Cepas de Mycoplasma gallisepticum atenuadas.

La bacteria Mycoplasma gallisepticum viva atenuada depositada en la ATCC bajo el número de acceso PTA-8485.

Cepas de Mycoplasma gallisepticum atenuadas Antecedentes de la invención

Campo de la invención La presente invención se refiere a los campos de la microbiología e inmunología. Más específicamente, la invención se refiere a novedosas vacunas contra patógenos bacterianos.

Técnica anterior

Los Mycoplasmas son pequeños organismos procariotas (0, 2 a 0, 3 pm) que pertenecen a la clase Mollicutes, cuyos miembros carecen de pared celular y tienen un pequeño tamaño de genoma. Los mollicutes incluyen al menos 100

especies de Mycoplasma. Las especies de Mycoplasma son los agentes causantes de varias enfermedades en animales humanos y no humanos, además de en plantas. M. gallisepticum, por ejemplo, es responsable de significativas condiciones de enfermedad en aves de corral. M. gallisepticum está asociado a enfermedad respiratoria aguda en pollos y pavos y también puede producir enfermedad de las vías respiratorias superiores en aves de caza. Además, se ha reconocido M. gallisepticum como una causa de conjuntivitis en gorriones en América del Norte.

Una estrategia eficaz para prevenir y gestionar enfermedades producidas por infección por M. gallisepticum es por vacunación con cepas atenuadas vivas de la bacteria M. gallisepticum. Las ventajas de vacunas atenuadas vivas, en general, incluyen la presentación de todos los determinantes inmunogénicos relevantes de un agente infeccioso en su forma natural para el sistema inmunitario del huésped, y la necesidad de cantidades relativamente pequeñas del agente inmunizante debido a la capacidad del agente para multiplicarse en el huésped vacunado.

Las cepas de vacunas atenuadas vivas se crean frecuentemente sometiendo múltiples veces a pases sucesivos una cepa virulenta en medios. Aunque las cepas de vacunas atenuadas vivas contra M. gallisepticum han sido obtenidas por pases sucesivos, tales cepas están generalmente poco caracterizadas al nivel molecular. Se supone que las cepas atenuadas hechas por pases sucesivos tienen mutaciones acumuladas que hacen que los microorganismos sean menos virulentos, pero que todavía puedan replicarse. Sin embargo, con respecto a cepas de M. gallisepticum

atenuadas, las consecuencias de las mutaciones que producen la atenuación (por ejemplo, la identidad de proteínas cuyo patrón de expresión ha sido alterado en la cepa atenuada) son normalmente desconocidas.

El documento US 2002/0187162 A1 se refiere a M. gallisepticum deficiente en citoadherencia que no expresa al menos dos de las tres proteínas, la molécula Gap-A, proteína cmA y la proteína de 45 Kd que se describe. La cepa de M. gallisepticum que se reivindica en el documento US 2002/0187162 A1 contiene mutaciones y características que se diferencian de la presente invención.

Adler y col. (“Immunological response to Mycoplasma gallisepticum”; Adler HE, Therlogenology, vol 6 (nº 2-3) , 1 de agosto de 1976, páginas 87-91) describe inmunidad de infección por M. gallisepticum que es solo en parte de origen humoral. La inmunidad humoral sola no protegerá al ave contra la exposición en el alvéolo. Esta referencia muestra que los linfocitos T son de importancia en la defensa contra la infección. La inmunización descrita en aquel documento muestra inmunización en las fosas nasales usando M. gallisepticum que se sometió múltiples veces a pases. Se estableció que hay una posible función de IgA y linfocinas generales en prevenir lesiones del alvéolo. No se ha facilitado caracterización adicional.

Hudson y col. (“Identification of a virulence-associated determinant, dihydrolipoamine dehydrogenase (lpd) in a Mycoplasma gallisepticum through in vivo screening of trans pons mutants”. Infection and Immunity, vol 74 (nº 2) ,

febrero de 2006) describe la atenuación de M. gallisepticum por alteración mediada por transposón de dihidrolipoamida deshidrogenasa, que es un componente de piruvato deshidrogenasa. Esta referencia no describe la cepa de M. gallisepticum de la presente invención ni los niveles particulares de proteína que se alteran.

La base de datos UniProt, 15 de diciembre de 2003, número de acceso Q7NC76, es un número de acceso de UniProtKB/Swiss-Prot que describe una proteína hipotética derivada de M. gallisepticum. No se describe información 45 adicional referente a la función, rutas, etc. Esto es parte de la secuencia del genoma completo del patógeno aviar M. gallisepticum y referencias a Papazisi y col. (Microbiology, vol. 149, páginas 2307-2316 (2003) ) .

