Ensamblajes micelares.

Un ensamblaje micelar que comprende una pluralidad de copolímeros en bloque desestabilizantes demembrana celular,

comprendiendo el ensamblaje micelar un núcleo y una cubierta, en el que el núcleo comprendeuna pluralidad de bloques de núcleo de copolímeros en bloque desestabilizantes de membrana celular, en el que lacubierta comprende una pluralidad de bloques de cubierta de copolímeros en bloque desestabilizantes demembrana celular, en el que el bloque de núcleo es hidrófobo desestabilizante de membrana celular dependiente delpH que comprende una primera especie cargable que es aniónica a pH 6,6 a 7,6, siendo el bloque de núcleo unbloque de copolímero, y en el que el bloque de cubierta es hidrófilo a pH 6,6 a 7,6.

Ensamblajes micelares [0001] Esta solicitud reivindica el beneficio de la solicitud provisional de EE.UU. nº 61/052.908, presentada el 13 de mayo de 2008, la solicitud provisional de EE.UU. nº 61/052.914, presentada el 13 de mayo de 2008, la solicitud provisional de EE.UU. nº 61/091.294, presentada el 22 de agosto de 2008, la solicitud provisional de EE.UU. nº 61/112.048, presentada el 6 de noviembre de 2008, la solicitud provisional de EE.UU. nº 61/140.774, presentada el 24 de diciembre de 2008 y la solicitud provisional de EE.UU. nº 61/171.369, presentada el 21 de abril de 2009.

Campo de la invención [0002] Se describen en la presente memoria ensamblajes micelares formados a partir de polímeros y el uso de dichos ensamblajes micelares.

Antecedentes de la invención [0003] En ciertos casos, es beneficioso proporcionar agentes terapéuticos (por ejemplo, oligonucleótidos) a células vivas. En algunos casos, el suministro de dichos polinucleótidos a una célula viva proporciona un beneficio terapéutico. El documento US 2007/0110709 da a conocer autoensamblajes supramoleculares de un polielectrolito para uso en combinación con ingredientes farmacológicos. El documento US 2007/0224241 da a conocer micelas que comprenden copolímeros en bloque y un fármaco terapéutico.

Sumario de la invención [0004] Se proporciona en la presente memoria un ensamblaje micelar que comprende una pluralidad de copolímeros en bloque desestabilizantes de membrana, comprendiendo el ensamblaje micelar un núcleo y una cubierta, en el que el núcleo comprende una pluralidad de bloques de núcleo de copolímeros en bloque desestabilizantes de membrana, en el que la cubierta comprende una pluralidad de bloques de cubierta de copolímeros en bloque desestabilizantes de membrana, en el que el bloque de núcleo es hidrófobo desestabilizante de membrana dependiente del pH que comprende una primera especie cargable que es aniónica a pH aproximadamente neutro, siendo el bloque de núcleo un bloque copolimérico, y en el que el bloque de cubierta es hidrófilo a un pH aproximadamente neutro. En algunas realizaciones, el término “membrana” hace referencia a la membrana citoplasmática, a una membrana vesicular, a una membrana de depresión recubierta, a una membrana endosómica y/o a una membrana celular. Cuando el pH está a aproximadamente el pKa de la especie cargable, existirá una distribución en equilibrio de la especie cargable en ambas formas. En el caso de una especie aniónica, aproximadamente un 50% de la población será aniónica y aproximadamente un 50% estará no cargada cuando el pH esté al pKa de la especie aniónica. Cuanto más alejado esté el pH del pKa de la especie cargable, habrá un correspondiente desplazamiento de este equilibrio tal que, a valores de pH altos, predominará la forma aniónica y, a valores de pH bajos, predominará la forma no cargada. Las realizaciones descritas en la presente memoria incluyen la forma de los copolímeros a cualquier valor de pH.

