Composiciones de hidrolizado de proteínas con capacidad de liberación de CCK mejorada.

Una fracción soluble de una composición de hidrolizado de proteínas,

comprendiendo la composición una mezclade fragmentos de polipéptidos que tienen un tamaño medio inferior a aproximadamente 100.000 Daltons,comprendiendo dicha mezcla una fracción de polipéptidos de 10.000-100.000 Daltons, en la que una concentraciónde al menos aproximadamente 0,5 mg/ml de la composición de hidrolizado de proteínas estimula la actividad deliberación de colecistoquinina con una potencia básicamente similar a más de un 50 % de la colecistoquininaliberada por células STC-1 estimuladas con 100 nM de 12-miristato-13-acetato de forbol durante 4 horas.

Composiciones de hidrolizado de proteínas con capacidad de liberación de CCK mejorada Referencia cruzada a la solicitud relacionada La presente solicitud reivindica prioridad respecto de la solicitud provisional de Estados Unidos con número 61/141.931, presentada el 31 de Diciembre de 2008, que se incorpora en la presente memoria por referencia en su totalidad.

Campo de la invención La presente invención se refiere, en general, a hidrolizados de proteínas. En particular, los hidrolizados de proteínas generalmente tienen mayor actividad de liberación de colecistoquinina (CCK) . Los hidrolizados de proteínas se pueden usar para proporcionar nutrientes y para promover la saciedad.

Antecedentes de la invención Las tasas de obesidad y las enfermedades asociadas con la obesidad están aumentando los Estados Unidos y en todo el mundo. Si bien no existe una única causa subyacente, un factor contribuyente puede ser el estilo de vida apresurado, de ritmo rápido de muchos individuos y además del consumo de comida rápida. La mayor parte de la comida rápida tiende a tener un alto contenido en grasas y/o azúcar.

Un objetivo viable para combatir la epidemia de obesidad puede ser la colecistoquinina (CCK) . La CCK es una hormona peptídica secretada en la circulación por las células intestinales en respuesta a una proteína o a una comida rica en lípidos. Esta hormona peptídica media varios procesos fisiológicos implicados en la digestión de proteínas y lípidos. La secreción de CCK por la mucosa duodenal e intestinal mucosa se estimula por el quimo rico en grasas o proteínas que entra en el duodeno. La CCK induce, a continuación, la saciedad y la ingesta reducida de alimentos a través de acciones fisiológicas y neuronales directas y/o indirectas. Algunas acciones directas incluyen la inhibición del vaciado gástrico, inhibición de la secreción de ácido gástrico, estimulación de la contracción de la vesícula biliar. En combinación con la capacidad de la CCK para estimular las vías neurales, la liberación de CCK produce una sensación de " saciedad, " dando como resultado de este modo, por lo general, el consumo de menos calorías.

Cordier-Bussat y col (M. Peptones Stimulate Cholecystokinin Secretion and Gene Transcription in the Intestinal Cell Line STC-1, Endocrinology, vol. 138, nº 3, 1997, páginas 1137-1144) describen los efectos de las peptonas, que constan principalmente de oligopéptidos con un peso molecular inferior a 1200, sobre la CCK en las células STC-1. Estos autores concluyen que las peptonas estimulan específicamente la secreción de CCK y que las peptonas dependientes de la dosis aumentan la actividad transcripcional de un fragmento de 800-bp sobre el promotor del gen de CCK transfectado en las células STC-1.

Existe la necesidad, por lo tanto, de un producto alimenticio nutritivo, de fácil acceso que se pueda consumir "sobre la marcha." Este producto alimenticio no sólo debería tener buen sabor, sino que también debería ser saludable desde el punto de vista nutricional; es decir, el producto debería ser bajo en grasas, alto en proteínas, y alto en vitaminas y antioxidantes. Además, también sería altamente beneficioso si el producto alimenticio aumentara la liberación de CCK.

