Ligadores de seroalbúmina humana y sus conjugados.

Un agente que comprende un ligador de seroalbúmina humana (HSA) que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 95% de identidad de secuencia con la secuencia expuesta en SEC ID NO:

1, y que comprende un primer resto de unión enlazado al término amino de dicho ligador de HSA y un segundo resto de unión enlazado al término carboxi de dicho ligador de HSA, en el que cada uno de dichos restos de unión primero y segundo se une específicamente a ErbB2 o ErbB3, y en el que:

i) si dicho primer resto de unión se une específicamente a ErbB3, dicho segundo resto de unión se une específicamente a ErbB2; y

ii) si dicho primer resto de unión se une específicamente a ErbB2, dicho segundo resto de unión se une específicamente a ErbB3.

Ligadores de seroalbúmina humana y sus conjugados CAMPO DE LA INVENCIÓN

La invención proporciona un ligador de seroalbúmina humana (HSA) , y sus conjugados de unión, de diagnóstico, y terapéuticos. En una realización, el ligador de HSA incluye dos sustituciones de aminoácidos. La invención proporciona además métodos para la fabricación y administración de conjugados de diagnóstico y terapéuticos del ligador de HSA.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Las seroalbúminas pertenecen a una familia de proteínas que incluye alfa-fetoproteína y un componente específico del grupo humano, también conocido como proteína de unión a vitamina D. Las seroalbúminas son las proteínas solubles principales del sistema circulatorio, y contribuyen a muchos procesos fisiológicos vitales. La seroalbúmina comprende generalmente alrededor de 50% del componente sanguíneo total en peso seco. Las albúminas y sus proteínas sanguíneas relacionadas también desempeñan un papel importante en el transporte, distribución, y metabolismo de muchos ligandos endógenos y exógenos en el cuerpo humano, incluyendo una variedad de moléculas químicamente diversas, tales como ácidos grasos, aminoácidos, esteroides, calcio, metales tales como cobre y cinc, y diversos agentes farmacéuticos. Se piensa generalmente que la familia de moléculas de las albúminas facilita la transferencia de muchos de estos ligandos a través de interfaces organocirculatorias, tales como el hígado, intestino, riñones, y el cerebro. Las albúminas están implicadas así en un amplio intervalo de funciones circulatorias y metabólicas.

La seroalbúmina humana (HSA) es una proteína de alrededor de 66.500 kD, y comprende 585 aminoácidos, incluyendo al menos 17 puentes de disulfuro. Al igual que con muchos de los miembros de la familia de albúminas, la seroalbúmina humana desempeña un papel importante en la fisiología humana, y está localizada en virtualmente cada tejido humano y secreción corporal. Como se indica anteriormente, HSA tiene la capacidad para unir y transportar un amplio espectro de ligandos a lo largo del sistema circulatorio, incluyendo los ácidos grasos de cadena larga, que de otro modo son insolubles en el plasma circulante.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

En un aspecto, la invención proporciona un agente que comprende un ligador de seroalbúmina humana (HSA) que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 95% de identidad de secuencia con la secuencia expuesta en SEC ID NO: 1, y que comprende un primer resto de unión enlazado al término amino de dicho ligador de HSA y un segundo resto de unión enlazado al término carboxi de dicho ligador de HSA, en el que cada uno de dichos restos de unión primero y segundo se une específicamente a ErbB2 o ErbB3, y en el que:

i) si dicho primer resto de unión se une específicamente a ErbB3, dicho segundo resto de unión se une específicamente a ErbB2; y

ii) si dicho primer resto de unión se une específicamente a ErbB2, dicho segundo resto de unión se une específicamente a ErbB3.

En un aspecto adicional, la invención proporciona un kit que comprende el agente de la invención e instrucciones para administrar dicho agente a un paciente, en el que preferiblemente dicho paciente tiene una enfermedad proliferativa, tal como melanoma, sarcoma de células claras, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de vejiga, cáncer de mama, en el que preferiblemente dicho cáncer de mama expresa ErbB2 y opcionalmente dicho cáncer de mama sobreexpresa ErbB2, cáncer de colon, cáncer ovárico, cáncer endometrial, cáncer gástrico, cáncer pancreático, cáncer renal, cáncer de próstata, cáncer de la glándula salival, cáncer de pulmón, cáncer hepático, cáncer de piel, o cáncer de cerebro.

