado conduce a un incremento de la AHR y la inflamación de las vias respiratorias y unos estudios han mostrado niveles incrementados de fragmentos biológicamente activos obtenidos a partir de la familia de proteinas C3, C4 y C5 del complemento, especialmente C3a (Humbles) y C5a (Krug) en el fluido del lavado broncoalveolar (BAL) . Esto sugiere que en estos pacientes, despues de la exposición al alergeno, la activación de la via del complemento a traves de un mecanismo inducido por alergeno se produce en el pulmón. Los modelos animales han aportado una mayor comprensión de la función del complemento en el desarrollo de una enfermedad alergica de las vias respiratorias. Animales carentes de receptores de C3 o C3a parecen estar protegidos contra el desarrollo de una enfermedad de las vias respiratorias inducida por alergeno (Humbles, Drouin; Bautsch; Walters) .

Se han propuesto diversas posibilidades diferentes para inducir la activación del complemento despues de una exposición a alergeno. Por ejemplo, los complejos inmunes de alergeno-IgG podrian desencadenar la activación de la via clasica y ciertos antigenos pueden activar directamente C3 a traves de la via alternativa (Kohl) . Ademas, la triptasa neutra liberada por los mastocitos o los macrófagos pulmonares puede escindir de forma directa (proteolitica) C3 o C5 (Schwartz; Mulligan) . Las tres vias de activación del complemento (clasica, alternativa y lectina) convergen en el componente central del complemento C3. Por lo tanto, la inhibición de la activación de C3 impide la escisión en fragmentos C3 activos, pero tambien reduce en gran medida la activación posterior de C5 y la liberación de fragmentos activados obtenidos a partir de C5 (Sahu) . Estudios recientes han mostrado que la inhibición de la activación del complemento durante la exposición de animales sensibilizados a alergenos mediante el uso de inhibidores de la convertasa C3, y por lo tanto la inhibición de las tres vias de activación, reduce la respuesta tardia de las vias respiratorias (Abe) , asi como el desarrollo de AHR y la inflamación de las vias respiratorias (Taube) . El documento de publicación PCT n° W0 2004/022096, publicado el 18 de marzo de 2004, describe la inhibición de la via del complemento, preferentemente a traves de los componentes terminales del complemento de C5-C9 que participan en todas las vias y, lo mas preferiblemente, a traves de la inhibición de C5a.

Actualmente, la terapia para el tratamiento de enfermedades inflamatorias que implican AHR, tales como el asma de moderada a grave y la enfermedad pulmonar obstructiva crónica, implica predominantemente el uso de glucocorticosteroides y otros agentes antiinflamatorios. Estos agentes, sin embargo, tienen el peligro de efectos secundarios graves, incluyendo, pero no limitados a, aumento de la susceptibilidad a una infección, toxicidad hepatica, enfermedad pulmonar inducida por farmacos y supresión de la medula ósea. Por lo tanto, tales farmacos estan limitados en su uso clinico para el tratamiento de enfermedades pulmonares asociadas con la hiperreactividad de las vias respiratorias. El uso de reactivos antiinflamatorios y de alivio sintomatico es un problema grave debido a sus efectos secundarios o a su deficiencia para atacar la causa subyacente de una respuesta inflamatoria. Existe una necesidad constante de reactivos menos perjudiciales y mas eficaces para el tratamiento de la inflamación. Por lo tanto, sigue existiendo... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que se une a antigeno que se une selectivamente al factor B dentro del tercer dominio de la repetición corta de consenso (SCR) y que se une selectivamente al factor B procedente de al menos ser humano y ratón, en donde el anticuerpo o un fragmento del mismo que se une a antigeno evita la formación de un complejo C3bBb.

2. El anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que se une a antigeno segun la reivindicación 1, en el que el anticuerpo o un fragmento del mismo que se une a antigeno se une al factor B y evita o inhibe la escisión del factor B por el factor D.

3. El anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que se une a antigeno segun la reivindicación 1, en el que el anticuerpo o el fragmento que se une a antigeno se une al tercer dominio de la repetición corta de consenso (SCR) del factor B humano.

4. El anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que se une a antigeno segun la reivindicación 1, en el que el anticuerpo o un fragmento del mismo que se une a antigeno se une selectivamente a un epitopo en el tercer dominio de SCR del factor B seleccionado entre el grupo que consiste en:

(a) un epitopo del factor B que incluye al menos una porción del factor B humano (SEQ ID N0: 2) que comprende desde la posición Tyr139 hasta la posición Ser185, o posiciones equivalentes a las mismas en una secuencia de factor B no humano;

(b) un epitopo del factor B que incluye al menos una porción del factor B humano (SEQ ID N0: 2) que comprende desde la posición Tyr139 hasta la posición Ser141, o posiciones equivalentes a las mismas en una secuencia de factor B no humano;

(c) un epitopo del factor B que incluye al menos una porción del factor B humano (SEQ ID N0: 2) que comprende desde la posición Glu182 hasta la posición Ser185, o posiciones equivalentes a las mismas en una secuencia de factor B no humano; y

(d) un epitopo del factor B que incluye al menos una porción del factor B humano (SEQ ID N0: 2) que comprende una cualquiera o varias de las siguientes posiciones o de sus posiciones equivalentes en una secuencia de factor B no humano: Tyr139, Cys140, Ser141, Glu182, Gly184 o Ser185.