Sumario de la invención Entre los diversos aspectos de la presente invención está un aspecto que incluye una composición de hidrolizado de proteínas que tiene actividad de liberación de colecistoquinina (CCK) . La composición de hidrolizado de proteínas comprende una mezcla de fragmentos de polipéptido que tienen un tamaño medio inferior a aproximadamente 100.000 Daltons, comprendiendo dicha mezcla una fracción de polipéptido de 10.000-100.000 Daltons, en la que una fracción soluble de la composición de hidrolizado de proteínas, a una concentración de al menos aproximadamente 0, 5 mg/ml, estimula la actividad de liberación de CCK con una potencia básicamente similar a más de un 50 % de la CCK liberada por las células STC-1 estimuladas con 100 nM de 12-miristato-13-acetato de forbol (PMA) durante 4 horas.

Otro aspecto de la invención proporciona un procedimiento para aumentar la actividad de liberación de CCK de una célula. El procedimiento comprende poner en contacto la célula con una fracción soluble de una composición de hidrolizado de proteínas. La composición de hidrolizado de proteínas comprende una mezcla de fragmentos de polipéptidos que tienen un tamaño medio inferior a aproximadamente 100.000 Daltons, comprendiendo dicha mezcla una fracción de polipéptidos de 10.000-100.000 Daltons en la que, a una concentración de al menos aproximadamente 0, 5 mg/ml, la composición de hidrolizado de proteínas estimula la actividad de liberación de CCK con una potencia básicamente similar a más de un 50 % de la CCK liberada con células STC-1 estimuladas con 100 nM de PMA durante 4 horas.

Un aspecto adicional de la presente invención incluye un procedimiento para promover la saciedad en un sujeto. El

procedimentos comprende administrar al sujeto una cantidad de una composición de hidrolizado de proteínas, en la que la cantidad administrada como resultado una sensación de saciedad por parte del sujeto. La composición de hidrolizado de proteínas comprende una mezcla de fragmentos de polipéptidos que tienen un tamaño medio inferior a aproximadamente 100.000 Daltons, comprendiendo dicha mezcla una fracción de polipéptidos de 10.000-100.000 Daltons en la que, a una concentración de al menos aproximadamente 0, 5 mg/ml, la composición de hidrolizado de proteínas estimula la actividad de liberación de CCK con una potencia básicamente similar a más de un 50 % de la CCK liberada con células STC-1 estimuladas con 100 nM de PMA durante 4 horas.

Otro aspecto más de la invención proporciona un producto alimenticio que comprende un material comestible y una fracción soluble de una composición de hidrolizado de proteínas. La composición de hidrolizado de proteínas comprende una mezcla de fragmentos de polipéptidos que tienen un tamaño medio inferior a aproximadamente 100.000 Daltons, comprendiendo dicha mezcla una fracción de polipéptidos de 10.000-100.000 Daltons en la que, a una concentración de al menos aproximadamente 0, 5 mg/ml, la composición de hidrolizado de proteínas estimula la actividad de liberación de CCK con una potencia básicamente similar a más de un 50 % de la CCK liberada con células STC-1 estimuladas con 100 nM of PMA durante 4 horas.

Referencia a las figuras en color.

La solicitud contiene al menos una fotografía realizada en color. Las copias de la presente publicación de solicitud de patente con fotografías en color la proporcionará la Oficina a petición y pago de la tasa necesaria.

