Anticuerpos contra la ERBB3 y usos de los mismos.

Un anticuerpo monoclonal aislado o una porción de unión al antígeno del mismo que se une a la ErbB3 humana yque comprende:

(a) una región variable de la cadena pesada, donde la CDR1 comprende la secuencia de aminoácidos de la SECID Nº: 7, la CDR2 comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 8 y la CDR3 comprende lasecuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 9; y

una región variable de la cadena ligera, donde la CDR1 comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC IDNº: 10, la CDR2 comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 11 y la CDR3 comprende lasecuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 12; o

(b) una región variable de la cadena pesada, donde la CDR1, la CDR2 y la CDR3 comprenden unas secuenciasde aminoácidos que son idénticas en al menos el 90% a las secuencias de aminoácidos de la CDR1, de la CDR2y de la CDR3 definidas en (a); y

una región variable de la cadena ligera, donde la CDR1, la CDR2 y la CDR3 comprenden unas secuencias deaminoácidos que son idénticas en al menos el 90% a las secuencias de aminoácidos de la CDR1, de la CDR2 yde la CDR3 definidas en (a), y donde el anticuerpo o una porción de unión al antígeno del mismo es capaz deinhibir la fosforilación mediada por el ligando de tipo EGF de la ErbB3.

Anticuerpos contra la ERBB3 y usos de los mismos

Antecedentes de la invención La subfamilia de receptores de factores de crecimiento polipeptidicos ErbB/HER incluye el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGF) (EGFR, ErbB1/HER1) , el producto del oncogén neu (ErbB2/HER2) y las más recientemente identificadas proteínas de los receptores ErbB3/HER3 y ErbB4/HER4 (véase, por ejemplo, Hynes y col. (1994) Biochim. Biophys. Acta Rev. Cancer 1198, 165 -184) . Se ha predicho que cada uno de estos receptores consiste en un dominio extracelular de unión a ligando, un dominio que abarca la membrana, un dominio citosólico de tirosina cinasa de proteína (PTK) y un dominio de fosforilación C-terminal (véase, por ejemplo, Kim y col., (1998) Biochem. J. 334, 189 -195) .

Algunos experimentos in vitro han indicado que la actividad tirosina cinasa de proteína de la proteína ErbB3 está significativamente atenuada en comparación con la de otros miembros de la familia ErbB/HER, y esta atenuación se ha atribuido en parte a la aparición de sustituciones no conservativas de aminoácidos en el dominio catalítico predicho de la ErbB3 (véase, por ejemplo, Guy y col. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. 91, 8132 -8136; Sierke y col. (1997) Biochem. J. 322, 757 -763) . Sin embargo, se ha demostrado que la proteína ErbB3 está fosforilada en varios contextos celulares. Por ejemplo, la ErbB3 está fosforilada de forma constitutiva en los residuos de tirosina de un subconjunto de líneas celulares de cáncer de mama humano que sobreexpresan esta proteína (véase, por ejemplo, Kraus y col. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. 90, 2900 -2904; y Kim y col. Supra; véase también, Schaefer y col. (2006) Neoplasia 8 (7) : 613 -22 y Schaefer y col. Cancer Res (2004) 64 (10) : 3395 -405) .

Aunque se ha explorado el papel de la ErbB3 en el cáncer (véase, por ejemplo, Horst y col. (2005) 115, 519 -527; Xue y col. (2006) Cancer Res. 66, 1418 -1426) , la ErbB3 sigue estando poco valorada como objetivo de intervención clínica. Las inmunoterapias actuales se centran principalmente en inhibir la acción de la ErbB2 y, en particular, la heterodimerización de los complejos de ErbB2/ErbB3 (véase, por ejemplo, Sliwkowski y col. (1994) J. Biol. Chem. 269 (20) : 14661 -14665 (1994) ) . Consecuentemente, es un objeto de la presente invención proporcionar inmunoterapias mejoradas que inhiban de forma eficaz la señalización de la ErbB3, y que pueden usarse para tratar y diagnosticar varios cánceres.