5. El anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que se une a antigeno segun la reivindicación 1, en el que el anticuerpo es de una subclase o de un isotipo que no activa el complemento.

6. El anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que se une a antigeno segun la reivindicación 1, en el que el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.

7. El anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que se une a antigeno segun la reivindicación 1, en el que el fragmento que se une a antigeno es un fragmento Fab.

8. El anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que se une a antigeno segun la reivindicación 1, en el que el anticuerpo es un anticuerpo humanizado.

9. El anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que se une a antigeno segun la reivindicación 1, en el que el anticuerpo es un anticuerpo biespecifico.

10. El anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que se une a antigeno segun la reivindicación 1, en el que el anticuerpo es un anticuerpo monovalente.

11. El anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que se une a antigeno segun la reivindicación 1, en el que el anticuerpo es el anticuerpo monoclonal 1379 producido por la ATCC n° de depósito PTA-6230.

12. El anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que se une a antigeno segun la reivindicación 1, en el que el anticuerpo o el fragmento del mismo que se une a antigeno se une al factor B en el mismo epitopo que el anticuerpo monoclonal 1379 producido por la ATCC n° de depósito PTA-6230.

13. Un anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que se une a antigeno que se une selectivamente al factor B, en el que el anticuerpo o el fragmento del mismo que se une a antigeno evita la formación de un complejo C3bBb; en donde el anticuerpo o el fragmento del mismo que se une a antigeno inhibe competitivamente la unión especifica del anticuerpo monoclonal 1379 producido por el depósito de la ATCC n° PTA-6230 con el factor B humano y de ratón; y en el que, cuando el anticuerpo o un fragmento del mismo que se une a antigeno se une al factor B humano, se inhibe la capacidad del anticuerpo monoclonal 1379 para inhibir la via alternativa del complemento.

14. El anticuerpo o un fragmento del mismo que se une a antigeno segun la reivindicación 13, en el que el anticuerpo o el fragmento del mismo que se une a antigeno inhibe competitivamente la unión del anticuerpo

monoclonal 1379 al factor B humano, en donde la especificidad de unión comparativa se determina por un ensayo de competencia anticuerpo-anticuerpo en presencia de factor B humano.

15. Un anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que se une a antigeno que se une selectivamente al factor B humano, en el que el anticuerpo o el fragmento del mismo que se une a antigeno evita la formación de un complejo C3bBb; en donde el anticuerpo aislado o el fragmento del mismo que se une a antigeno inhibe competitivamente la unión especifica de un segundo anticuerpo o un fragmento del mismo que se une a antigeno, al factor B humano; y en donde el segundo anticuerpo o el fragmento del mismo que se une a antigeno se une al tercer dominio de SCR del factor B humano, y se une selectivamente al factor B procedente de al menos ser humano y ratón.

16. Una composición que comprende el anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que se une a antigeno, segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15.

17. Un anticuerpo o un fragmento del mismo que se une a antigeno segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, para uso en un metodo para reducir o prevenir la hiperreactividad de las vias respiratorias (AHR) o la inflamación de las vias respiratorias en un animal que tiene hiperreactividad de las vias respiratorias asociada con inflamación o inflamación de las vias respiratorias o que tiene riesgo de desarrollarlas.

18. El anticuerpo o un fragmento que se une a antigeno segun la reivindicación 17, para el uso segun se ha reivindicado en la reivindicación 17, en donde el anticuerpo o el fragmento que se une a antigeno se administra al animal en una cantidad eficaz para reducir de forma medible la hiperreactividad de las vias respiratorias en el animal, en comparación con antes de la administración del anticuerpo o del fragmento que se une a antigeno.

19. El anticuerpo o un fragmento que se une a antigeno segun la reivindicación 17, para el uso segun se ha reivindicado en la reivindicación 17, en donde el anticuerpo o el fragmento que se une a antigeno se administra al animal en una cantidad eficaz para reducir de forma medible la hiperreactividad de las vias respiratorias en el animal, en comparación con el nivel de hiperreactividad de las vias respiratorias en una población de animales que tienen inflamación en la que no se administr6 el anticuerpo o el fragmento que se une a antigeno.

20. El anticuerpo o un fragmento que se une a antigeno segun la reivindicación 17, para el uso segun se ha reivindicado en la reivindicación 17, en donde la administración del anticuerpo o del fragmento que se une a antigeno disminuye la capacidad de respuesta del animal frente a metacolina o histamina.

21. El anticuerpo o un fragmento que se une a antigeno segun la reivindicación 17, para el uso segun se ha reivindicado en la reivindicación 17, en donde el anticuerpo o el fragmento que se une a antigeno se administra con un vehiculo farmaceuticamente adecuado seleccionado entre el grupo que consiste en: un polvo seco, dispersable; etanol anhidro; capsulas pequefas; liposomas; una pulverización nebulizada; y un excipiente inyectable.

