Anticuerpos humanos de alta afinidad dirigidos contra el receptor humano de IL-4.

Un anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une específicamente al receptor humano deinterleucina-4 (hIL-4R) (SEC ID Nº:

274) que comprende una región variable de cadena pesada (HCVR) quecomprende la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID Nº: 162 y una región variable de cadena ligera(LCVR) que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID Nº: 164.

Anticuerpos humanos de alta afinidad dirigidos contra el receptor humano de IL-4

Antecedentes La interleucina-4 (IL-4, conocida también como factor estimulante de células B o BSF-1) se caracterizó originalmente por su capacidad para estimular la proliferación de células B en respuesta a bajas concentraciones de anticuerpos dirigidos contra inmunoglobulinas de superficie. Se ha demostrado que la IL-4 posee un amplio espectro de actividades biológicas, incluyendo estimulación del crecimiento de células T, mastocitos, granulocitos, megacariocitos y eritrocitos. La IL-4 induce la expresión de moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad de clase II en células B en reposo, y potencia la secreción de los isotipos IgE e IgG1 por células B estimuladas.

Las actividades biológicas de la IL-4 están mediadas por receptores de la superficie celular específicos de IL-4. Por ejemplo, en las patentes de Estados Unidos Nos 5.599.905, 5.767.065 y 5.840.869, se describe el receptor alfa humano de IL-4 (hIL-4R) (SEC ID Nº: 274) . En las patentes de Estados Unidos Nos 5.717.072 y 7.186.809 se describen anticuerpos dirigidos contra el hIL-4R.

Para producir anticuerpos útiles como agentes terapéuticos en seres humanos los procedimientos incluyen generar anticuerpos quiméricos y anticuerpos humanizados (véase, por ejemplo, el documento US 6.949.245) . Véanse, por ejemplo, los documentos WO 94/02602 y US 6.596.541, que describen procedimientos de generación de ratones transgénicos no humanos capaces de producir anticuerpos humanos.

En las patentes de Estados Unidos Nos 5.714.146; 5.985.280 y 6.716.587 se describen procedimientos para el uso de anticuerpos dirigidos contra el hIL-4R.

Breve sumario de la invención La invención proporciona:

1. Un anticuerpo, o un fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une específicamente al receptor humano de interleucina 4 (hIL-4R) (SEC ID Nº: 274) , que comprende una región variable de cadena pesada (HCVR) que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID Nº: 162 y una región variable de cadena ligera (LCVR) que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID Nº: 164;

2. Un anticuerpo humano, o un fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une específicamente al receptor humano de interleucina-4 (hIL-4R) (SEC ID Nº: 274) , que comprende tres secuencias de la región determinante de la complementariedad de cadena pesada (HCDR) que comprenden las SEC ID Nos: 148, 150 y 152, respectivamente, y tres secuencias de la región determinante de la complementariedad de cadena ligera (LCDR) que comprenden las SEC ID Nos: 156, 158 y 160, respectivamente;

3. Una molécula de ácido nucleico que codifica el anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno, de (2) ;

4. Un vector que comprende la molécula de ácido nucleico de (3) ;

5. Una célula hospedadora aislada que comprende el vector de (4) ;

6. Un procedimiento de producción de un anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une específicamente al receptor humano de interleucina-4 (hIL-4R) , que comprende cultivar la célula hospedadora de (5) en condiciones en las que se exprese el anticuerpo, o el fragmento de unión a antígeno, y recuperar el anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno, expresado;

7. El uso del anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno, de acuerdo con (1) o (2) en la fabricación de un medicamento para el tratamiento del asma o de la dermatitis atópica;

8. Una composición terapéutica que comprende el anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno, de acuerdo con

(1) o (2) y un vehículo aceptable;

9. El anticuerpo, o fragmento de anticuerpo, de acuerdo con (1) o (2) para su uso en el tratamiento del asma o de la dermatitis atópica.

En el presente documento se desvelan anticuerpos humanos, preferentemente anticuerpos humanos recombinantes, que se unen específicamente al receptor humano de interleucina-4 (hIL-4R) . Los anticuerpos humanos se caracterizan por unirse al hIL-4R con una alta afinidad y por la capacidad para neutralizar la actividad de la hIL-4. En realizaciones específicas, los anticuerpos humanos pueden bloquear el complejo hIL-13/hIL-13R1 uniéndose al hIL-4R, y por tanto inhiben la señalización por la hIL-13. Los anticuerpos pueden ser de longitud completa (por ejemplo, un anticuerpo IgG1 o IgG4) o pueden comprender sólo una parte de unión a antígeno (por ejemplo, un fragmento Fab, F (ab') 2 o scFv) , y pueden modificarse para efectuar funcionalidades, por ejemplo, eliminar funciones efectoras residuales (Reddy et al. (2000) J. Immunol. 164:1925-1933) .

En el presente documento también se desvela un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une específicamente al hIL-4R (SEC ID Nº: 274) con una KD de aproximadamente 300 pM o menor, medida por resonancia de plasmón superficial en un ensayo monomérico o dimérico. En una realización más específica, el anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo presenta una KD de aproximadamente 200 pM o menor, aproximadamente 150 o menor, aproximadamente 100 pM o menor, o aproximadamente 50 pM. En diversas realizaciones, el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno bloquea la actividad de la hIL-4 con una CI50 de aproximadamente 100 pM o menor, medida por bioensayo con luciferasa. En realizaciones más específicas, el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno presenta una CI50 de aproximadamente 50 pM o menor, aproximadamente 30 pM o menor, o aproximadamente 25 pM o menor, medida por bioensayo con STAT6 luciferasa. En diversas realizaciones, el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno bloquea la actividad de la hIL-13 con una CI50 de aproximadamente 100 pM o menor, aproximadamente 90 pM o menor, aproximadamente 50 pM o menor, o aproximadamente 20 pM o menor, medida por bioensayo con STAT6 luciferasa.