El documento EP-A-1283053 describe el uso de un inhibidor de la actividad de la ErbB3, particularmente un anticuerpo anti-ErbB3 para el diagnóstico, la prevención o el tratamiento de enfermedades hiperproliferativas.

El documento WO 2006/091209 describe procedimientos para mejorar la capacidad de unión específica de composiciones de unión biespecíficas. En una forma de realización la molécula objetivo es la ErbB3.

El documento WO 97/35885 describe anticuerpos que se unen a la proteína ErbB3 y adicionalmente poseen la capacidad de reducir la formación inducida por herregulina de un complejo de ErbB2-proteína ErbB3, de aumentar la afinidad de unión de la herregulina por la proteína ErbB3 y/o de reducir la activación inducida por herregulina de la ErbB2 en una célula que expresa ErbB2 y ErbB3.

Lee y Maihle (Oncogene (1998) 16: 3243 -3252) describen el aislamiento y la caracterización de cuatro transcritos 45 alternativos de c-erbB3 expresados en líneas celulares derivadas de carcinoma de ovario y en tejidos humanos normales.

Pinkas-Kramarski y col. (Oncogene (1998) 16: 1249 -1258) desvelan que heterodimero oncogénico de ErbB2/ErbB3 es un receptor sustituto del factor de crecimiento epidérmico y de la betacelulina.

Resumen de la Invención La presente invención proporciona una nueva clase de anticuerpos monoclonales que se unen al receptor de la ErbB3 e inhiben varias funciones de la ErbB3. La invención proporciona un anticuerpo o una porción de unión al

antígeno del mismo que se une a la ErbB3 humana y que comprende:

(a) una región variable de la cadena pesada, donde la CDR1 comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 7, la CDR2 comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 8 y la CDR3 comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 9; y una región variable de la cadena ligera, donde la CDR1 comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 10, la CDR2 comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 11 y la CDR3 comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 12; o

(b) una región variable de la cadena pesada, donde la CDR1, la CDR2 y la CDR3 comprenden unas secuencias de aminoácidos que son idénticas en al menos el 90% a las secuencias de aminoácidos de la CDR1, de la CDR2 y de la CDR3 definidas en (a) ; y una región variable de la cadena ligera, donde la CDR1, la

CDR2 y la CDR3 comprenden unas secuencias de aminoácidos que son idénticas en al menos el 90% a las secuencias de aminoácidos de la CDR1, de la CDR2 y de la CDR3 definidas en (a) y donde el anticuerpo o una porción de unión al antígeno del mismo es capaz de inhibir la fosforilación mediada por el ligando de tipo EGF de la ErbB3.

Según se describe en este documento, los ligandos de tipo EGF incluyen EGF, TGF-α, betacelulina, factor de crecimiento epidérmico de unión a la heparina, birregulina y anfirregulina, que se unen al EGFR e inducen la dimerización del EGFR con la ErbB3. Esta dimerización, a su vez, provoca la fosforilación de la ErbB3, y activa la señalización a través del receptor. Los anticuerpos monoclonales de la presente invención, son por lo tanto útiles para el tratamiento y el diagnóstico de varios cánceres asociados con la señalización celular mediada por la ErbB3.

En otra forma de realización, los anticuerpos se caracterizan adicionalmente por una o más de las siguientes propiedades: (i) inhibición de la señalización mediada por ligando de la ErbB3, incluyendo la señalización mediada por la unión de ligandos de la ErbB3, tales como herregulina, epiregulina, epigenina y BIR, a la ErbB3 ; (ii) inhibición de la proliferación de células que expresan la ErbB3 ; (iii) capacidad para disminuir los niveles de la ErbB3 en la superficie de las células (por ejemplo, induciendo la internalización de la ErbB3 ) ; (iv) inhibición de la secreción del

VEGF en las células que expresan la ErbB3 ; (v) inhibición de la migración de las células que expresan la ErbB3; (vi) inhibición del crecimiento esferoidal de las células que expresan la ErbB3 ; y/o (vii) unión a un epítopo ubicado en el dominio I (residuos 20 -209) de la ErbB3, por ejemplo, un epítopo que implica o abarca los residuos 20 -202 de la secuencia de aminoácidos de la ErbB3 .

