Conjugado de polietilenglicol-G-CSF.
Conjugado de PEG de tres ramas-G-CSF de la siguiente fórmula general (1):
**Fórmula**
en la que la relación de unión de polietilenglicol de tres ramas (PEG) y G-CSF es 1:1 (moles/moles), y PEG tiene un pesomolecular promedio de 200 a 45.000 dalton,
en donde,
n es un número entero de 1 a 1.000;
m es un número entero de 10 a 1.000;
Z es (CH2)S o (CH2)SNHCO(CH2)S como adaptador de G-CSF y PEG en las que S es un número entero de 1 a 6;Y es un enlace de amida formado combinando el grupo funcional NH2 en G-CSF y un grupo funcional de derivadode PEG.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/KR2006/004908.
Solicitante: Dong-A Socio Holdings Co., Ltd.
Inventor/es: YOO, MOO-HI, LEE, SUNG HEE, JO,YEONG-WOO, YOO,WON-YOUNG, JEON,HYUN-KYU, CHOI,YUN-KYU, JANG,HYE-IN, KIM,BYONG-MOON, KANG,SOO-HYUNG.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- A61K31/765 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE. › A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 31/00 Preparaciones medicinales que contienen ingredientes orgánicos activos. › Polímeros que contienen oxígeno.
- A61P37/04 A61 […] › A61P ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS O DE PREPARACIONES MEDICINALES. › A61P 37/00 Medicamentos para el tratamiento de problemas inmunológicos o alérgicos. › Inmunoestimulantes.
PDF original: ES-2433253_T3.pdf
Fragmento de la descripción:
Conjugado de polietilenglicol-G-CSF
CAMPO TÉCNICO
La presente invención se refiere a un conjugado de PEG de tres ramas-G-CSF.
TÉCNICA ANTERIOR
El factor estimulante de colonias (CSF) , como una glucoproteína que actúa sobre la producción, división y actividad de células hematopoyéticas, se clasifica en factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF) , factor estimulante de macrófagos (M-CSF) , factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF) , factor estimulante de múltiples colonias (multi-CSF) , etc.
Se sabe que G-CSF aumenta la liberación de neutrófilos maduros en sangre periférica facilitando la producción y división del precursor neutrófilo en la médula ósea; induce una actividad fagocítica activando neutrófilos maduros; representa una citotoxicidad mediada por célula dependiente de anticuerpo; genera superóxidos; y aumenta la reactividad contra factor quimiotáctico.
El factor estimulante de colonias de granulocitos humano (hG-CSF) lo separon por primera vez de la línea celular de carcinoma de vejiga 5637 Welt y col. en 1985, y hG-CSF recombinante (rhG-CSF) lo produjeron clonando el gen de la biblioteca de ADNc de una célula cancerosa Nagata y col. Souza y col. en 1986. El rhG-CSF actualmente usado en ensayos clínicos es filgrastim que une metionina en el extremo N de proteína sin glucosilación, producido en Escherichia coli, y lenograstim con glucosilación, producido en la célula de animal.
En caso de usar rhG-CSF clínicamente, rhG-CSF tiene que administrarse una vez o más al día para disminuir los leucocitos debido a que rhG-CSF tiene una corta duración del efecto farmacológico. Así, se han realizado muchos estudios para aumentar una semivida de circulación de rhG-CSF usando polímero soluble en agua, desarrollando así el fármaco para que tenga una larga duración de actividad y alta estabilidad, y disminuyendo la frecuencia de administración.
Y, el polietilenglicol en el polímero soluble en agua es fuertemente hidrófilo, y puede aumentar la solubilidad en el momento de unirse a proteína para el tratamiento. Por tanto, el polietilenglicol es eficaz en aumentar la cantidad de proteína molecular unida al mismo, manteniendo las principales funciones biológicas tales como actividad enzimática y unión a receptor. Así, el polietilenglicol puede disminuir la filtración del riñón y proteger eficazmente la proteína de la enzima proteolítica que descompone la proteína. Por tanto, se han realizado muchos estudios para encontrar procedimientos modificadores de proteína usando polietilenglicol debido a que tengan las ventajas de prevenir la descomposición de proteínas, aumentar la estabilidad y tiempo de circulación de la proteína, y disminuir la inmunogenicidad.