Se proporciona en algunas realizaciones de la presente memoria un ensamblaje micelar que comprende una pluralidad de copolímeros en bloque desestabilizantes de membrana, comprendiendo el ensamblaje micelar un núcleo y una cubierta, en el que el núcleo comprende una pluralidad de bloques de núcleo de copolímeros en bloque desestabilizantes de membrana, en el que la cubierta comprende una pluralidad de bloques de cubierta de copolímeros en bloque desestabilizantes de membrana, en el que el bloque de núcleo es hidrófobo desestabilizante de membrana dependiente del pH que comprende una primera especie cargable que es aniónica a pH aproximadamente neutro, estando la primera especie cargable apantallada hidrófobamente y en el que el bloque de cubierta es hidrófilo a pH aproximadamente neutro.

Se proporciona en ciertas realizaciones de la presente memoria un ensamblaje micelar que comprende una pluralidad de copolímeros en bloque desestabilizantes de membrana, comprendiendo el ensamblaje micelar un núcleo y una cubierta, en el que el núcleo comprende una pluralidad de bloques de núcleo de copolímeros en bloque desestabilizantes de membrana, en el que la cubierta comprende una pluralidad de bloques de cubierta de copolímeros en bloque desestabilizantes de membrana, en el que el bloque de núcleo es hidrófobo desestabilizante de membrana dependiente del pH que comprende una primera especie cargable que es iónica a pH aproximadamente neutro y una segunda especie cargable que es catiónica a pH aproximadamente neutro, y en el que el bloque de cubierta es hidrófilo a un pH aproximadamente neutro.

Se proporciona en algunas realizaciones de la presente memoria un ensamblaje micelar que comprende una pluralidad de copolímeros en bloques desestabilizantes de membrana, comprendiendo el ensamblaje micelar un núcleo y una cubierta, en el que el núcleo comprende una pluralidad de bloques de núcleo de copolímeros en bloque desestabilizantes de membrana, en el que la cubierta comprende una pluralidad de bloques de cubierta de copolímeros en bloque desestabilizantes de membrana, en el que el bloque de núcleo es hidrófobo desestabilizante de membrana dependiente del pH que comprende una primera especie cargable que es aniónica a pH aproximadamente neutro, y en el que el bloque de cubierta es hidrófilo independiente de la temperatura a pH aproximadamente neutro. En una realización, “hidrófilo independiente de la temperatura” hace referencia a un compuesto hidrófilo que tiene propiedades hidrófilas que son sustancialmente invariables dentro del intervalo de temperatura de 20 a 40ºC. Como resultado, las propiedades hidrófilas son sustancialmente invariables antes y después de la administración del ensamblaje micelar a un paciente humano. En algunas realizaciones, un ensamblaje micelar proporcionado en la presente memoria comprende copolímeros en bloque desestabilizantes de membrana que son desestabilizantes de membrana a un pH de aproximadamente 6, 5 o menor, de aproximadamente 5, 0 a aproximadamente 6, 5 o de aproximadamente 6, 2 o menor.

En algunas realizaciones, los copolímeros en bloque desestabilizantes de membrana utilizados en los ensamblajes micelares proporcionados en la presente memoria comprenden al menos dos bloques, o son copolímeros dibloque.

En ciertas realizaciones, la cubierta del ensamblaje micelar comprende un grupo polietilenglicol. En realizaciones específicas, el bloque de cubierta del copolímero en bloque desestabilizante de membrana es o comprende polietilenglicol. En algunas realizaciones, el bloque de cubierta comprende una pluralidad de unidades monoméricas de cubierta, y en el que una o más de la pluralidad de unidades monoméricas de cubierta está sustituida o funcionalizada con un grupo PEG.

En algunas realizaciones, la forma del ensamblaje micelar dentro del intervalo de pH de aproximadamente 6, 2 a 7, 5 es una micela, una seudomicela o una estructura de tipo micela. En realizaciones adicionales o alternativas, la forma del ensamblaje micelar dentro del intervalo de pH de aproximadamente 6, 2 a 7, 5 es una micela.