En un primer aspecto, la invención incluye un agente que incluye un ligador de seroalbúmina humana (HAS) que tiene una secuencia de aminoácidos expuesta en una cualquiera de SEC ID NOS: 6-10 y restos de unión primero y segundo seleccionados de anticuerpos, moléculas de Fv monocatenario, moléculas de Fv monocatenario biespecífico ( (ScFv’) 2) , anticuerpos de dominio, dianticuerpos, trianticuerpos, hormonas, fragmentos Fab, moléculas F (ab’) 2, fragmentos de scFv en tándem (taFv) , receptores (por ejemplo, receptores de la superficie celular) , ligandos, aptámeros, y sus fragmentos biológicamente activos, en el que el primer resto de unión está enlazado al término amino del ligador de HSA, y el segundo resto de unión está enlazado al término carboxi del ligador de HSA. En una realización, el primer resto de unión se une específicamente a ErbB3, y el segundo resto de unión se une específicamente a ErbB2. En otras realizaciones, el ligador de HSA tiene las secuencias de aminoácidos expuestas en SEC ID NOS: 9 ó 10.

En un segundo aspecto, la invención incluye un agente que incluye un ligador de HSA que tiene una secuencia de aminoácidos expuesta en una cualquiera de SEC ID NOS: 11-15 y al menos restos de unión primero y segundo, que se pueden seleccionar de anticuerpos, moléculas de Fv monocatenario, moléculas de Fv monocatenario biespecífico

( (ScFv’) 2) , anticuerpos de dominio, dianticuerpos, trianticuerpos, hormonas, fragmentos Fab, moléculas F (ab’) 2, fragmentos de scFv en tándem (taFv) , receptores (por ejemplo, receptores de la superficie celular) , ligandos, aptámeros, y sus fragmentos biológicamente activos, en el que el primer resto de unión está enlazado al término amino y el segundo resto de unión está enlazado al término carboxi de la secuencia. En una realización, se pueden incluir en el agente tres o más restos de unión (por ejemplo, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, o más) ; estos restos de unión adicionales se pueden añadir al agente, por ejemplo, en tándem (por ejemplo, 2, 3, 4, ó 5 o más en tándem) con el o segundo resto de unión. En una realización, el primer resto de unión se une específicamente a ErbB3, y el segundo resto de unión se une específicamente a ErbB2. En otras realizaciones, el ligador de HSA tiene las secuencias de aminoácidos expuestas en SEC ID NOS: 14 ó 15.

En un tercer aspecto, la invención proporciona un ligador de HSA que tiene una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con la secuencia expuesta en SEC ID NO: 1, y un resto de serina en la posición 34 y un resto de glutamina en la posición 503 de la secuencia de aminoácidos expuesta en SEC ID NO: 1. En una realización, la secuencia de aminoácidos tiene al menos 95% de identidad de secuencia con la secuencia expuesta en SEC ID NO: 1. En otra realización, el ligador de HSA tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en SEC ID NO: 1.

En un cuarto aspecto, la invención incluye un agente que incluye un ligador de HSA que tiene al menos 90% de identidad de secuencia de aminoácidos con la secuencia expuesta en SEC ID NO: 1 y al menos un primer resto de unión. En una realización, el agente incluye un primer conector polipeptídico que une el primer resto de unión al ligador de HSA.

En un quinto aspecto, la invención incluye un agente que incluye un ligador de HSA que tiene una secuencia de aminoácidos expuesta en una cualquiera de SEC ID NOS: 11-15, o un fragmento o variante de una cualquiera de estas secuencias, y al menos un primer resto de unión.

En el cuarto o quinto aspecto de la invención, el agente incluye además un primer conector polipeptídico (por ejemplo, AAS, AAQ, o AAAL) que une el primer resto de unión al término amino o carboxi del ligador de HSA. En una realización, el primer conector une covalentemente el primer resto de unión al ligador de HSA.

En el cuarto o quinto aspecto de la invención, el agente incluye además al menos un segundo resto de unión. En una realización, el agente incluye además un segundo conector polipeptídico (por ejemplo, AAS, AAQ, o AAAL) que une el segundo resto de unión al ligador de HSA. En otras realizaciones, el segundo conector une el segundo resto de unión al término amino o carboxi del ligador de HSA. En una realización adicional, el segundo conector une covalentemente el segundo resto de unión al ligador de HSA. En otras realizaciones, el agente incluye además tres o más restos de unión que están incluidos en tándem con el primer o segundo resto de unión; los restos de unión tercero o más pueden incluir además una secuencia conectora que une los tres o más restos de unión al primer o segundo resto de unión y entre sí.