La patente coreana nº 0508358 desveló conjugados y un procedimiento de preparación de los mismos, en el que los conjugados tienen actividades biológicas y están en forma de unir un polímero de biocompatibilidad con el tiol del residuo de cisteína de G-CSF, en la relación molar de polímero: G-CSF a estequiométricamente 0, 7~1, 3:1, preferentemente 1:1. Pero, como el residuo de cisteína de G-CSF que no forma enlaces disulfuro en G-CSF es la parte de unión principal con el receptor de G-CSF, el conjugado que usa el residuo de cisteína tiene el inconveniente de que su efecto de proliferación real para neutrófilo es pequeño. Y, debido a que los conjugados se agregan inmediatamente para unir un PEG a residuos de cisteína de G-CSF, tiene la desventaja de que debe añadirse una pequeña cantidad de SDS al conjugado para prevenir la agregación para salvaguardo, y el SDS se eliminó por ultrafiltración para administrarlo in vivo.
La patente coreana nº 0507796 desveló conjugados de PEG-homodímero que se unen a un polipéptido activo biológico y un PEG, para aumentar la semivida in vivo del polipéptido. Particularmente, describió que el homodímero une un grupo amino de residuos de licina de polipéptido bioactivo de dos moléculas a un PEG para aumentar el tiempo residual y mantener actividades biológicas durante un largo tiempo. Pero los conjugados tienen menos actividad que los conjugados de mono-PEG debido a la conjugación de excesivos PEG y las características fisicoquímicas y biológicas de los conjugados no son uniformes debido a conjugación no específica.
Y se conoce el procedimiento de unión de rhG-CSF a SCM-MPEG lineal (éster succinimidil carboximetílico de metoxi PEG) . Los conjugados de mono-PEG-G-CSF preparados mediante el procedimiento tienen 3 tipos de isómeros de posición modificados en los residuos del extremo N, de licina 35 y de licina 45. Particularmente, el conjugado modificado en licina 35 tiene la desventaja de PEG salientes del conjugado (patente coreana nº 0248111, patente de Estados Unidos nº 5.824.784) .
La patente de Estados Unidos nº 5.951.974 desveló conjugados de unión de un SC-PEG lineal (polietilenglicol-carbonato de N-succinimida) a interferón alfa de recombinación génica. Los conjugados consisten en conjugados covalentes de
enlace de uretano en el grupo !-amino de residuos de licina de interferón, el grupo ∀-amino de los residuos de cisteína del extremo N y un grupo amino de residuos de histidina. Pero los conjugados tienen la desventaja de PEG salientes del conjugado debido a que el enlace de uretano de los conjugados es inestable.
El polietilenglicol lineal comúnmente usado tiene un peso molecular de aproximadamente 1.000-25.000 dalton, pero tiene una limitación en la unión de muchas moléculas grandes lineales a proteína o péptido, con mantener sus actividades, debido a regiones activas biológicas limitadas de proteína y péptido.
La patente coreana nº 0254097 desveló conjugados que unen un PEG de dos ramas de una estructura esquelética de licina a interferón alfa de recombinación génica. Los conjugados tienen la ventaja de prevenir que el PEG se una a múltiples partes del interferón, y tienen 2 veces el peso molecular de PEG por el del PEG lineal debido a que dos PEG lineales se unen a una única parte del interferón. Pero los PEG de dos ramas pueden hidrolizarse a una única cadena para salvaguardar o para hacer reaccionar bajo una condición de álcali debido a que el PEG de dos ramas que tiene una estructura esquelética de licina tiene dos enlaces de uretano en el PEG.
Generalmente, se sabe que la actividad biológica, durabilidad, etc., de conjugados de unión de un PEG a proteína de recombinación génica depende del tamaño y la parte modificada en el PEG. Pero todavía no se ha mostrado si un tamaño de PEG en conjugados que unen PEG y rhG-CSF afecta o no actividades biológicas de una proteína. Por tanto, ha habido una necesidad en la materia de vencer las desventajas del procedimiento conocido mediante el control de un tamaño de PEG y unión a diversas estructuras esqueléticas de PEG para no reducir las bioactividades de G-CSF y para aumentar la estabilidad de partes de unión.
DIVULGACIÓN DE LA INVENCIÓN
PROBLEMA TÉCNICO
El objetivo de la presente invención es proporcionar conjugados de polietilenglicol (PEG) de tres ramas-G-CSF preparados conjugando PEG de tres ramas y G-CSF que tienen alta estabilidad y las mismas o más bioactividades de G-CSF que conjugados de G-CSF y PEG-G-CSF conocidos en la técnica; un procedimiento de preparación de los mismos; y una composición farmacéutica que contiene los mismos.