Los anticuerpos monoclonales y las porciones de unión al antígeno de los mismos en particular de la presente invención muestran una KD de 50 nM o menos, medida mediante un ensayo de resonancia de plasmón superficial o un ensayo de unión celular.

Los anticuerpos monoclonales y las porciones de unión al antígeno de los mismos en particular de la presente invención incluyen una región variable de la cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos el 90% (por ejemplo, el 95%, el 96%, el 97%, el 98% o el 99%) a la región variable de la cadena pesada secuencia de aminoácidos establecida en la SEC ID Nº: 1, en la SEC ID Nº: 3, en la SEC ID Nº: 5, en la SEC ID Nº: 35 o en la SEC ID Nº: 37. Otros anticuerpos monoclonales y porciones de unión al antígeno de los mismos en particular de la presente invención incluyen una región variable de la cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos el 90% (por ejemplo, el 95%, el 96%, el 97%, 98% o el 99%) a la región variable de la cadena ligera secuencia de aminoácidos establecida en la SEC ID Nº: 2, en la SEC ID Nº: 4, en la SEC ID Nº: 6, en la SEC ID Nº: 36 o en la SEC ID Nº: 38. Los anticuerpos también pueden incluir ambas de las anteriormente mencionadas regiones variables de la cadena pesada y de la cadena ligera.

La solicitud también describe anticuerpos y porciones de unión al antígeno de los mismos que incluyen una o más secuencias de CDR elegidas de entre una región variable de la cadena pesada CDR1 que comprende la SEC ID Nº: 13; una región variable de la cadena pesada CDR2 que comprende la SEC ID Nº: 14; una región variable de la cadena pesada CDR3 que comprende la SEC ID Nº: 15; una región variable de la cadena ligera CDR1 que comprende la SEC ID Nº: 16; una región variable de la cadena ligera CDR2 que comprende la SEC ID Nº: 17; una región variable de la cadena ligera CDR3 que... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo monoclonal aislado o una porción de unión al antígeno del mismo que se une a la ErbB3 humana y

que comprende: 5

(a) una región variable de la cadena pesada, donde la CDR1 comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 7, la CDR2 comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 8 y la CDR3 comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 9; y una región variable de la cadena ligera, donde la CDR1 comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 10, la CDR2 comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 11 y la CDR3 comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 12; o

(b) una región variable de la cadena pesada, donde la CDR1, la CDR2 y la CDR3 comprenden unas secuencias de aminoácidos que son idénticas en al menos el 90% a las secuencias de aminoácidos de la CDR1, de la CDR2 y de la CDR3 definidas en (a) ; y

una región variable de la cadena ligera, donde la CDR1, la CDR2 y la CDR3 comprenden unas secuencias de aminoácidos que son idénticas en al menos el 90% a las secuencias de aminoácidos de la CDR1, de la CDR2 y de la CDR3 definidas en (a) , y donde el anticuerpo o una porción de unión al antígeno del mismo es capaz de inhibir la fosforilación mediada por el ligando de tipo EGF de la ErbB3.

2. El anticuerpo o una porción de unión al antígeno del mismo de la reivindicación 1, donde la CDR1 de la cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 7, la CDR2 de la cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 8, la CDR3 de la cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 9, la CDR1 de la cadena ligera comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 10, la CDR2 de la cadena ligera comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 11, y la CDR3 de la cadena ligera comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 12.

3. El anticuerpo o una porción de unión al antígeno del mismo de la reivindicación 1 o 2, donde la región variable de la cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 1 y la región variable de la cadena ligera comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 2.