En ciertas realizaciones, se proporciona en la presente memoria un ensamblaje micelar en que al menos un bloque de uno o más de los copolímeros en bloque desestabilizantes de membrana es un bloque en gradiente.

En algunas realizaciones, se proporciona en la presente memoria un ensamblaje micelar que comprende al menos un reactivo de investigación. En ciertas realizaciones, un ensamblaje micelar descrito en la presente memoria comprende al menos un agente de diagnóstico. En algunas realizaciones, el ensamblaje micelar comprende al menos un agente terapéutico. En realizaciones específicas, el agente terapéutico está enlazado al bloque de cubierta de al menos uno de los copolímeros en bloque desestabilizantes de membrana en el ensamblaje micelar mediante un enlace covalente, una interacción no covalente o una combinación de los mismos. En algunas realizaciones, un ensamblaje micelar proporcionado en la presente memoria comprende un primer agente terapéutico enlazado al bloque de cubierta de al menos uno de los copolímeros en bloque desestabilizantes de membrana y al menos un segundo agente terapéutico dentro de la parte de núcleo del ensamblaje micelar. En algunas realizaciones, cada ensamblaje micelar comprende de media 1-5, 5-250, 5-1000, 250-1000, al menos 2, al menos 5, al menos 10, al menos 20 o al menos 50 agentes terapéuticos. En algunas realizaciones, un agente terapéutico proporcionado en los ensamblajes micelares descritos en la presente memoria comprende al menos un nucleótido, al menos un carbohidrato o al menos un aminoácido. En ciertas realizaciones, el agente terapéutico es un polinucleótido, un oligonucleótido, un modulador de la expresión... [Seguir leyendo]

1. Un ensamblaje micelar que comprende una pluralidad de copolímeros en bloque desestabilizantes de membrana celular, comprendiendo el ensamblaje micelar un núcleo y una cubierta, en el que el núcleo comprende una pluralidad de bloques de núcleo de copolímeros en bloque desestabilizantes de membrana celular, en el que la cubierta comprende una pluralidad de bloques de cubierta de copolímeros en bloque desestabilizantes de membrana celular, en el que el bloque de núcleo es hidrófobo desestabilizante de membrana celular dependiente del pH que comprende una primera especie cargable que es aniónica a pH 6, 6 a 7, 6, siendo el bloque de núcleo un bloque de copolímero, y en el que el bloque de cubierta es hidrófilo a pH 6, 6 a 7, 6.

2. El ensamblaje micelar de la reivindicación 1, en el que los copolímeros en bloque desestabilizantes de membrana son copolímeros dibloque.

3. El ensamblaje micelar de la reivindicación 1 o 2, en el que los copolímeros en bloque desestabilizantes de membrana celular comprenden un tercer bloque.

4. El ensamblaje micelar de la reivindicación 1 o 2, en el que la cubierta comprende un grupo polietilenglicol.

5. El ensamblaje micelar de la reivindicación 1 o 2, en el que la forma del ensamblaje micelar en el intervalo de pH de 6, 2 a 7, 5 es una micela, una seudomicela o una estructura de tipo micela.

6. El ensamblaje micelar de la reivindicación 1 o 2, en el que el ensamblaje micelar comprende al menos un agente terapéutico.

7. El ensamblaje micelar de la reivindicación 6, en el que el agente terapéutico se enlaza con el bloque de cubierta de al menos uno de los copolímeros en bloque desestabilizantes de membrana en el ensamblaje micelar mediante un enlace covalente, una interacción no covalente o una combinación de los mismos.

8. El ensamblaje micelar de la reivindicación 6, en el que el agente terapéutico es un polinucleótido, un olignucleótido, un modulador de la expresión génica, un agente de silenciamiento génico, un ARNip, un agente de iARN, un sustrato de Dicer, un miARN, un ARNhc, un oligonucleótido anticodificante o un aptámero.