Descripción de las figuras La Figura 1 muestra la estimulación de la liberación de CCK por hidrolizados de proteínas de soja y caseinato preparados por digestión de cada uno con pepsina o con pepsina y pancreatina combinadas para imitar la digestión en el estómago y en la parte superior del intestino delgado (duodeno) . Los hidrolizados de proteínas se añadieron a los medios de células STC-1 a una concentración de proteínas de aproximadamente 2 mg/ml, y los controles enzimáticos se añadieron a opciones equivalentes de la mezcla de reacción del control (que incluía la enzima o enzimas en ausencia de sustrato de proteínas) . Se representa el % de CCK liberada en los medios de células STC-1 estimuladas con los diferentes hidrolizados de proteínas generados por la pepsina o enzimas de pepsina y pancreatina, en comparación con el PMA 100 nM de control (que se estableció como un 100 %) . Los medios de cultivo celular solos y 2 mg/ml de albúmina de suero bovino (BSA) se usaron como controles de fondo negativos. El control de PMA consistía en PMA 100 nM en medios de cultivo celular que contenían 2 mg/ml de BSA. El % de CCK liberada en los medios de cultivo celular se calculó como sigue a continuación:

La digestión de la proteína de soja intacta con pepsina y con pepsina-pancreatina produjo péptidos con actividad de liberación de CCK significativamente más potente que la de la digestión equivalente de proteína de caseinato intacto.

La Figura 2 presenta una imagen de un gel de poliacrilamida de SDS teñido con Coomassie que contiene fracciones a partir de la filtración de flujo tangencial de un hidrolizado potente de liberación de CCK (SUPRO® 950/FXP950) . Este hidrolizado se genera por digestión con ALCALASE® de Novozymes ( (Bagsvaerd, Dinamarca) a un % de grado de hidrólisis de aproximadamente un 9, 6 %. Las calles A, B, C, y D representan muestras de 10 μl de suspensiones al 1 % (p/v) de la muestra no fraccionada, mayor que la fracción de 100 kDa, la fracción de 10-100 kDa, y... [Seguir leyendo]

1. Una fracción soluble de una composición de hidrolizado de proteínas, comprendiendo la composición una mezcla de fragmentos de polipéptidos que tienen un tamaño medio inferior a aproximadamente 100.000 Daltons, comprendiendo dicha mezcla una fracción de polipéptidos de 10.000-100.000 Daltons, en la que una concentración de al menos aproximadamente 0, 5 mg/ml de la composición de hidrolizado de proteínas estimula la actividad de liberación de colecistoquinina con una potencia básicamente similar a más de un 50 % de la colecistoquinina liberada por células STC-1 estimuladas con 100 nM de 12-miristato-13-acetato de forbol durante 4 horas.

2. La composición de hidrolizado de proteínas de la reivindicación 1, en la que la composición de hidrolizado de proteínas tiene un grado de hidrólisis de aproximadamente un 0, 05 % a aproximadamente un 35 %.

3. La composición de hidrolizado de proteínas de la reivindicación 1, en la que la composición de hidrolizado de proteínas tiene su origen en un material proteico seleccionado entre el grupo que consiste en soja, cebada, colza, lupino, maíz, avena, guisante, patata, arroz, trigo, huevo, animal, y combinaciones de los mismos.

4. La composición de hidrolizado de proteínas de la reivindicación 1, en la que la composición de hidrolizado de proteínas tiene su origen en un material de proteína de soja en combinación con un material proteico seleccionado entre el grupo que consiste en cebada, colza, lupino, maíz, avena, guisante, patata, arroz, trigo, huevo, productos lácteos, animal, y combinaciones de los mismos.

5. La composición de hidrolizado de proteínas de la reivindicación 1, en la que la composición de hidrolizado de proteínas tiene su origen en material de proteína de soja, y la composición de hidrolizado de proteínas tiene un grado de hidrólisis de aproximadamente un 0, 05 % a aproximadamente un 35 %.

6. Un procedimiento para aumentar la actividad de liberación de colecistoquinina de una célula, comprendiendo el procedimiento poner en contacto la célula con una fracción soluble de una composición de hidrolizado de proteínas, comprendiendo la composición una mezcla de fragmentos de polipéptidos que tienen un tamaño medio inferior a aproximadamente 100.000 Daltons, comprendiendo dicha mezcla una fracción de polipéptidos de 10.000-100.000 Daltons, en el que una concentración de al menos aproximadamente 0, 5 mg/ml de la composición de hidrolizado de proteínas estimula la actividad de liberación de colecistoquinina con una potencia básicamente similar a más de un 50 % de la colecistoquinina liberada por células STC-1 estimuladas con 100 nM de 12-miristato-13-acetato de forbol durante 4 horas.