4. El anticuerpo o una porción de unión al antígeno del mismo de la reivindicación 1, donde el ligando de tipo EGF es betacelulina.

5. El anticuerpo o una porción de unión al antígeno del mismo de la reivindicación 4, que es capaz de inhibir la 35 fosforilación mediada por betacelulina de la ErbB3 en células AdrR in vitro.

6. El anticuerpo o una porción de unión al antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el anticuerpo se elige de entre el grupo que consiste en un anticuerpo humano, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo biespecífico y un anticuerpo quimérico.

7. El anticuerpo o una porción de unión al antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el anticuerpo o una porción de unión al antígeno del mismo se elige de entre el grupo que consiste en un Fab, un Fab’2, un ScFv y un anticuerpo de dominio.

8. El anticuerpo o una porción de unión al antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el isotipo de anticuerpo se elige de entre el grupo que consiste en un anticuerpo de una IgG1, de una IgG2, de una IgG3, de una IgG4, de una IgM, de una IgA1, de una IgA2, de una IgAsec, de una IgD y de una IgE.

9. Una composición que comprende el anticuerpo o una porción de unión al antígeno de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes en un portador farmacéuticamente aceptable.

10. Una composición de un ácido nucleico aislado que codifica para un anticuerpo humano que se une a la ErbB3 humana según la reivindicación 1, composición que comprende un ácido nucleico que comprende una secuencia

que codifica para una región variable de la cadena pesada, secuencia que es idéntica en al menos el 90% a, o es una secuencia que hibrida en condiciones de alta rigurosidad con, la SEC ID Nº: 25, y un ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica para una región variable de la cadena ligera, secuencia que es idéntica en al menos el 90% a, o es una secuencia que hibrida en condiciones de alta rigurosidad con, la SEC ID Nº: 26.

11. La composición de ácidos nucleicos de la reivindicación 10, en la que la secuencia de nucleótidos que codifica para una región variable de la cadena pesada comprende la SEC ID Nº: 25 y la secuencia de nucleótidos que codifica para una región variable de la cadena ligera comprende la SEC ID Nº: 26.

12. La composición de ácidos nucleicos de la reivindicación 10 u 11, donde cada ácido nucleico está comprendido 65 en un vector de expresión.

13. Una célula hospedadora que comprende la composición de ácidos nucleicos de una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12.

14. Un mamífero transgénico no humano o una planta transgénica que expresa el anticuerpo o una porción de unión 5 al antígeno de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

15. Una célula hospedadora que produce un anticuerpo o una porción de unión al antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

16. Una célula hospedadora según la reivindicación 15 donde el anticuerpo está codificado por la secuencia de nucleótidos de una región variable de la cadena pesada establecida en la SEC ID Nº: 25 y la secuencia de nucleótidos de una región variable de la cadena ligera establecida en la SEC ID Nº: 26, y modificaciones conservativas de la secuencia de las mismas.

17. Un kit que comprende un anticuerpo monoclonal aislado o una porción de unión al antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, e instrucciones para su uso en el tratamiento o el diagnóstico de una enfermedad asociada con la señalización dependiente de la ErbB3, donde opcionalmente la enfermedad es un cáncer.

18. Un anticuerpo o una porción de unión al antígeno del mismo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para su uso en un procedimiento para inhibir la fosforilación mediada por ligando de tipo EGF de la ErbB3 o para el tratamiento del cáncer en un sujeto humano.

19. El anticuerpo o una porción de unión al antígeno del mismo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8

para su uso según la reivindicación 18, donde el cáncer es cáncer de páncreas, melanoma, cáncer de mama, cáncer de ovario, carcinoma renal, cáncer gastrointestinal/de colon, cáncer de pulmón, sarcoma de células claras o cáncer de próstata.