9. El ensamblaje micelar de la reivindicación 2, en el que el ensamblaje micelar comprende al menos un resto orientador.

10. El ensamblaje micelar de la reivindicación 1 o 2, en el que el bloque de cubierta comprende unidades monoméricas cargables catiónicas y no catiónicas.

11. El ensamblaje micelar de la reivindicación 10, en el que el bloque de cubierta comprende una unidad monomérica de etacrilato de N, N-dialquil C1-C6-aminoalquilo C1-C6, una unidad monomérica de metacrilato de N, Ndialquil C1-C6-aminoalquilo C1-C6, una unidad monomérica de acrilato de N, N-dialquil C1-C6-aminoalquilo C1-C6, o una combinación de las mismas.

12. El ensamblaje micelar de la reivindicación 1 o 2, en el que el bloque de núcleo comprende al menos una primera unidad monomérica cargable y al menos una segunda unidad monomérica cargable.

13. El ensamblaje micelar de la reivindicación 12, en el que la primera unidad monomérica cargable es un ácido alquil C2-C8-acrílico.

14. El ensamblaje micelar de la reivindicación 13, en el que la segunda unidad monomérica cargable es etacrilato de N, N-dialquil C1-C6-aminoalquilo C1-C6, metacrilato de N, N-dialquil C1-C6-aminoalquilo C1-C6 o acrilato de N, N-dialquil C1-C6-aminoalquilo C1-C6.

15. El ensamblaje micelar de la reivindicación 1 o 2, que comprende una pluralidad de copolímeros en bloque de fórmula I:

A0, A1, A2, A3 y A4 se seleccionan del grupo consistente en -C-, -C-C-, -C (O) (C) aC (O) O-, -O (C) aC (O) - y -O (C) bO-; en las que, a es 1-4;

b es 2-4; Y4 se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo C1-C10, cicloalquilo C3-C6, -O-alquilo C1-C10, -C (O) Oalquilo C1-C10, -C (O) NR6 (C1-C10) , heteroarilo C4-C10 y arilo C6-C10, cualquiera de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos flúor;

Y0, Y1 e Y2 se seleccionan independientemente del grupo consistente en un enlace covalente, alquilo C1-C10, C (O) O-alquilo C2-C10, -OC (O) -alquilo C1-C10, -O-alquilo C2-C10 y –S-alquilo C2-C10, -C (O) NR6-alquilo C2-C10, heteroarilo C4-C10 y arilo C6-C10;

Y3 se selecciona del grupo consistente en un enlace covalente, alquilo C1-C10, heteroarilo C4-C10 y arilo C6-C10; en los que los átomos de carbono tetravalentes de A1-A4 que no están totalmente sustituidos con R1-R5 e Y0-Y4 se completan con un número apropiado de átomos de hidrógeno;

R1, R2, R3, R4, R5 y R6 se seleccionan independientemente del grupo consistente en hidrógeno, -CN, alquilo, alquinilo, heteroalquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo y heteroarilo, cualquiera de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con uno o más átomos de flúor;

Q0 es un residuo seleccionado del grupo consistente en residuos que son hidrófilos a pH fisiológico; residuos conjugables o funcionalizables o hidrógeno; Q1 es un residuo que es hidrófilo a pH fisiológico; Q2 es un residuo que está cargado positivamente a pH fisiológico; Q3 es un residuo que está cargado negativamente a pH fisiológico, pero que experimenta protonación a pH inferior; m es de 0 a menos de 1, 0 n es de más de 0 a 1, 0, en el que:

m+n= 1 p es de 0, 1 a 0, 9; q es de 0, 1 a 0, 9; en el que: r es de 0 a 0, 8; en el que:

p+q+r= 1

v es de 5 a 25 kDa; y, wes de 5 a 50 kDa.

16. El ensamblaje micelar de cualquier reivindicación precedente, para uso en la inhibición de la expresión 5 génica o para uso en el suministro intracelular de un polinucleótido.