22. El anticuerpo o un fragmento que se une a antigeno segun la reivindicación 17, para el uso segun se ha reivindicado en la reivindicación 17, en el que el anticuerpo o el fragmento que se une a antigeno se administra en un vehiculo o un dispositivo seleccionado entre el grupo que consiste en: etanol anhidro; un sistema de inhalación de polvo seco; un sistema de inhalación por ultrasonidos; un inhalador de dosis medida a presión; y un dispositivo de solución medida.

23. El anticuerpo o un fragmento que se une a antigeno segun la reivindicación 17, para el uso segun se ha reivindicado en la reivindicación 17, en el que dicho anticuerpo o fragmento que se une a antigeno se administra a dicho mamifero en combinación con un agente seleccionado entre el grupo que consiste en: corticosteroides, agonistas (de acción prolongada o corta) , modificadores de leucotrienos, antihistaminicos, inhibidores de fosfodiesterasas, cromoglicato de sodio, Nedocromil, teofilina, antagonistas de citocinas, antagonistas del receptor de citocinas, anti-IgE e inhibidores de la función de los linfocitos T.

24. El anticuerpo o un fragmento que se une a antigeno segun la reivindicación 17, para el uso segun se ha reivindicado en la reivindicación 17, en el que dicha hiperreactividad de las vias respiratorias o inflamación de las vias respiratorias esta asociada con una enfermedad seleccionada entre el grupo que consiste en asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EP0C) , aspergilosis broncopulmonar alergica, neumonia por hipersensibilidad, neumonia eosinofilica, enfisema, bronquitis, bronquitis alergica, bronquiectasia, fibrosis quistica, tuberculosis, neumonitis por hipersensibilidad, asma ocupacional, sarcoidosis, sindrome de enfermedad de las vias respiratorias reactivas, enfermedad pulmonar intersticial, sindrome hipereosinofilico, rinitis, sinusitis, asma inducida por el ejercicio, asma inducida por la contaminación, tos variante de asma, enfermedad pulmonar parasitaria, infección por el virus sincitial respiratorio (VSR) , infección por el virus de la parainfluenza (VPI) , infección por rinovirus (RV) e infección por adenovirus.

25. El anticuerpo o un fragmento que se une a antigeno segun la reivindicación 17, para el uso segun se ha reivindicado en la reivindicación 17, en el que la hiperreactividad de las vias respiratorias esta asociada con la inflamación alergica.

26. El anticuerpo o un fragmento que se une a antigeno segun la reivindicación 17, para el uso segun se ha

reivindicado en la reivindicación 17, en el que la hiperreactividad de las vias respiratorias o la inflamación de las vias respiratorias esta asociada con asma.

27. El anticuerpo o un fragmento que se une a antigeno segun la reivindicación 17, para el uso segun se ha reivindicado en la reivindicación 17, en el que la hiperreactividad de las vias respiratorias o la inflamación de las vias respiratorias esta asociada con EP0C.

28. El anticuerpo o un fragmento del mismo que se une a antigeno segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, para uso en un metodo para reducir o evitar la lesión por isquemia-reperfusión en un animal que tiene lesión por isquemia-reperfusión o que tiene el riesgo de desarrollarla.

29. El anticuerpo o un fragmento que se une a antigeno segun la reivindicación 28, para uso segun se reivindica en la reivindicación 28, en donde la lesión por isquemia-reperfusión es una lesión renal por isquemiareperfusión.

30. El anticuerpo o un fragmento que se une a antigeno segun la reivindicación 28, para uso segun se reivindica en la reivindicación 28, en donde el anticuerpo o el fragmento que se une a antigeno se administra al animal en una cantidad eficaz para inhibir de forma medible incrementos en el nitrógeno serico ureico en el animal en comparación con la ausencia de administración del anticuerpo o del fragmento que se une a antigeno.

31. El anticuerpo o un fragmento que se une a antigeno segun la reivindicación 28, para uso segun se reivindica en la reivindicación 28, en donde el anticuerpo o el fragmento que se une a antigeno se administra al animal en una cantidad eficaz para disminuir de forma medible la lesión histológica de los tejidos del rif6n del animal en comparación con la ausencia de administración del anticuerpo o del fragmento que se une a antigeno.

32. El anticuerpo o un fragmento que se une a antigeno segun una cualquiera de las reivindicaciones 17-31, para el uso segun se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 17-31, en donde el anticuerpo o el fragmento que se une a antigeno se administra a traves de una via seleccionada entre el grupo que consiste en las vias oral, nasal, t6pica, inhalada, intratraqueal, transdermica, rectal y parenteral.

33. El anticuerpo o un fragmento que se une a antigeno segun una cualquiera de las reivindicaciones 17-32, para el uso segun se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 17-32, en donde el animal es un mamifero.

34. El anticuerpo o un fragmento que se une a antigeno segun una cualquiera de las reivindicaciones 17-32, para el uso segun se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 17-32, en donde el animal es un ser humano.