Por consiguiente, existe la necesidad en la materia de nuevas bacterias M. gallisepticum atenuadas vivas que se hayan caracterizado al nivel proteómico y que sean seguras y eficaces en formulaciones de vacuna.

Breve resumen de la invención 50 La presente invención se basa, en parte, en el sorprendente descubrimiento de que bacterias M. gallisepticum que presentan expresión reducida de un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 1 son tanto seguras como eficaces cuando se usan como una vacuna contra infección por M. gallisepticum en aves. El polipéptido de SEC ID Nº: 1 también denomina “MGA_0621” y tiene el nº de acceso de NCBI NP_852784.

Por consiguiente, la presente solicitud describe bacterias M. gallisepticum atenuadas vivas que presentan expresión reducida de MGA_0621, con respecto a M. gallisepticum natural. En una realización a modo de ejemplo no limitante específica, la solicitud describe una cepa de M. gallisepticum atenuada viva que presenta expresión reducida de MGA_0621, y adicionalmente presenta expresión reducida de una o más proteínas seleccionadas del grupo que consiste en piruvato deshidrogenasa, fosfopiruvato hidratasa, 2-desoxirribosa-5-fosfato aldolasa y proteína ribosómica L35, con respecto a bacterias M. gallisepticum naturales. Según ciertas realizaciones de la presente solicitud, las bacterias M. gallisepticum atenuadas vivas descritas se caracterizan por análisis proteómico por tener expresión reducida de una o más de las proteínas anteriormente mencionadas. Según una realización a modo de ejemplo de la presente solicitud, la cepa de M. gallisepticum atenuada viva es una cepa que presenta expresión reducida de MGA_0621, piruvato deshidrogenasa, fosfopiruvato hidratasa, 2-desoxirribosa-5-fosfato aldolasa y proteína ribosómica L35, con respecto a bacterias M. gallisepticum naturales, cepa que se depositó en la Colección americana de cultivos tipo (ATCC) , P.O. Box 1549, Manassas, VA 20108, el 19 de junio de 2007, y a la que se le ha asignado el nº de acceso PTA-8485. Esta cepa se denomina alternativamente en el presente documento “cepa MGx+47 de M. gallisepticum” o “MG-P48”.

Así, según una primera realización, la presente invención proporciona la bacteria Mycoplasma gallisepticum atenuada viva depositada en la ATCC bajo el número de acceso PTA-8485.

La presente solicitud también describe composiciones de vacuna que comprenden las bacterias M. gallisepticum atenuadas vivas de la invención, además de procedimientos de vacunación de un animal contra infección por M. gallisepticum.

Así, según una segunda realización, la presente invención también proporciona una composición de vacuna que comprende: (a) la bacteria Mycoplasma gallisepticum atenuada viva según la primera realización; y (b) un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Según una tercera realización, la presente invención también proporciona la composición de vacunas según la segunda realización para su uso en vacunar un animal contra infección por Mycoplasma gallisepticum.

Según una cuarta realización, la presente invención también proporciona la composición de vacuna según la tercera realización, en la que dicha composición de vacuna es para administración a dicho animal por inyección directa,

administración por pulverización o administración en el agua potable.

Además, la presente solicitud describe procedimientos para preparar y/o identificar clones de M. gallisepticum atenuados. Según este aspecto de la solicitud, los procedimientos comprenden someter una población inicial de bacterias M. gallisepticum a condiciones atenuantes, ensayar los clones individuales para la expresión reducida de MGA_0621, con respecto a M. gallisepticum natural, y probar los clones para virulencia. Los clones de M. gallisepticum

producidos según los procedimientos de este aspecto de la solicitud presentarán expresión reducida de MGA_0621 y opcionalmente pueden presentar expresión reducida de una o más proteínas adicionales seleccionadas del grupo que consiste en piruvato deshidrogenasa, fosfopiruvato hidratasa, 2-desoxirribosa-5-fosfato aldolasa y proteína ribosómica... [Seguir leyendo]

1. La bacteria Mycoplasma gallisepticum viva atenuada depositada en la ATCC bajo el número de acceso PTA-8485.

2. Una composición de vacuna que comprende:

(a) la bacteria Mycoplasma gallisepticum viva atenuada según la reivindicación 1; y 5 (b) un vehículo farmacéuticamente aceptable.

3. La composición de vacuna según la reivindicación 2 para su uso en vacunar un animal contra infección por Mycoplasma gallisepticum.

4. La composición de vacuna para su uso según la reivindicación 3, en la que dicha composición de vacuna es para

administración a dicho animal por inyección directa, administración por pulverización o administración en el agua 10 potable.

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