En el cuarto o quinto aspecto de la invención, el agente incluye un primer conector polipeptídico que une covalentemente un primer resto de unión al término amino del ligador de HSA, y un segundo conector polipeptídico que une covalentemente un segundo... [Seguir leyendo]

1. Un agente que comprende un ligador de seroalbúmina humana (HSA) que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 95% de identidad de secuencia con la secuencia expuesta en SEC ID NO: 1, y que comprende un primer resto de unión enlazado al término amino de dicho ligador de HSA y un segundo resto de unión enlazado al término carboxi de dicho ligador de HSA, en el que cada uno de dichos restos de unión primero y segundo se une específicamente a ErbB2 o ErbB3, y en el que:

i) si dicho primer resto de unión se une específicamente a ErbB3, dicho segundo resto de unión se une específicamente a ErbB2; y

ii) si dicho primer resto de unión se une específicamente a ErbB2, dicho segundo resto de unión se une específicamente a ErbB3.

2. El agente de la reivindicación 1, en el que dicha secuencia de aminoácidos comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 1.

3. El agente de la reivindicación 1 ó 2, que comprende además conectores polipeptídicos en los términos amino y/o carboxi de dicho ligador de HSA que enlazan covalentemente a dicho primer y/o segundo resto de unión a dicho ligador de HSA, en el que preferiblemente cada uno de dichos conectores polipeptídicos comprende 2 a 20 restos de aminoácidos.

4. El agente de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicho primer resto de unión se une específicamente a ErbB2, y dicho segundo resto de unión se une específicamente a ErbB3.

5. El agente de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicho primer resto de unión se une específicamente a ErbB3, y dicho segundo resto de unión se une específicamente a ErbB2.

6. El agente de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que dicho primer o segundo resto de unión es una molécula de Fv monocatenario, en el que preferiblemente dicha molécula de Fv monocatenario es humana o humanizada.

7. El agente de la reivindicación 5, en el que dicho primer resto de unión se une a ErbB3 con una Kd en el intervalo de alrededor de 1 nM a alrededor de 50 nM, preferiblemente dicho Kd es alrededor de 16 nM, y dicho segundo resto de unión se une a ErbB2 con una Kd en el intervalo de alrededor de 0, 01 nM a alrededor de 10 nM, preferiblemente dicha Kd es alrededor de 0, 3 nM.

8. El agente de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que dicho primer resto de unión tiene al menos 97% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos expuesta en SEC ID NO: 26 y dicho segundo resto de unión tiene al menos 97% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos expuesta en SEC ID NO:

27.

9. El agente de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que dicho primer resto de unión se une específicamente a ErbB2 y es un scFv que comprende la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEC ID NOs: 27, 29, y 32, y en el que dicho segundo resto de unión se une específicamente a ErbB3 y es un scFv que comprende la secuencia de una cualquiera de SEC ID NOs: 26, 28, 30, y 31.

10. El agente de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que dicho primer resto de unión se une específicamente a ErbB3 y es un scFv que comprende la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEC ID NOs: 26, 28, 30, y 31, y en el que dicho segundo resto de unión se une específicamente a ErbB2 y es un scFv que comprende la secuencia de una cualquiera de SEC ID NOs: 27, 29, y 32; en el que preferiblemente (i) dicho agente comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 16; en el que dicho agente permanece estable, reteniendo capacidad comparable para unirse tanto a ErbB2 como a ErbB3 antes y después de la incubación en suero humano a 37º C durante 120 horas.

11. El agente de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que dicho agente:

i) se mezcla con un vehículo, excipiente, o diluyente farmacéuticamente aceptable; y/o ii) es capaz de unirse a y exterminar una célula tumoral, o inhibir la proliferación de células tumorales; y/o iii) muestra una semivida in vivo de entre 6 horas y 7 días; y/o iv) muestra una semivida in vivo mayor que 8 horas; y/o v) se formula para administración con uno o más agentes terapéuticos seleccionados del grupo que consiste en ciclofosfamida, camptotecina, homocamptotecina, colchicina, combrestatina, combrestatina, rizoxina, dolistatina, ansamitocina p3, maitansinoide, auristatina, calicheamicina, metotrexato, 5-fluorouracilo (5-FU) , doxorrubicina, paclitaxel, docetaxel, cisplatino, carboplatino, tamoxifeno, raloxifeno, letrozol, epirrubicina, bevacizumab, pertuzumab, trastuzumab, en el que preferiblemente dicho uno o más agentes terapéuticos es trastuzumab; y/o vi) comprende dicho ligador de HSA que comprende restos de aminoácido.

2. 44 y restos de aminoácido.

49. 513 de SEC ID NO: 1, en el que preferiblemente dicho ligador de HSA comprende restos de aminoácido.

2. 70 y restos de aminoácido.

45. 513 de SEC ID NO: 1, o restos de aminoácidos 15-100 y restos de aminoácido.