SOLUCIÓN TÉCNICA
Para lograr el objetivo anterior, la presente invención proporciona conjugados de polietilenglicol de tres ramas (PEG) -G-CSF conjugados entre derivados de PEG de tres ramas y G-CSF.
La presente invención también proporciona un procedimiento de preparación de conjugados de PEG de tres ramas-G-CSF que comprende conjugar derivados de PEG de tres ramas y G-CSF.
La presente invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende los conjugados.
La presente invención también proporciona un procedimiento de tratamiento de neutropenia, prevención de neutropenia, o facilitación del aumento del número de neutrófilos en el momento de la movilización de citoblastos hematopoyéticos a sangre periférica y trasplante de citoblastos hematopoyéticos, que comprende administrar el conjugado de la presente invención como componente eficaz.
La presente invención se explica en detalle más adelante.
Los conjugados de PEG de tres ramas-G-CSF de la presente invención pueden prepararse conjugando polietilenglicol de tres ramas (PEG) , representado por la siguiente fórmula general (1) :
en la que n es un número entero de 1 a 1.000;
m es un número entero de 10 a 1.000;
Z es (CH2)... [Seguir leyendo]
Reivindicaciones:
1. Conjugado de PEG de tres ramas-G-CSF de la siguiente fórmula general (1) :
en la que la relación de unión de polietilenglicol de tres ramas (PEG) y G-CSF es 1:1 (moles/moles) , y PEG tiene un peso molecular promedio de 200 a 45.000 dalton,
en donde,
n es un número entero de 1 a 1.000;
m es un número entero de 10 a 1.000;
Z es (CH2) S o (CH2) SNHCO (CH2) S como adaptador de G-CSF y PEG en las que S es un número entero de 1 a 6; 10 Y es un enlace de amida formado combinando el grupo funcional NH2 en G-CSF y un grupo funcional de derivado de PEG.
2. El conjugado de la reivindicación 1, en el que el PEG tiene un peso molecular promedio de 20.000 a 45.000 dalton.
3. El conjugado de la reivindicación 1, en el que el PEG tiene un peso molecular promedio de 23.000 a 43.000 dalton.
4. Un procedimiento de preparación del conjugado de PEG de tres ramas-G-CSF de la fórmula general (1) de la
reivindicación 1 que comprende formar un enlace covalente de derivado de PEG de tres ramas de la siguiente fórmula general (2) y G-CSF en el que PEG (polietilenglicol) tiene un peso molecular promedio de 200 a 45.000 dalton;
en donde, n es un número entero de 1 a 1.000;
m es un número entero de 10 a 1.000; Z es (CH2) S o (CH2) SNHCO (CH2) S como adaptador de G-CSF y PEG en las que S es un número entero de 1 a 6; y el grupo funcional que puede reaccionar químicamente con proteínas y péptidos que contienen G-CSF es N
hidrosuccinimida.
5. El procedimiento de la reivindicación 4, en el que el PEG tiene un peso molecular promedio de 20.000 a 45.000 dalton.
7. El procedimiento de la reivindicación 4, en el que la relación molar de G-CSF con respecto a derivado de PEG de tres ramas es de 1: 0, 5 a 1: 50.
8. El procedimiento de la reivindicación 7, en el que la relación molar de G-CSF con respecto a derivado de PEG de tres ramas en la reacción es de 1: 0, 5 a 1: 5.
10. Una composición farmacéutica para su uso para tratar o prevenir síntomas producidos por la disminución de la función hematopoyética y la disminución de la función inmunológica, que comprende el conjugado de cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 3 como componente eficaz.
11. La composición farmacéutica de la reivindicación 10, en la que los síntomas producidos por la disminución de la
función hematopoyética y la disminución de la función inmunológica son cáncer sólido, neutropenia producida por quimioterapia para el cáncer para tumor de la sangre, neutropenia producida por síndrome mielodisplásico, neutropenia producida por anemia aplásica, neutropenia idiopática congénita y neutropenia producida por el tratamiento del virus de la inmunodeficiencia humana.
12. El conjugado de una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 3 para su uso para tratar neutropenia, prevenir
neutropenia o facilitar el aumento del número de neutrófilos en el momento de la movilización de citoblastos hematopoyéticos a sangre periférica y trasplante de citoblastos hematopoyéticos.
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