Secuencias de circovirus asociado con la enfermedad del adelgazamiento del lechón (MAP).

Composición vacunal que comprende un polipéptido aislado codificado por una secuencia nucleotídica que tiene por lo menos 90% de identidad con la secuencia SEC ID nº 12 y que corresponde al ORF'2 de un circovirus MAP de tipo B.

Secuencias de circovirus asociado con la enfermedad del adelgazamiento del lechón (MAP) .

La presente invención comprende unas composiciones vacunales para la prevención y/o el tratamiento de infecciones víricas por circovirus MAP La descripción se refiere a la secuencia genómica y a las secuencias nucleotídicas que codifican para unos polipéptidos de circovirus MAP, tales como los polipéptidos estructurales y no estructurales de dicho circovirus, así como a unos vectores que incluyen dichas secuencias y células o animales transformados por estos vectores. La descripción se refiere asimismo a unos procedimientos de detección de estos ácidos nucleicos o polipéptidos y a unos kits de diagnóstico de infección por el circovirus MAP. La descripción prevé también a un método de selección de compuestos capaces de modular la infección vírica. La descripción comprende la utilización del vector según la descripción para la prevención y/o el tratamiento de enfermedades mediante terapia génica.

Se ha descrito ampliamente la enfermedad del adelgazamiento del lechón (MAP) o también denominada decaimiento fatal del lechón (DFP) en América del Norte (Harding, J.C., 1997) , y unos autores han relatado la existencia de una relación entre esta patología y la presencia de circovirus porcino (Daft, B. et al., 1996; Clark, E.G., 1997; Harding, J.C., 1997; Harding, J.C. y Clark, E.G., 1997; Nayar, G.P. et al., 1997) . Ya se ha demostrado un circovirus porcino en unos cultivos celulares derivados del cerdo establecidos en línea e infectados crónicamente (Tischer, I., 1986, 1988, 1995; Dulac, G.C., 1989; Edwards, S., 1994; Allan, G.M., 1995 y McNeilly, F., 1996) . Este virus, durante una infección experimental de lechones, no resultaba ser patógeno para el cerdo (Tischer, I., 1986, Homer, G.W., 1991) y se ha determinado y caracterizado su secuencia nucleotídica (Tischer, I., 1982; Meehan, B. M. et al., 1997; Mankertz, A., 1997) . El circovirus porcino, denominado virus PCV, pertenece al género circovirus de la familia de los circoviridae (Murphy, F.A. et al., 1995) cuyo virión posee un ADN circular de tamaño comprendido entre 1, 7 y 2, 3 kb, ADN que comprende 3 marcos abiertos de lectura (ORF1 a ORF3) , que codifica para una proteína de replicación REP implicada en la fase de iniciación y de terminación de la replicación circular desarrolladora (RCR) (Heyraud-Nitschke, F., et al., 1995; Harding, M.R. et al., 1993; Hanson, S.F. et al., 1995; Fontes, E.P.B. et al., 1994) , que codifica para una proteína de cápside (Boulton, L.H. et al., 1997; Hackland, A.F. et al., 1994; Chu P.W.G. et al., 1993) y que codifica para una proteína no estructural denominada de diseminación (Lazarowitz, S.G. et al., 1989) .

Se puede citar asimismo el documento Meehan et al. (Journal of General Virology, vol. 79, nº 9, páginas 2171-2179, 1998) que describe el aislamiento de cuatro variantes de circovirus de tipo 2 (PCV2) a partir de cerdos que presentan el síndrome de la enfermedad del adelgazamiento del lechón. Este documento describe asimismo la secuencia genómica completa de estas cuatro variantes así como las secuencias peptídicas de cuatro ORF (ORF1, ORF2, ORF3 y ORF4) presentes en estos genomas.

Los autores de la presente invención han observado que las manifestaciones clínicas perceptibles en el cerdo y relacionadas con la infección por el circovirus MAP, están muy individualizadas. Estas manifestaciones aparecen en general en unos cerdos de 8 a 12 semanas de edad, destetados desde 4 a 8 semanas. Las primeras señales son la hipotonía sin que se llegue a hablar de postración. Rápidamente (48 horas) los flancos se ahuecan, se marca la línea de la espalda, los cerdos “blanquean”. Estas señales se acompañan en general de hipertermia, de anorexia y lo más frecuentemente de manifestaciones respiratorias (tos, disnea, polipnea) . Pueden aparecer asimismo unas diarreas transitorias. La fase de estado de la enfermedad tarda aproximadamente un mes al final del cual los 45 porcentajes de mortalidad varían de 5 a 20%. A estas mortalidades conviene añadir una proporción variable (5-10%) de animales cadavéricos que ya no pueden presentar ningún futuro económico. Se debe observar que fuera de este estado crítico de fin de post-destetado, no aparece ninguna anomalía en las ganaderías. En particular, la función de reproducción se mantiene perfectamente.