40. 520 de SEC ID NO: 1, o restos de aminoácidos 10-200 y restos de aminoácido.

30. 575 de SEC ID NO: 1, o restos de aminoácidos 5-250 .

27. 580 de SEC ID NO: 1.

12. Un kit que comprende el agente de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 e instrucciones para administrar dicho agente a un paciente, en el que preferiblemente dicho paciente tiene una enfermedad proliferativa, tal como melanoma, sarcoma de células claras, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de vejiga, cáncer de mama, en el que preferiblemente dicho cáncer de mama expresa ErbB2 y opcionalmente dicho cáncer de mama sobreexpresa ErbB2, cáncer de colon, cáncer ovárico, cáncer endometrial, cáncer gástrico, cáncer pancreático, cáncer renal, cáncer de próstata, cáncer de la glándula salival, cáncer de pulmón, cáncer de hígado, cáncer de piel, o cáncer de cerebro.

13. El agente de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, para uso en el tratamiento de un mamífero que tiene una enfermedad proliferativa.

14. El agente para uso según la reivindicación 13, en el que:

i) dicho mamífero es un ser humano; y/o ii) dicha enfermedad proliferativa está asociada con señalización celular a través de un receptor de la superficie celular; y/o iii) dicha enfermedad proliferativa es melanoma, sarcoma de células claras, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer ovárico, cáncer endometrial, cáncer gástrico, cáncer pancreático, cáncer renal, cáncer de próstata, cáncer de la glándula salival, cáncer de pulmón, cáncer hepático, cáncer de piel, o cáncer de cerebro, en el que preferiblemente dicho cáncer de mama expresa ErbB2 y opcionalmente dicho cáncer de mama sobreexpresa ErbB2; y/o iv) dicha enfermedad proliferativa es tumor sólido; y/o v) dicho uso comprende administración en combinación con uno o más agentes terapéuticos seleccionados del grupo que consiste en ciclofosfamida, camptotecina, homocamptotecina, colchicina, combrestatina, rizoxina, dolistatina, ansamitocina p3, maitansinoide, auristatina, calicheamicina, metotrexato, 5-fluorouracilo (5-FU) , doxorrubicina, paclitaxel, docetaxel, cisplatino, carboplatino, tamoxifeno, raloxifeno, letrozol, epirrubicina, bevacizumab, pertuzumab, trastuzumab, natalizumab, infliximab, adalimumab, rituximab, alemtuzumab, daclizumab, efalizumab, golimumab, certolizumab, abatacept, etanercept, cetuximab, panitumumab, anakinra, daunurrubicina, etopósido, irinotecán, mitoxantrona, tenipósido, topotecán, gefitinib, lapatinib, ditosilato de lapatinib, erlotinib, neratinib, tanespimicina, busulfán, clorambicilo, hexametilmelamina, ifosfamida, melfalán, procarbazina, 6-tioguanina, arabinósido de citosina, azatioprina, capecitabina, cladribina, fludarabina, floxuridina, pemetrexed, pentostatina, raltitrexed, dexametasona, prednisona, aldesleukina, cediranib, dasatinib, imatinib, nilotinib, pazopanib, sorafenib, sunitinib, vandetanib, ixabepilona, nanopartícula, paclitaxel, vinblastina, vincristina, vindesina, vinerrelbina, everolimus, sirolimus, temsirolimus, 1-asparaginasa, octreotida, abarelix, afimoxifeno, anastrazol, bicalutamida, buserelina, cetrorelix, exemestano, flutamida, fulvestrant, goserelina, leuprolida, megastrol, estradiol, medroxiprogesterona, nandrolona, nilutamida, toremifeno, pamoato de triptorrelina, enzastaurina, roscovitina, alvocidib, y lonafarnib, en el que preferiblemente dicho uno o más agentes terapéuticos se seleccionan del grupo que consiste en ciclofosfamida, camptotecina, homocamptotecina, colchicina, combrestatina, rizoxina, dolistatina, ansamitocina p3, maitansinoide, auristatina, calicheamicina, metotrexato, 5-fluorouracilo (5-FU) , doxorrubicina, paclitaxel, docetaxel, cisplatino, carboplatino, tamoxifeno, raloxifeno, letrozol, epirrubicina, bevacizumab, pertuzumab, y trastuzumab, y es preferiblemente trastuzumab.

15. Un método para obtener el agente de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, que comprende expresar una molécula polinucleotídica que codifica dicho agente en una célula bacteriana, de insecto, de levadura, o de mamífero, o en un tejido, órgano u organismo de mamífero no humano, en el que preferiblemente dicha molécula polinucleotídica se expresa en dicha célula de mamífero.