7. El procedimiento de la reivindicación 6, en el que la composición de hidrolizado de proteínas tiene un grado de hidrólisis de aproximadamente un 0, 05 % a aproximadamente un 35 %.

8. El procedimiento de la reivindicación 6, en el que la composición de hidrolizado de proteínas tiene su origen en material de proteína de soja en combinación con un material proteico seleccionado entre el grupo que consiste en cebada, colza, lupino, maíz, avena, guisante, patata, arroz, trigo, huevo, productos lácteos, animal, y combinaciones de los mismos.

9. El procedimiento de la reivindicación 6, en la que la composición de hidrolizado de proteínas tiene su origen en material de proteína de soja.

10. El procedimiento de la reivindicación 9, en el que el material de proteína de soja está seleccionado entre el grupo que consiste en extracto de soja, leche de soja, leche de soja en polvo, cuajada de soja, harina de soja desgrasada, harina de soja parcialmente desgrasada, harina de soja con toda su grasa, proteína de soja aislada, concentrado de proteína de soja, y una combinación de los mismos.

11. El procedimiento de la reivindicación 6, en el que la composición de hidrolizado de proteína de soja está producida al someter un material de partida de proteínas a digestión enzimática.

12. El procedimiento de la reivindicación 11, en el que la enzima es una endopeptidasa seleccionada entre el grupo que consiste en serina proteasa (SP1) de Nocardiopsis prasina, serina proteasa de Bacillus licheniformis, subtilisina proteasa de Bacillus licheniformis, proteasa de tipo tripsina de Fusarium oxisporum, lisil endopeptidasa de Achromobacter lyticus, subtilisina proteasa 2, metalo proteasa 1, aspartato proteasa 1, bromelaína, subtilisina, y combinaciones de las mismas.

13. El procedimiento de la reivindicación 12, en el que la enzima comprende adicionalmente una exopeptidasa.

14. Un procedimiento para promover saciedad en un sujeto, comprendiendo el procedimiento administrar al sujeto una cantidad de una fracción soluble de una composición de hidrolizado de proteínas, comprendiendo la composición una mezcla de fragmentos de polipéptidos que tienen un tamaño medio inferior a aproximadamente

100.000 Daltons, y un grado de hidrólisis de aproximadamente un 0, 05 % a aproximadamente un 35 %, comprendiendo dicha mezcla una fracción de polipéptidos de 10.000-100.000 Daltons, en el que una concentración de al menos aproximadamente 0, 5 mg/ml de la composición de hidrolizado de proteínas estimula la actividad de liberación de colecistoquinina con una potencia básicamente similar a más de un 50 % de la colecistoquinina liberada por células STC-1 estimuladas con 100 nM de 12-miristato-13-acetato de forbol durante 4 horas, en el que la cantidad administrada da como resultado una sensación de saciedad en el sujeto.

15. Un producto alimenticio, comprendiendo el producto alimenticio:

(a) un material comestible; y

(b) una fracción soluble de una composición de hidrolizado de proteínas, comprendiendo la composición una mezcla de fragmentos de polipéptidos que tienen un tamaño medio inferior a aproximadamente 100.000 Daltons, comprendiendo dicha mezcla una fracción de polipéptidos de 10.000-100.000 Daltons, en el que una concentración de al menos aproximadamente 0, 5 mg/ml de la composición de hidrolizado de proteínas estimula la actividad de liberación de colecistoquinina con una potencia básicamente similar a más de un 50 % de la colecistoquinina liberada por células STC-1 estimuladas con 100 nM de 12-miristato-13-acetato de forbol durante 4 horas.