En una realización, el anticuerpo, o fragmento de anticuerpo, de la invención comprende el par de secuencias HCVR y LCVR (HCVR/LCVR) de la SEC ID Nº: 162/164. Los anticuerpos ejemplares que tienen este par de secuencias HCVR/LCVR incluyen el anticuerpo denominado H4H098P.

En una realización, el anticuerpo de la invención comprende una HCVR y LCVR codificada por el par de secuencias de nucleótidos de la SEC ID Nº: 161/163.

De acuerdo con determinadas realizaciones, la presente invención proporciona anticuerpos anti-hIL-4R, o fragmentos de unión a antígeno de los mismos, que tienen las secuencias HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3 seleccionadas de las SEC ID Nos: 148/150/152/156/158/160. Los anticuerpos ejemplares que tienen estas secuencias HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3 incluyen el anticuerpo denominado H4H098P (SEC ID Nos: 148/150/152/156/158/160) . En una realización adicional, la invención presenta un anticuerpo humano o fragmento de anticuerpo que comprende las secuencias HCDR y LCDR codificadas por las secuencias de nucleótidos de las SEC ID Nos: 147, 149, 151, 155, 157 y 159.

En una realización específica, el anticuerpo anti-hIL-4R o fragmento de unión a antígeno de la invención comprende la HCVR que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID Nº: 162 y la LCVR que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID Nº: 164, y se caracteriza por una KD de aproximadamente 100 pM

o menor (sustrato monomérico) o 70 pM o menor (sustrato dimérico) ; una KD de aproximadamente 160 pM o menor (sustrato monomérico) o 40 pM o menor (sustrato dimérico) a 25°C y 37°C, respectivamente; y una CI50 de aproximadamente 10 pM o menor (sustrato dimérico 25 pM) o aproximadamente 100 pM o menor (sustrato monomérico 200 pM) , que puede bloquear la actividad tanto de la hIL-4 como de la hIL-13 con una CI50 de aproximadamente 30 pM o menor (medida por bioensayo) y una reacciona en cruzado con IL- 4R de mono.

En el presente documento también se describe un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno que comprende las secuencias HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3 de un par HCVR y LCVR, en el que las secuencias HCVR/LCVR se seleccionan de la SEC ID Nº: 162/164.

La invención incluye anticuerpos anti-hIL-4R que tienen un modelo de glucosilación modificado. En algunas aplicaciones, para eliminar sitios de glucosilación no deseables puede ser útil la modificación, o un anticuerpo que carezca de un resto de fucosa presente en la cadena del oligosacárido, por ejemplo, para aumentar la función de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo (ADCC) (véase, Shield et al. (2002) JBC 277:26733) . En otras aplicaciones, para modificar la citotoxicidad dependiente de complemento (CDC) puede realizarse la modificación de una galactosilación.

Adicionalmente, en el presente documento... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une específicamente al receptor humano de interleucina-4 (hIL-4R) (SEC ID Nº: 274) que comprende una región variable de cadena pesada (HCVR) que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID Nº: 162 y una región variable de cadena ligera (LCVR) que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID Nº: 164.

2. Un anticuerpo humano, o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une específicamente al receptor humano de interleucina-4 (hIL-4R) (SEC ID Nº: 274) , que comprende tres secuencias de la región determinante de la complementariedad de cadena pesada (HCDR) que comprenden las SEC ID Nos: 148, 150 y 152, respectivamente, y tres secuencias de la región determinante de la complementariedad de cadena ligera (LCDR) que comprenden las SEC ID Nos: 156, 158 y 160, respectivamente.

3. El anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno, de la reivindicación 2, que comprende una región variable de cadena pesada (HCVR) que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 162.

4. El anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno, de la reivindicación 2, que comprende una región variable de cadena ligera (LCVR) que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 164.

5. Una molécula de ácido nucleico que codifica el anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno, de la reivindicación

2.

6. Un vector que comprende la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 5.

7. Una célula hospedadora aislada que comprende el vector de la reivindicación 6.

8. Un procedimiento de producción de un anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une específicamente al receptor humano de interleucina-4 (hIL-4R) , que comprende cultivar la célula hospedadora de la reivindicación 7 en condiciones en las que el anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno, se exprese, y recuperar el anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno, así expresado.

9. El procedimiento de la reivindicación 8, en el que la célula hospedadora es una célula procariota o eucariota.

10. El procedimiento de la reivindicación 8 o 9, en el que la célula hospedadora es una célula de E .coli o una célula CHO.

11. El uso del anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento del asma.

12. El uso del anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de dermatitis atópica.

13. Una composición terapéutica que comprende el anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y un vehículo aceptable.

14. La composición terapéutica de la reivindicación 13, que adicionalmente comprende un segundo agente terapéutico seleccionado de montelukast, pranlukast, zafirlukast y rilonacept.

15. El anticuerpo, o fragmento de anticuerpo, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para su uso en el tratamiento del asma o de la dermatitis atópica.