20. Un anticuerpo o una porción de unión al antígeno del mismo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 30 para su uso según la reivindicación 18, donde:

-el anticuerpo o una porción de unión al antígeno del mismo se administra por vía intravenosa, intramuscular o subcutánea al sujeto; y/o -el anticuerpo o una porción de unión al antígeno del mismo se administra junto con un segundo agente

terapéutico, donde el segundo agente terapéutico es (a) un segundo anticuerpo antineoplásico; o (b) una molécula antineoplásica pequeña.

21. El anticuerpo o una porción de unión al antígeno del mismo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8

para su uso según la reivindicación 20, donde el anticuerpo antineoplásico es un anticuerpo anti-IGF1R, un 40 anticuerpo anti-EGFR o un anticuerpo anti-cMet.

22. El anticuerpo o una porción de unión al antígeno del mismo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para su uso según la reivindicación 20, donde la pequeña molécula antineoplásica es un antimetabolito, un agente alquilante, un inhibidor de la topoisomerasa, un agente dirigido a los microtúbulos, un inhibidor de la cinasa, un 45 inhibidor de la síntesis de proteínas, un inmunoterapéutico, una hormona o un análogo de la misma, un análogo de somatostatina, un glucocorticoide, un inhibidor de la aromatasa, un inhibidor de la mTOR, una molécula pequeña dirigida al IGF1R o una molécula pequeña dirigida al EGFR.

23. Un anticuerpo o una porción de unión al antígeno del mismo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8

para su uso en un procedimiento para diagnosticar un cáncer asociado con la ErbB3 en un sujeto humano, que comprende (a) poner en contacto ex vivo o in vivo células procedentes del sujeto con dicho anticuerpo o con una porción de unión al antígeno del mismo, y (b) medir el nivel de unión de dicho anticuerpo o porción de unión al antígeno a la ErbB3 en las células, donde unos niveles anormalmente elevados de unión de dicho anticuerpo o porción de unión al antígeno a la ErbB3 indican que el sujeto tiene un cáncer asociado con la ErbB3.

Secuencia de aminoácidos de la VH del Ab # 6 (SEC ID Nº: 1)

Secuencia de aminoácidos de la VL del Ab # 6 (SEC ID Nº: 2)

Secuencia de aminoácidos de la VH del Ab # 3 (SEC ID Nº: 3)

Secuencia de aminoácidos de la VL del Ab # 3 (SEC ID Nº: 4)

Secuencia de aminoácidos de la VH del Ab # 14 (SEC ID Nº: 5)

Secuencia de aminoácidos de la VL del Ab # 14 (SEC ID Nº: 6)

Secuencia de aminoácidos de la VH del Ab # 17 (SEC ID Nº: 35)

Secuencia de aminoácidos de la VL del Ab # 17 (SEC ID Nº: 36)

Secuencia de aminoácidos de la VH del Ab # 19 (SEC ID Nº: 37)

Secuencia de aminoácidos de la VL del Ab # 19 (SEC ID Nº: 38)

Secuencia de ácidos nucleicos optimizada del codón de la VH del Ab # 6 (SEC ID Nº: 25)

Secuencia de ácidos nucleicos optimizada del codón de la VL del Ab # 6 (SEC ID Nº: 26)

Secuencia de ácidos nucleicos optimizada del codón de la VH del Ab # 3 (SEC ID Nº: 27)

Secuencia de ácidos nucleicos optimizada del codón de la VL del Ab # 3 (SEC ID Nº: 28)

Secuencia de ácidos nucleicos de la VH del Ab # 14 (SEC ID Nº: 29)

Secuencia de ácidos nucleicos de la VL del Ab # 14 (SEC ID Nº: 30)

Pre-optimización de la secuencia de ácidos nucleicos de la VH del Ab # 6 (SEC ID Nº: 31)

Pre-optimización de la secuencia de ácidos nucleicos de la VL del Ab # 6 (SEC ID Nº: 32)

Pre-optimización de la secuencia de ácidos nucleicos de la VH del Ab # 3 (SEC ID Nº: 33)

Pre-optimización de la secuencia de ácidos nucleicos de la VL del Ab # 3 (SEC ID Nº: 34)