En el plano epidemiológico, las primeras manifestaciones de esta patología han aparecido a principios de 1995 en el Este del departamento de las Côtes d'Armor en Francia, y las ganaderías afectadas se han acantonado sobre todo en esta zona del departamento. En diciembre de 1996, no se puede evaluar con precisión el número de ganaderías afectadas debido a la ausencia de un método de diagnóstico específico en laboratorio ni un dispositivo de epidemiovigilancia del ganado. Basándose en los hechos clínicos así como en los resultados de exámenes 55 necrópsicos suministrados por los veterinarios, se puede estimar este número en varias decenas (80-100) . La contagiosidad de la enfermedad es baja a moderada. Se han señalado unos casos fuera de la zona inicial y son el resultado en su mayoría de la transferencia de animales procedentes de ganaderías que conocen el problema. Sin embargo, una particularidad de la afección es su alta persistencia. Así, unas ganaderías afectadas desde hace un año están todavía afectadas a pesar de la aplicación masiva de terapéuticos. Las ganaderías con expresión clínica se reclutan en las diferentes categorías de especialización (crías-cebadores, post-destetados-cebadores) y diferentes estructuras económicas están afectadas. Por otro lado, los trastornos aparecen incluso en unas ganaderías en las que se respetan las reglas de zootecnia.

Se han realizado numerosos exámenes necrópsicos o bien en las ganaderías o bien en el laboratorio. Los 65 elementos de la tabla relativa a las lesiones son disparatados. Las lesiones macroscópicas más constantes son la neumonía que se presenta a veces en cuadrícula, así como una hipertrofia de los ganglios linfáticos. Las demás lesiones se refieren sobre todo a las vísceras torácicas incluyendo en particular la pericarditis y la pleuresía. Pero se observan asimismo unas artritis y unas úlceras gástricas. Las lesiones reveladas en el examen histológico se sitúan esencialmente a nivel pulmonar (neumonía intersticial) , ganglionar (depleción linfoide de los nudos linfáticos, células gigantes) y renal (glomerulonefritis, vascularitis) . Los agentes infecciosos han sido objeto de amplias investigaciones. Se ha podido excluir la intervención de los pestivirus y de la enfermedad de Aujeszky. Los trastornos aparecen en los ganados SDRP (Síndrome Disgenésico y Respiratorio Porcino, infección relacionada con un arteriovirus) seropositivos, pero no se ha podido establecer la función de este último en la génesis de los trastornos (la mayoría de las ganaderías de Bretaña son SDRP seropositivas) .

La publicación de Meehan et al., (1998) varias secuencias nucleotídicas y de aminoácidos de los cuales se describen los ORF, en particular el ORF2:

• la secuencia AF055391 comprende una secuencia 100% idéntica a la SEC ID nº 20 y una secuencia 92%

idéntica a la SEC ID nº 15, 15

• la secuencia AF055392 comprende una secuencia 92% idéntica a la secuencia SEC ID nº 15,

• la secuencia AF055393 comprende una secuencia 100% idéntica a las SEC ID nº 17, 18, 19 y 20 y 99% idéntica a la secuencia SEC ID nº 15,

• la secuencia AF055394 comprende una secuencia 100% idéntica a las SEC ID nº 17, 18, 19 y 20 y 98% idéntica a la secuencia SEC ID nº 15.

Sin embargo, esta publicación no describe ninguna vacuna que comprenda estas secuencias.

Los autores de la presente invención, con el objetivo de identificar el agente etiológico responsable de la MAP, han realizado unas pruebas de “contacto” entre lechones manifiestamente “enfermos” y unos cerdos EOPS (Exentos de Organismos Patógenos Específicos) del CNEVA (Centro Nacional de Estudios Veterinarios y Alimenticios, Francia) . Estas pruebas han permitido observar el desarrollo en los animalarios protegidos de las manifestaciones comparables con las observadas en ganaderías. Las manifestaciones discretas tales como la hipertermia moderada, la anorexia y la diarrea intermitente, han aparecido después de una semana de contacto. Se debe observar que el virus SDRP únicamente se ha difundido posteriormente a las manifestaciones clínicas. Por otro lado, unas inoculaciones de triturados de órganos de animales enfermos a unos cerdos sanos ha permitido reproducir unas manifestaciones parecidas a las observadas en las ganaderías,... [Seguir leyendo]

1. Composición vacunal que comprende un polipéptido aislado codificado por una secuencia nucleotídica que tiene por lo menos 90% de identidad con la secuencia SEC ID nº 12 y que corresponde al ORF'2 de un circovirus MAP de 5 tipo B.

2. Composición vacunal según la reivindicación 1, caracterizada porque dicha secuencia nucleotídica tiene por lo menos 95% de identidad con la secuencia SEC ID nº 12.

3. Composición vacunal que comprende un polipéptido aislado de secuencia que tiene por lo menos 90% de identidad con la secuencia SEC ID nº 15 y que corresponde al ORF'2 de un circovirus MAP de tipo B.

4. Composición vacunal según la reivindicación 3, caracterizada porque la secuencia de dicho polipéptido tiene por

lo menos 95% de identidad con la secuencia SEC ID nº 15. 15

5. Composición vacunal según la reivindicación 3, caracterizada porque dicha secuencia incluye la secuencia SEC ID nº 17.

6. Composición vacunal según la reivindicación 3, caracterizada porque dicha secuencia incluye la secuencia SEC 20 ID nº 18.

7. Composición vacunal según la reivindicación 3, caracterizada porque dicha secuencia incluye la secuencia SEC ID nº 19.

8. Composición vacunal según la reivindicación 3, caracterizada porque dicha secuencia incluye la secuencia SEC ID nº 20.

9. Composición vacunal según una de las reivindicaciones 1 a 8, que comprende además por lo menos un adyuvante, un vehículo farmacéuticamente aceptable, o una de sus combinaciones. 30

10. Composición vacunal que comprende un vector para la expresión de un polipéptido aislado codificado por una secuencia nucleotídica que tiene por lo menos 90% de identidad con la secuencia SEC ID nº 12 y que corresponde al ORF'2 de un circovirus MAP de tipo B.